| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 黑色素简介 | 第12-13页 |
| 1.1.1 黑色素介绍 | 第12页 |
| 1.1.2 黑色素的应用 | 第12-13页 |
| 1.2 微生物产黑色素 | 第13-16页 |
| 1.2.1 微生物产黑色素种类 | 第13-14页 |
| 1.2.2 微生物产黑色素途径 | 第14-16页 |
| 1.3 酪氨酸酶 | 第16-18页 |
| 1.3.1 酪氨酸酶及其相关蛋白家族 | 第16-17页 |
| 1.3.2 酪氨酸酶的结构及反应机制 | 第17-18页 |
| 1.4 酪氨酸酶的研究 | 第18-20页 |
| 1.5 本课题的研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 海洋产黑色素菌株的筛选及鉴定 | 第21-34页 |
| 2.1 试验材料与仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.1 样品来源 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 仪器及设备 | 第22页 |
| 2.2 培养基 | 第22-23页 |
| 2.3 试验方法 | 第23-25页 |
| 2.3.1 产黑色素菌株的筛选与分离 | 第23页 |
| 2.3.2 菌株生理生化及形态鉴定 | 第23页 |
| 2.3.3 菌株产黑色素情况观察 | 第23页 |
| 2.3.4 黑色素的制备及溶解性研究 | 第23-24页 |
| 2.3.5 酪氨酸酶测定 | 第24页 |
| 2.3.6 产黑色素菌株基因组DNA的提取及16S rDNA鉴定 | 第24-25页 |
| 2.4 结果与分析 | 第25-34页 |
| 2.4.1 产黑色素菌株的菌株筛选与分离 | 第25-26页 |
| 2.4.2 菌株形态观察、革兰氏鉴定与生理生化鉴定 | 第26-27页 |
| 2.4.3 菌株产黑色素情况观察 | 第27-28页 |
| 2.4.4 黑色素的制备及溶解性的研究 | 第28-29页 |
| 2.4.5 酪氨酸酶测定 | 第29-30页 |
| 2.4.6 产黑色素菌株基因组DNA的提取及16S rDNA分子生物学鉴定 | 第30-34页 |
| 第三章 假交替单胞菌XH2的培养及产黑色素条件研究 | 第34-42页 |
| 3.1 试验药品及设备 | 第34页 |
| 3.1.1 菌种选择 | 第34页 |
| 3.1.2 实验药品及仪器 | 第34页 |
| 3.2 试验方法 | 第34-35页 |
| 3.2.1 温度对菌株P.XH2生长及产黑色素的影响 | 第34页 |
| 3.2.2 培养基pH值对菌株P.XH2生长及产黑色素的影响 | 第34-35页 |
| 3.2.3 NaCl浓度对菌株P.XH2的生长及产黑色素的影响 | 第35页 |
| 3.2.4 L-Tyr对菌株P.XH2的生长及产黑色素的影响 | 第35页 |
| 3.2.5 CaCl_2含量对菌株P.XH2的生长及产黑色素的影响 | 第35页 |
| 3.2.6 菌株生长曲线及产黑色素情况的测定 | 第35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-42页 |
| 3.3.1 温度对菌株P.XH2的生长及产黑色素的影响 | 第35-36页 |
| 3.3.2 pH对菌株P.XH2的生长及产黑色素的影响 | 第36-37页 |
| 3.3.3 NaCl浓度对菌株P.XH2的生长及产黑色素的影响 | 第37-38页 |
| 3.3.4 不同L-Tyr对菌株P.XH2的生长及产黑色素的影响 | 第38-39页 |
| 3.3.5 CaCl_2含量对菌株P.XH2的生长及产黑色素的影响 | 第39页 |
| 3.3.6 菌株生长曲线及产黑色素情况的测定 | 第39-42页 |
| 第四章 假交替单胞菌XH2酪氨酸酶基因的克隆 | 第42-55页 |
| 4.1 材料和试剂 | 第42页 |
| 4.1.1 菌株 | 第42页 |
| 4.1.2 试剂及试剂盒 | 第42页 |
| 4.1.3 仪器及设备 | 第42页 |
| 4.2 培养基与试剂 | 第42-43页 |
| 4.2.1 培养基 | 第42-43页 |
| 4.2.2 溶液的配制 | 第43页 |
| 4.3 试验方法 | 第43-48页 |
| 4.3.1 引物设计 | 第43-44页 |
| 4.3.2 退火温度的选择 | 第44-45页 |
| 4.3.3 P.XH2酪氨酸酶基因的克隆 | 第45页 |
| 4.3.4 PCR产物回收 | 第45-46页 |
| 4.3.5 大肠杆菌DH5α感受态的制备(CaCl_2法) | 第46页 |
| 4.3.6 目的片段的连接及转化 | 第46页 |
| 4.3.7 重组质粒的菌落PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 4.3.8 重组质粒鉴定 | 第47-48页 |
| 4.3.8.1 重组质粒的提取 | 第47页 |
| 4.3.8.2 重组质粒鉴定 | 第47-48页 |
| 4.3.9 重组质粒双酶切验证 | 第48页 |
| 4.4 结果与分析 | 第48-55页 |
| 4.4.1 目的基因的扩增 | 第48-49页 |
| 4.4.2 目的片段的回收 | 第49-50页 |
| 4.4.3 重组质粒菌落PCR | 第50页 |
| 4.4.4 重组质粒的提取 | 第50-51页 |
| 4.4.5 重组质粒PCR鉴定 | 第51页 |
| 4.4.6 重组质粒双酶切鉴定 | 第51-52页 |
| 4.4.7 目的片段测序结果及序列分析 | 第52-55页 |
| 第五章 目的基因生物信息学分析 | 第55-62页 |
| 5.1 分析方法 | 第55页 |
| 5.1.1 生物信息学分析网站 | 第55页 |
| 5.2 结果与分析 | 第55-62页 |
| 5.2.1 氨基酸序列翻译与分析 | 第55页 |
| 5.2.2 蛋白性质的预测和分析 | 第55-57页 |
| 5.2.3 拟表达蛋白二级结构预测 | 第57-58页 |
| 5.2.4 疏水性/亲水性分析 | 第58页 |
| 5.2.5 拟表达蛋白信号肽预测 | 第58-59页 |
| 5.2.6 磷酸化位点的预测和分析 | 第59-60页 |
| 5.2.7 拟表达蛋白跨膜结构的预测和分析 | 第60页 |
| 5.2.8 拟表达蛋白三级结构的预测和分析 | 第60-62页 |
| 第六章 目的基因原核表达分析 | 第62-72页 |
| 6.1 实验材料 | 第62-63页 |
| 6.1.1 实验菌株及表达载体 | 第62页 |
| 6.1.2 实验试剂 | 第62-63页 |
| 6.2 试验方法 | 第63-66页 |
| 6.2.1 表达载体的构建 | 第63-64页 |
| 6.2.2 感受态的制备 | 第64页 |
| 6.2.3 重组质粒转化 | 第64页 |
| 6.2.4 菌落PCR鉴定 | 第64页 |
| 6.2.5 重组质粒提取及鉴定 | 第64页 |
| 6.2.6 重组质粒双酶切鉴定 | 第64页 |
| 6.2.7 诱导生长动力学 | 第64页 |
| 6.2.8 目的基因诱导表达 | 第64-65页 |
| 6.2.9 SDS-PAGE | 第65-66页 |
| 6.3 实验结果 | 第66-72页 |
| 6.3.1 双酶切结果 | 第66页 |
| 6.3.2 酶切产物回收结果 | 第66-67页 |
| 6.3.3 重组质粒菌落PCR鉴定 | 第67-68页 |
| 6.3.4 重组质粒的提取 | 第68页 |
| 6.3.5 重组质粒PCR鉴定 | 第68-69页 |
| 6.3.6 质粒双酶切鉴定 | 第69页 |
| 6.3.7 重组菌诱导生长动力学实验结果 | 第69-70页 |
| 6.3.8 目的基因诱导表达及SDS-PAGE结果分析 | 第70-72页 |
| 第七章 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
