| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1.1 癫痫及其治疗药物概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 癫痫病简介 | 第12页 |
| 1.1.2 抗癫痫药物简介 | 第12-14页 |
| 1.2 左乙拉西坦简介 | 第14-15页 |
| 1.3 左乙拉西坦的制备路线介绍 | 第15-23页 |
| 1.3.1 化学法 | 第15-21页 |
| 1.3.2 色谱分离法 | 第21页 |
| 1.3.3 生物法 | 第21-23页 |
| 1.4 微生物酯酶概述 | 第23-26页 |
| 1.5 本论文的研究背景、内容及意义 | 第26-28页 |
| 第二章 Bacillus cereus WZZ001胞内酯酶的纯化及酶学性质研究 | 第28-48页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.2.1 菌种 | 第28-29页 |
| 2.2.2 培养基 | 第29页 |
| 2.2.3 缓冲液 | 第29页 |
| 2.2.4 试剂与材料 | 第29-30页 |
| 2.2.5 主要仪器 | 第30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-36页 |
| 2.3.1 菌种培养 | 第30-31页 |
| 2.3.2 酯酶的分离 | 第31-33页 |
| 2.3.3 蛋白质浓度测定 | 第33页 |
| 2.3.4 酶活力测定 | 第33-34页 |
| 2.3.5 SDS-PAGE对酯酶纯度的检测和分子量确定 | 第34页 |
| 2.3.6 蛋白质电转膜及N-端序列测定 | 第34-35页 |
| 2.3.7 酯酶酶学性质研究 | 第35-36页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第36-46页 |
| 2.4.1 胞内酯酶的分离与纯化 | 第36-40页 |
| 2.4.2 酯酶电转膜及N-端序列测定 | 第40-41页 |
| 2.4.3 酯酶酶学性质研究 | 第41-46页 |
| 2.5 本章小结与讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 Bacillus cereus WZZ001酯酶基因克隆与表达 | 第48-68页 |
| 3.1 引言 | 第48页 |
| 3.2 实验材料 | 第48-50页 |
| 3.2.1 菌种及质粒载体 | 第48-49页 |
| 3.2.2 试剂与材料 | 第49页 |
| 3.2.3 培养基 | 第49页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第49-50页 |
| 3.3 实验方法 | 第50-54页 |
| 3.3.1 菌种培养 | 第50页 |
| 3.3.2 引物设计 | 第50-51页 |
| 3.3.3 基因组的提取 | 第51页 |
| 3.3.4 目的基因PCR扩增 | 第51-52页 |
| 3.3.5 重组表达载体pEASY-E1-est的构建及鉴定 | 第52页 |
| 3.3.6 重组质粒pEASY-E1-est的表达 | 第52-53页 |
| 3.3.7 产酶条件优化 | 第53页 |
| 3.3.8 重组酯酶活力测定 | 第53-54页 |
| 3.3.9 重组酯酶的序列分析及同源建模 | 第54页 |
| 3.4 实验结果 | 第54-65页 |
| 3.4.1 基因组提取及目的基因PCR扩增 | 第54-55页 |
| 3.4.2 阳性重组子鉴定 | 第55-56页 |
| 3.4.3 基因测序鉴定 | 第56-57页 |
| 3.4.4 重组蛋白的诱导表达 | 第57-58页 |
| 3.4.5 产酶条件优化结果 | 第58-60页 |
| 3.4.6 B.cereus WZZ001酯酶的结构分析 | 第60-65页 |
| 3.5 本章小结及讨论 | 第65-68页 |
| 第四章 重组菌在左乙拉西坦制备中的应用 | 第68-82页 |
| 4.1 引言 | 第68-69页 |
| 4.2 实验材料 | 第69-70页 |
| 4.2.1 菌种 | 第69页 |
| 4.2.2 试剂 | 第69页 |
| 4.2.3 培养基 | 第69-70页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第70页 |
| 4.3 实验方法 | 第70-73页 |
| 4.3.1 R,S-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸甲酯的合成 | 第70-71页 |
| 4.3.2 生物催化条件优化 | 第71-72页 |
| 4.3.3 左乙拉西坦的合成 | 第72页 |
| 4.3.4 (R)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸消旋化 | 第72-73页 |
| 4.3.5 α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸衍生化 | 第73页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第73-80页 |
| 4.4.1 R,S-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸甲酯的合成 | 第73-74页 |
| 4.4.2 生物法拆分R,S-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸甲酯 | 第74-79页 |
| 4.4.3 左乙拉西坦的合成 | 第79-80页 |
| 4.4.4 酶水解产物的鉴定 | 第80页 |
| 4.5 小结与讨论 | 第80-82页 |
| 第五章 结论与展望 | 第82-84页 |
| 5.1 结论 | 第82-83页 |
| 5.2 展望 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第89页 |
