| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略表 | 第20-23页 |
| 第一章 绪论 | 第23-32页 |
| 1.1 白血病的危害及病因 | 第23-24页 |
| 1.2 白血病细胞的生物学特性 | 第24-26页 |
| 1.3 nestin与恶性肿瘤 | 第26-27页 |
| 1.4 RNA干扰(RNAi)技术 | 第27-30页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第30-31页 |
| 技术路线 | 第31-32页 |
| 第二章 nestin在白血病患者中的表达及临床意义 | 第32-59页 |
| 2.1 引言 | 第32-33页 |
| 2.2 实验材料 | 第33-37页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第33-34页 |
| 2.2.2 主要耗材 | 第34-35页 |
| 2.2.3 仪器设备 | 第35-36页 |
| 2.2.4 实验试剂配制方法 | 第36-37页 |
| 2.3 实验方法 | 第37-46页 |
| 2.3.1 样本及临床信息的收集 | 第37-39页 |
| 2.3.2 RT-PCR检测白血病患者外周血单个核细胞中nestin基因的表达 | 第39-43页 |
| 2.3.3 western blot检测白血病患者骨髓细胞中nestin蛋白的表达 | 第43-45页 |
| 2.3.4 免疫组化检测nestin在白血病患者骨髓细胞中的表达 | 第45-46页 |
| 2.3.5 统计分析 | 第46页 |
| 2.4 实验结果 | 第46-56页 |
| 2.4.1 Nestin mRNA在髓系白血病患者外周血MNC中的表达 | 第46-51页 |
| 2.4.2 Western blot检测Nestin蛋白在髓系白血病患者骨髓MNC中的表达 | 第51-56页 |
| 2.5 分析 | 第56-58页 |
| 2.5.1 Nestin mRNA、蛋白在白血病患者中表达 | 第56-57页 |
| 2.5.2 Nestin mRNA、蛋白表达水平与白细胞数目的关系 | 第57-58页 |
| 2.5.3 Nestin蛋白表达与CML病程的关系 | 第58页 |
| 2.6 小结 | 第58-59页 |
| 第三章 RNA干扰Nestin基因对白血病K562细胞恶性生物学行为的影响 | 第59-86页 |
| 3.1 研究背景 | 第59页 |
| 3.2 实验材料和设备 | 第59-62页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第59-60页 |
| 3.2.2 实验主要试剂 | 第60-61页 |
| 3.2.3 主要仪器设备 | 第61-62页 |
| 3.2.4 实验耗材 | 第62页 |
| 3.3 实验方法 | 第62-70页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第62-63页 |
| 3.3.2 siRNA干扰K562细胞nestin基因表达 | 第63-64页 |
| 3.3.3 RNA提取 | 第64页 |
| 3.3.4 逆转录及PCR | 第64-66页 |
| 3.3.5 MTS检测细胞活性 | 第66页 |
| 3.3.6 流式检测细胞周期 | 第66页 |
| 3.3.7 流式检测细胞凋亡 | 第66-67页 |
| 3.3.8 Transwell检测细胞侵袭能力 | 第67页 |
| 3.3.9 WB检测K562细胞侵袭转移相关蛋白的表达 | 第67-70页 |
| 3.4 实验结果 | 第70-79页 |
| 3.4.1 细胞培养 | 第70页 |
| 3.4.2 Nestin蛋白在髓系白血病细胞株的表达情况 | 第70页 |
| 3.4.3 siRNA干扰K562细胞nestin表达 | 第70-72页 |
| 3.4.4 K562细胞形态变化 | 第72页 |
| 3.4.5 MTS检测细胞活性 | 第72-73页 |
| 3.4.6 细胞周期 | 第73-74页 |
| 3.4.7 细胞凋亡 | 第74-75页 |
| 3.4.8 细胞侵袭能力 | 第75-76页 |
| 3.4.9 western blot检测侵袭转移相关蛋白表达的变化 | 第76-79页 |
| 3.5 分析 | 第79-85页 |
| 3.5.1 细胞株的筛选 | 第79页 |
| 3.5.2 抑制nestin对K562细胞生长的影响 | 第79页 |
| 3.5.3 抑制nestin对K562细胞周期的影响 | 第79-80页 |
| 3.5.4 抑制nestin对K562细胞凋亡的影响 | 第80页 |
| 3.5.5 抑制nestin对K562细胞侵袭能力的影响 | 第80-81页 |
| 3.5.6 抑制nestin对HSP-70表达的影响 | 第81-82页 |
| 3.5.7 抑制nestin对VEGF表达的影响 | 第82-83页 |
| 3.5.8 抑制nestin对MMP-2、MMP9表达的影响 | 第83-85页 |
| 3.6 本章小结 | 第85-86页 |
| 第四章 下调Nestin基因表达对黄芩皂苷抑制白血病K562细胞生长的影响 | 第86-91页 |
| 4.1 前言 | 第86页 |
| 4.2 实验材料及仪器 | 第86-87页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第86页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第86页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第86-87页 |
| 4.3 实验方法 | 第87页 |
| 4.3.1 黄芩药物浓度筛选 | 第87页 |
| 4.3.2 干扰nestin基因表达对K562细胞药物敏感性的影响 | 第87页 |
| 4.4 实验结果 | 第87-89页 |
| 4.4.1 黄芩药物浓度筛选 | 第87-88页 |
| 4.4.2 干扰nestin基因表达对K562细胞药物敏感性影响 | 第88-89页 |
| 4.5 讨论 | 第89-90页 |
| 4.6 本章小结 | 第90-91页 |
| 全文总结 | 第91-92页 |
| 第5章 细胞骨架蛋白Nestin在恶性血液肿瘤中的研究进展 | 第92-100页 |
| 5.1 Nestin~+细胞在正常骨髓微环境中的作用 | 第92-93页 |
| 5.2 Nestin蛋白在白血病中的作用机制 | 第93-95页 |
| 5.2.1 Nestin~+细胞参与骨髓病变 | 第93页 |
| 5.2.2 Nestin蛋白参与急性淋巴白血病干细胞保护性niche的构建 | 第93-95页 |
| 5.2.3 Nestin~+细胞参与AML白血病细胞对骨髓的损伤 | 第95页 |
| 5.3 恶性血液肿瘤患者的nestin蛋白表达情况 | 第95-96页 |
| 5.3.1 Nestin蛋白在骨髓增生异常综合症患者病情恶化阶段表达 | 第95-96页 |
| 5.3.2 Nestin蛋白可作为诊断急性白血病的标志物 | 第96页 |
| 5.4 总结 | 第96-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-110页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文 | 第110-111页 |
| 附录B 其他需要说明的内容 | 第111页 |
