| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩写和符号清单 | 第17-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-38页 |
| 1 植物miRNA研究进展 | 第20-31页 |
| 1.1 植物miRNA的生物合成及作用机制 | 第20-21页 |
| 1.2 植物miRNA的功能 | 第21-28页 |
| 1.2.1 miRNA参与植物生长发育和激素调节 | 第22-24页 |
| 1.2.2 miRNA参与植物逆境响应调节 | 第24-28页 |
| 1.3 植物miRNA的常用研究方法 | 第28-31页 |
| 1.3.1 植物miRNA的获取途径 | 第28-30页 |
| 1.3.2 靶标基因的预测和验证 | 第30-31页 |
| 2 水稻响应高温胁迫的生理机制研究 | 第31-33页 |
| 2.1 高温胁迫与植物光合作用 | 第31-32页 |
| 2.2 高温胁迫与植物膜脂氧化、膜保护酶系统 | 第32页 |
| 2.3 高温胁迫与植物渗透调节物质 | 第32-33页 |
| 3 水稻高温热害的分子机制研究 | 第33-34页 |
| 4 水稻应答非生物学逆境miRNA的研究 | 第34-35页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第35页 |
| 6 研究内容 | 第35-37页 |
| 6.1 水稻响应高温胁迫的miRNA发掘和鉴定 | 第35-36页 |
| 6.2 水稻miRNA靶基因的降解组测序与表达模式分析 | 第36页 |
| 6.3 水稻响应高温胁迫的miRNA的过表达分析 | 第36-37页 |
| 7 技术路线 | 第37-38页 |
| 第二章 水稻高温胁迫相关miRNA的分离与鉴定 | 第38-62页 |
| 引言 | 第38页 |
| 1 材料与方法 | 第38-44页 |
| 1.1 试验材料 | 第38-39页 |
| 1.2 主要试剂 | 第39页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第39页 |
| 1.4 实验相关的数据库及软件 | 第39-40页 |
| 1.5 实验方法 | 第40-44页 |
| 1.5.1 水稻总RNA的提取 | 第40页 |
| 1.5.2 小RNA测序文库构建与测序 | 第40-41页 |
| 1.5.3 小RNA测序数据分析 | 第41-42页 |
| 1.5.4 miRNA差异表达分析 | 第42页 |
| 1.5.5 实时荧光定量PCR检测差异miRNA | 第42-44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-59页 |
| 2.1 总RNA的提取 | 第44-46页 |
| 2.2 测序序列质量分析 | 第46页 |
| 2.3 Clean序列分析 | 第46-48页 |
| 2.4 小RNA长度分布 | 第48页 |
| 2.5 保守miRNA的鉴定 | 第48-50页 |
| 2.6 新miRNA的鉴定 | 第50-53页 |
| 2.7 miRNA的差异表达分析 | 第53-58页 |
| 2.8 水稻高温胁迫相关miRNA的荧光定量PCR分析 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-62页 |
| 3.1 高通量测序中样品RNA的质量 | 第59页 |
| 3.2 高通量测序鉴定水稻高温胁迫相关miRNA的有效性 | 第59-60页 |
| 3.3 水稻高温胁迫相关miRNA的表达 | 第60-62页 |
| 第三章 水稻miRNA靶基因的降解组测序与表达模式分析 | 第62-83页 |
| 引言 | 第62页 |
| 1 材料与方法 | 第62-67页 |
| 1.1 试验材料 | 第62页 |
| 1.2 试剂 | 第62-63页 |
| 1.3 仪器设备 | 第63页 |
| 1.4 生物信息分析相关的数据库及软件 | 第63页 |
| 1.5 实验方法 | 第63-67页 |
| 1.5.1 降解组文库的构建与测序 | 第63-64页 |
| 1.5.2 降解组测序数据分析 | 第64-65页 |
| 1.5.3 靶基因的功能注释 | 第65-67页 |
| 1.5.4 高温应答miRNA及其靶基因的表达分析 | 第67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-79页 |
| 2.1 水稻降解组测序数据产出总览 | 第67-68页 |
| 2.2 水稻响应高温胁迫miRNA靶基因的鉴定 | 第68-73页 |
| 2.3 GO功能注释与富集分析 | 第73-75页 |
| 2.4 KEEG通路分析 | 第75-76页 |
| 2.5 KOG分类注释分析 | 第76-77页 |
| 2.6 高温响应miRNA与靶基因表达模式分析 | 第77-79页 |
| 2.6.1 定量PCR标准曲线的建立 | 第77-78页 |
| 2.6.2 miRNA与靶基因表达模式分析 | 第78-79页 |
| 3 讨论 | 第79-83页 |
| 3.1 降解组测序鉴定miRNA靶基因的有效性 | 第79-80页 |
| 3.2 水稻响应高温胁迫miRNA靶基因分析 | 第80-81页 |
| 3.3 水稻响应高温胁迫miRNA靶基因功能分析 | 第81-83页 |
| 第四章 水稻超表达miR162a的高温耐受性研究 | 第83-101页 |
| 引言 | 第83页 |
| 1 材料与方法 | 第83-92页 |
| 1.1 试验材料 | 第83-84页 |
| 1.2 试剂 | 第84页 |
| 1.3 仪器设备 | 第84-85页 |
| 1.4 miR162a超表达载体的构建 | 第85-88页 |
| 1.4.1 克隆miR162a前体的引物设计 | 第85页 |
| 1.4.2 水稻基因组DNA的提取 | 第85-86页 |
| 1.4.3 miRNA前体序列的扩增 | 第86页 |
| 1.4.4 目的片段的回收 | 第86页 |
| 1.4.5 目的片段与载体的双酶切连接 | 第86-87页 |
| 1.4.6 连接产物转化大肠杆菌DH5α | 第87页 |
| 1.4.7 重组载体pCAMBIA1301-miR162a质粒的提取 | 第87-88页 |
| 1.5 农杆菌介导的遗传转化及过表达植株再生 | 第88-89页 |
| 1.5.1 农杆菌感受态的制备与转化 | 第88-89页 |
| 1.5.2 水稻的遗传转化 | 第89页 |
| 1.6 转基因阳性植株的鉴定 | 第89-91页 |
| 1.6.1 叶片Hyg和GUS基因的筛选 | 第89-90页 |
| 1.6.2 GUS组织化学染色和活性检测 | 第90页 |
| 1.6.3 转基因水稻中miR162a及其靶基因表达分析 | 第90-91页 |
| 1.7 转基因水稻对高温胁迫的响应 | 第91-92页 |
| 1.7.1 对转基因水稻T1代幼苗进行高温胁迫处理 | 第91页 |
| 1.7.2 细胞膜透性的测定 | 第91页 |
| 1.7.3 超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性测定 | 第91-92页 |
| 1.7.4 Pro含量与丙二醛(MDA)含量的测定 | 第92页 |
| 2 结果与分析 | 第92-99页 |
| 2.1 miR162a过表达载体的构建与农杆菌转化 | 第92-93页 |
| 2.2 农杆菌介导的遗传转化及植株再生 | 第93-94页 |
| 2.3 转基因水稻的Hyg和GUS基因的PCR检测 | 第94-95页 |
| 2.4 转基因水稻GUS组织活性化学分析 | 第95-96页 |
| 2.5 转基因水稻中miR162a及靶标基因的表达检测 | 第96页 |
| 2.6 转基因水稻T0代的表型分析 | 第96-97页 |
| 2.7 高温胁迫下转基因水稻T1代幼苗的生理响应 | 第97-99页 |
| 3 讨论 | 第99-101页 |
| 第五章 全文总结 | 第101-104页 |
| 1 水稻高温响应miRNA的分离与鉴定 | 第101页 |
| 2 水稻高温响应miRNA靶基因的鉴定 | 第101-102页 |
| 3 水稻高温响应miRNA靶基因的功能分析 | 第102页 |
| 4 过表达miR162a对水稻高温胁迫耐受性的影响 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-120页 |
| 附录A | 第120-121页 |
| 附录B | 第121页 |
