| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第11-18页 |
| 1.1 极端环境下的微生物与极端酶 | 第11-13页 |
| 1.1.1 极端环境微生物 | 第11-12页 |
| 1.1.2 极端环境酶 | 第12-13页 |
| 1.2 内切-β-1,4-葡聚糖酶 | 第13-14页 |
| 1.2.1 纤维素简介 | 第13-14页 |
| 1.2.2 内切-β-1,4-葡聚糖酶 | 第14页 |
| 1.3 阿拉伯内切-β-1,4-半乳聚糖酶 | 第14-16页 |
| 1.3.1 乳糖不耐症的简介 | 第14-15页 |
| 1.3.2 嗜热β-半乳糖苷酶 | 第15页 |
| 1.3.3 阿拉伯内切-β-1,4-半乳聚糖酶 | 第15-16页 |
| 1.4 正交试验法优化发酵条件 | 第16页 |
| 1.5 响应面法优化发酵条件 | 第16-17页 |
| 1.5.1 Plackett-Burman设计 | 第16页 |
| 1.5.2 最陡爬坡实验 | 第16页 |
| 1.5.3 响应面实验 | 第16-17页 |
| 1.6 本课题研究意义及内容 | 第17-18页 |
| 2 两种工程菌的获得以及基因序列测定 | 第18-22页 |
| 2.1 实验仪器与实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第18页 |
| 2.1.2 实验药品及溶液配制 | 第18-19页 |
| 2.1.3 含有两种目的基因的表达重组质粒 | 第19页 |
| 2.2 实验原理及方法 | 第19-20页 |
| 2.2.1 氯化钙法制备Ecoli.BL21(DE3)感受态细胞 | 第19-20页 |
| 2.2.2 重组质粒转入感受态细胞获得工程菌 | 第20页 |
| 2.2.3 两种重组菌的保存与基因序列的测定 | 第20页 |
| 2.3 结果与分析 | 第20-21页 |
| 2.4 结论 | 第21-22页 |
| 3 两种酶的表达、纯化与检测酶活 | 第22-45页 |
| 3.1 实验仪器与实验材料 | 第22-26页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第22页 |
| 3.1.2 实验药品及溶液配制 | 第22-26页 |
| 3.1.3 菌种 | 第26页 |
| 3.2 实验原理及方法 | 第26-32页 |
| 3.2.1 两种目的酶的表达 | 第26-28页 |
| 3.2.2 两种工程菌诱导条件的优化 | 第28页 |
| 3.2.3 使用IPTG诱导对两种工程菌的影响 | 第28-29页 |
| 3.2.4 两种目的酶的纯化 | 第29页 |
| 3.2.5 Bradford法测目的酶的浓度 | 第29-30页 |
| 3.2.6 两种目的酶的性质分析以及检测酶活 | 第30-32页 |
| 3.3 结果与分析 | 第32-44页 |
| 3.3.1 TM1525表达纯化与酶活性质分析 | 第32-38页 |
| 3.3.2 TM1201表达纯化与酶活性质分析 | 第38-44页 |
| 3.4 结论 | 第44-45页 |
| 4 正交实验法优化两种工程菌发酵的条件 | 第45-59页 |
| 4.1 实验仪器与实验材料 | 第45-46页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第45页 |
| 4.1.2 实验药品及溶液配制 | 第45-46页 |
| 4.1.3 菌种 | 第46页 |
| 4.2 实验原理及方法 | 第46-48页 |
| 4.2.1 菌体的生长曲线 | 第46页 |
| 4.2.2 菌体测定方法 | 第46页 |
| 4.2.3 纯化前粗酶测定方法 | 第46页 |
| 4.2.4 纯化后粗酶测定方法 | 第46-47页 |
| 4.2.5 影响两种工程菌发酵的主要因素 | 第47-48页 |
| 4.2.6 两种工程菌发酵条件的优化 | 第48页 |
| 4.3 结果与分析 | 第48-58页 |
| 4.3.1 正交实验法优化TM1525工程菌发酵的条件 | 第48-53页 |
| 4.3.2 正交实验法优化TM1201工程菌发酵的条件 | 第53-58页 |
| 4.4 结论 | 第58-59页 |
| 5 响应面法优化两种工程菌发酵条件 | 第59-73页 |
| 5.1 实验仪器与实验材料 | 第59-60页 |
| 5.1.1 实验仪器 | 第59页 |
| 5.1.2 实验药品及溶液配制 | 第59-60页 |
| 5.1.3 菌种 | 第60页 |
| 5.2 实验原理及方法 | 第60-61页 |
| 5.2.1 Plackett-Burman实验 | 第60-61页 |
| 5.2.2 最陡爬坡实验 | 第61页 |
| 5.2.3 响应面实验 | 第61页 |
| 5.2.4 回归模型的验证 | 第61页 |
| 5.3 结果与分析 | 第61-71页 |
| 5.3.1 响应面法优化TM1525工程菌发酵条件 | 第61-66页 |
| 5.3.2 响应面法优化TM1201工程菌发酵条件 | 第66-71页 |
| 5.4 结论 | 第71-73页 |
| 6 总结与思考 | 第73-75页 |
| 6.1 总结 | 第73页 |
| 6.2 本课题创新点 | 第73页 |
| 6.3 本课题存在的主要问题 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
