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蜡样芽孢杆菌酯酶的分离纯化、基因克隆与表达及其应用研究

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-8页
第一章 文献综述第12-28页
    1.1 癫痫及其治疗药物概述第12-14页
        1.1.1 癫痫病简介第12页
        1.1.2 抗癫痫药物简介第12-14页
    1.2 左乙拉西坦简介第14-15页
    1.3 左乙拉西坦的制备路线介绍第15-23页
        1.3.1 化学法第15-21页
        1.3.2 色谱分离法第21页
        1.3.3 生物法第21-23页
    1.4 微生物酯酶概述第23-26页
    1.5 本论文的研究背景、内容及意义第26-28页
第二章 Bacillus cereus WZZ001胞内酯酶的纯化及酶学性质研究第28-48页
    2.1 引言第28页
    2.2 实验材料第28-30页
        2.2.1 菌种第28-29页
        2.2.2 培养基第29页
        2.2.3 缓冲液第29页
        2.2.4 试剂与材料第29-30页
        2.2.5 主要仪器第30页
    2.3 实验方法第30-36页
        2.3.1 菌种培养第30-31页
        2.3.2 酯酶的分离第31-33页
        2.3.3 蛋白质浓度测定第33页
        2.3.4 酶活力测定第33-34页
        2.3.5 SDS-PAGE对酯酶纯度的检测和分子量确定第34页
        2.3.6 蛋白质电转膜及N-端序列测定第34-35页
        2.3.7 酯酶酶学性质研究第35-36页
    2.4 实验结果与讨论第36-46页
        2.4.1 胞内酯酶的分离与纯化第36-40页
        2.4.2 酯酶电转膜及N-端序列测定第40-41页
        2.4.3 酯酶酶学性质研究第41-46页
    2.5 本章小结与讨论第46-48页
第三章 Bacillus cereus WZZ001酯酶基因克隆与表达第48-68页
    3.1 引言第48页
    3.2 实验材料第48-50页
        3.2.1 菌种及质粒载体第48-49页
        3.2.2 试剂与材料第49页
        3.2.3 培养基第49页
        3.2.4 主要仪器第49-50页
    3.3 实验方法第50-54页
        3.3.1 菌种培养第50页
        3.3.2 引物设计第50-51页
        3.3.3 基因组的提取第51页
        3.3.4 目的基因PCR扩增第51-52页
        3.3.5 重组表达载体pEASY-E1-est的构建及鉴定第52页
        3.3.6 重组质粒pEASY-E1-est的表达第52-53页
        3.3.7 产酶条件优化第53页
        3.3.8 重组酯酶活力测定第53-54页
        3.3.9 重组酯酶的序列分析及同源建模第54页
    3.4 实验结果第54-65页
        3.4.1 基因组提取及目的基因PCR扩增第54-55页
        3.4.2 阳性重组子鉴定第55-56页
        3.4.3 基因测序鉴定第56-57页
        3.4.4 重组蛋白的诱导表达第57-58页
        3.4.5 产酶条件优化结果第58-60页
        3.4.6 B.cereus WZZ001酯酶的结构分析第60-65页
    3.5 本章小结及讨论第65-68页
第四章 重组菌在左乙拉西坦制备中的应用第68-82页
    4.1 引言第68-69页
    4.2 实验材料第69-70页
        4.2.1 菌种第69页
        4.2.2 试剂第69页
        4.2.3 培养基第69-70页
        4.2.4 主要仪器第70页
    4.3 实验方法第70-73页
        4.3.1 R,S-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸甲酯的合成第70-71页
        4.3.2 生物催化条件优化第71-72页
        4.3.3 左乙拉西坦的合成第72页
        4.3.4 (R)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸消旋化第72-73页
        4.3.5 α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸衍生化第73页
    4.4 结果与讨论第73-80页
        4.4.1 R,S-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸甲酯的合成第73-74页
        4.4.2 生物法拆分R,S-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸甲酯第74-79页
        4.4.3 左乙拉西坦的合成第79-80页
        4.4.4 酶水解产物的鉴定第80页
    4.5 小结与讨论第80-82页
第五章 结论与展望第82-84页
    5.1 结论第82-83页
    5.2 展望第83-84页
参考文献第84-88页
致谢第88-89页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第89页

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