| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 第1章 引言 | 第13-19页 |
| 1.1 杂色鲍的研究现状 | 第13页 |
| 1.1.1 杂色鲍的养殖 | 第13页 |
| 1.1.2 研究杂色鲍疾病原因和意义 | 第13页 |
| 1.2 先天性免疫系统的发生 | 第13-15页 |
| 1.2.1 软体动物的先天性免疫系统 | 第14页 |
| 1.2.2 软体动物发育过程中免疫系统的发生 | 第14-15页 |
| 1.3 MyD88研究进展 | 第15-17页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 1.5 主要研究内容 | 第18-19页 |
| 第2章 材料和方法 | 第19-34页 |
| 2.1 材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第19页 |
| 2.1.2 主要仪器和试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.3 引物 | 第20-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 总RNA提取(RDP试剂) | 第22页 |
| 2.2.2 cDNA模板第一链的合成 | 第22-23页 |
| 2.2.3 目的基因片段克隆 | 第23-25页 |
| 2.2.4 目的基因的生物信息学分析 | 第25-26页 |
| 2.3 杂色鲍幼体发育实验 | 第26页 |
| 2.3.1 亲贝的培育及繁育 | 第26页 |
| 2.3.2 胚胎和幼虫的采集 | 第26页 |
| 2.4 杂色鲍幼体RNAi | 第26-28页 |
| 2.4.1 获得正向反向插入片段 | 第26-27页 |
| 2.4.2 扩增线性化的cDNA模板 | 第27页 |
| 2.4.3 合成dsRNA | 第27页 |
| 2.4.4 RNAi干扰 | 第27-28页 |
| 2.4.5 实时荧光定量PCR | 第28页 |
| 2.5 整胚原位杂交 | 第28-30页 |
| 2.5.1 合成DIG-标记的RNA探针 | 第28-29页 |
| 2.5.2 幼体培养和干扰条件下的弧菌刺激实验 | 第29页 |
| 2.5.3 原位杂交 | 第29-30页 |
| 2.6 杂色鲍原代细胞培养 | 第30-31页 |
| 2.6.1 杂色鲍前期处理 | 第30页 |
| 2.6.2 血淋巴、鳃和粘液腺组织的处理 | 第30页 |
| 2.6.3 转染pEGFP-N1质粒 | 第30-31页 |
| 2.6.4 RNAi干扰 | 第31页 |
| 2.7 MyD88蛋白原核表达和纯化 | 第31-33页 |
| 2.7.1 构建MyD88-pet22b/28a/32a | 第31-32页 |
| 2.7.2 重组载体MyD88-pet22b/28a/32a的小量表达 | 第32页 |
| 2.7.3 SDS-PAGE和纯化 | 第32-33页 |
| 2.8 转染293FT细胞 | 第33-34页 |
| 2.8.1 构建MyD88-pEGFP-N1 | 第33页 |
| 2.8.2 转染真核细胞 | 第33-34页 |
| 第3章 结果 | 第34-60页 |
| 3.1 杂色鲍各组织总RNA的抽提结果 | 第34页 |
| 3.2 目的基因片克隆结果 | 第34-35页 |
| 3.3 hdMyD88和hdMyD88-2生物信息学分析 | 第35-43页 |
| 3.3.1 hdMyD88序列分析 | 第35-37页 |
| 3.3.2 hdMyD88-2序列分析 | 第37-38页 |
| 3.3.3 hdMyD88和hdMyD88-2氨基酸序列比对和系统发育分析 | 第38-42页 |
| 3.3.4 hdMyD88和hdMyD88-2三级结构预测 | 第42-43页 |
| 3.4 免疫基因在个体发育过程中的表达模式 | 第43-51页 |
| 3.4.1 杂色鲍发育过程 | 第43-44页 |
| 3.4.2 杂色鲍MyD88相关免疫基因在幼体发育各阶段的基因表达 | 第44-45页 |
| 3.4.3 dsRNA设计和制备 | 第45-46页 |
| 3.4.4 MyD88RNAi对幼虫相关免疫基因mRNA表达的影响 | 第46-50页 |
| 3.4.5 MyD88RNAi和弧菌应激下幼虫发育的基因原位表达 | 第50-51页 |
| 3.5 原代细胞培养 | 第51-54页 |
| 3.5.1 原代细胞形态观察及培养条件优化 | 第51-53页 |
| 3.5.2 转染外源基因表达情况 | 第53页 |
| 3.5.3 MyD88dsRNA对血细胞和鳃中MyD88表达的影响 | 第53-54页 |
| 3.6 MyD88原核表达和纯化 | 第54-58页 |
| 3.6.1 构建重组表达载体MyD88-pet22b/28a/32a | 第54-56页 |
| 3.6.2 重组表达载体MyD88-pet22b/28a/32a的诱导表达 | 第56-57页 |
| 3.6.3 MyD88密码子预测分析 | 第57-58页 |
| 3.6.4 MyD88的纯化 | 第58页 |
| 3.7 转染293FT细胞 | 第58-60页 |
| 3.7.1 构建重组表达载体MyD88-pEGFP-N1 | 第58-59页 |
| 3.7.2 表达载体MyD88-pEGFP-N1真核表达 | 第59-60页 |
| 第4章 讨论 | 第60-66页 |
| 4.1 两种骨髓样分化因子88 | 第60-61页 |
| 4.2 杂色鲍胚胎发育过程中母源免疫表达方式 | 第61-62页 |
| 4.3 干扰MyD88后相关免疫基因的变化 | 第62-63页 |
| 4.4 MyD88的空间表达 | 第63页 |
| 4.5 杂色鲍原代细胞培养 | 第63-66页 |
| 4.5.1 培养基渗透压确定 | 第63-64页 |
| 4.5.2 原代细胞的处理 | 第64页 |
| 4.5.3 MyD88dsRNA对血细胞和鳃中MyD88表达的影响 | 第64-65页 |
| 4.5.4 转染pEGFP-N1质粒 | 第65-66页 |
| 第5章 结论和展望 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第75页 |
