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海洋产黑色素菌株筛选及其酪氨酸酶基因研究

摘要第4-5页
abstract第5-6页
第一章 文献综述第12-21页
    1.1 黑色素简介第12-13页
        1.1.1 黑色素介绍第12页
        1.1.2 黑色素的应用第12-13页
    1.2 微生物产黑色素第13-16页
        1.2.1 微生物产黑色素种类第13-14页
        1.2.2 微生物产黑色素途径第14-16页
    1.3 酪氨酸酶第16-18页
        1.3.1 酪氨酸酶及其相关蛋白家族第16-17页
        1.3.2 酪氨酸酶的结构及反应机制第17-18页
    1.4 酪氨酸酶的研究第18-20页
    1.5 本课题的研究目的及意义第20-21页
第二章 海洋产黑色素菌株的筛选及鉴定第21-34页
    2.1 试验材料与仪器第21-22页
        2.1.1 样品来源第21页
        2.1.2 主要试剂第21-22页
        2.1.3 仪器及设备第22页
    2.2 培养基第22-23页
    2.3 试验方法第23-25页
        2.3.1 产黑色素菌株的筛选与分离第23页
        2.3.2 菌株生理生化及形态鉴定第23页
        2.3.3 菌株产黑色素情况观察第23页
        2.3.4 黑色素的制备及溶解性研究第23-24页
        2.3.5 酪氨酸酶测定第24页
        2.3.6 产黑色素菌株基因组DNA的提取及16S rDNA鉴定第24-25页
    2.4 结果与分析第25-34页
        2.4.1 产黑色素菌株的菌株筛选与分离第25-26页
        2.4.2 菌株形态观察、革兰氏鉴定与生理生化鉴定第26-27页
        2.4.3 菌株产黑色素情况观察第27-28页
        2.4.4 黑色素的制备及溶解性的研究第28-29页
        2.4.5 酪氨酸酶测定第29-30页
        2.4.6 产黑色素菌株基因组DNA的提取及16S rDNA分子生物学鉴定第30-34页
第三章 假交替单胞菌XH2的培养及产黑色素条件研究第34-42页
    3.1 试验药品及设备第34页
        3.1.1 菌种选择第34页
        3.1.2 实验药品及仪器第34页
    3.2 试验方法第34-35页
        3.2.1 温度对菌株P.XH2生长及产黑色素的影响第34页
        3.2.2 培养基pH值对菌株P.XH2生长及产黑色素的影响第34-35页
        3.2.3 NaCl浓度对菌株P.XH2的生长及产黑色素的影响第35页
        3.2.4 L-Tyr对菌株P.XH2的生长及产黑色素的影响第35页
        3.2.5 CaCl_2含量对菌株P.XH2的生长及产黑色素的影响第35页
        3.2.6 菌株生长曲线及产黑色素情况的测定第35页
    3.3 结果与分析第35-42页
        3.3.1 温度对菌株P.XH2的生长及产黑色素的影响第35-36页
        3.3.2 pH对菌株P.XH2的生长及产黑色素的影响第36-37页
        3.3.3 NaCl浓度对菌株P.XH2的生长及产黑色素的影响第37-38页
        3.3.4 不同L-Tyr对菌株P.XH2的生长及产黑色素的影响第38-39页
        3.3.5 CaCl_2含量对菌株P.XH2的生长及产黑色素的影响第39页
        3.3.6 菌株生长曲线及产黑色素情况的测定第39-42页
第四章 假交替单胞菌XH2酪氨酸酶基因的克隆第42-55页
    4.1 材料和试剂第42页
        4.1.1 菌株第42页
        4.1.2 试剂及试剂盒第42页
        4.1.3 仪器及设备第42页
    4.2 培养基与试剂第42-43页
        4.2.1 培养基第42-43页
        4.2.2 溶液的配制第43页
    4.3 试验方法第43-48页
        4.3.1 引物设计第43-44页
        4.3.2 退火温度的选择第44-45页
        4.3.3 P.XH2酪氨酸酶基因的克隆第45页
        4.3.4 PCR产物回收第45-46页
        4.3.5 大肠杆菌DH5α感受态的制备(CaCl_2法)第46页
        4.3.6 目的片段的连接及转化第46页
        4.3.7 重组质粒的菌落PCR鉴定第46-47页
        4.3.8 重组质粒鉴定第47-48页
            4.3.8.1 重组质粒的提取第47页
            4.3.8.2 重组质粒鉴定第47-48页
        4.3.9 重组质粒双酶切验证第48页
    4.4 结果与分析第48-55页
        4.4.1 目的基因的扩增第48-49页
        4.4.2 目的片段的回收第49-50页
        4.4.3 重组质粒菌落PCR第50页
        4.4.4 重组质粒的提取第50-51页
        4.4.5 重组质粒PCR鉴定第51页
        4.4.6 重组质粒双酶切鉴定第51-52页
        4.4.7 目的片段测序结果及序列分析第52-55页
第五章 目的基因生物信息学分析第55-62页
    5.1 分析方法第55页
        5.1.1 生物信息学分析网站第55页
    5.2 结果与分析第55-62页
        5.2.1 氨基酸序列翻译与分析第55页
        5.2.2 蛋白性质的预测和分析第55-57页
        5.2.3 拟表达蛋白二级结构预测第57-58页
        5.2.4 疏水性/亲水性分析第58页
        5.2.5 拟表达蛋白信号肽预测第58-59页
        5.2.6 磷酸化位点的预测和分析第59-60页
        5.2.7 拟表达蛋白跨膜结构的预测和分析第60页
        5.2.8 拟表达蛋白三级结构的预测和分析第60-62页
第六章 目的基因原核表达分析第62-72页
    6.1 实验材料第62-63页
        6.1.1 实验菌株及表达载体第62页
        6.1.2 实验试剂第62-63页
    6.2 试验方法第63-66页
        6.2.1 表达载体的构建第63-64页
        6.2.2 感受态的制备第64页
        6.2.3 重组质粒转化第64页
        6.2.4 菌落PCR鉴定第64页
        6.2.5 重组质粒提取及鉴定第64页
        6.2.6 重组质粒双酶切鉴定第64页
        6.2.7 诱导生长动力学第64页
        6.2.8 目的基因诱导表达第64-65页
        6.2.9 SDS-PAGE第65-66页
    6.3 实验结果第66-72页
        6.3.1 双酶切结果第66页
        6.3.2 酶切产物回收结果第66-67页
        6.3.3 重组质粒菌落PCR鉴定第67-68页
        6.3.4 重组质粒的提取第68页
        6.3.5 重组质粒PCR鉴定第68-69页
        6.3.6 质粒双酶切鉴定第69页
        6.3.7 重组菌诱导生长动力学实验结果第69-70页
        6.3.8 目的基因诱导表达及SDS-PAGE结果分析第70-72页
第七章 结论第72-73页
参考文献第73-77页
致谢第77页

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