| 英文缩略词表 | 第6-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 前言 | 第12-17页 |
| 1.1 概述 | 第12-13页 |
| 1.2 黄酮糖基转移酶研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3 糖基转移酶催化形成黄酮糖苷 | 第14页 |
| 1.4 糖基化反应中的糖基供体 | 第14-15页 |
| 1.5 黄酮作为糖基受体及其糖基化位点 | 第15页 |
| 1.6 黄酮糖苷的药理活性 | 第15-16页 |
| 1.7 总结与展望 | 第16-17页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第17-25页 |
| 2.1 主要仪器设备及生产厂家 | 第17-18页 |
| 2.2 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.2.1 标准品及常用试剂 | 第18页 |
| 2.2.1.1 标准品及底物 | 第18页 |
| 2.2.1.2 常用生化试剂 | 第18页 |
| 2.2.2 常见溶液配方 | 第18-19页 |
| 2.2.2.1 DNA电泳缓冲液(50×Tris-TAE) | 第18页 |
| 2.2.2.2 培养基配方 | 第18页 |
| 2.2.2.3 蛋白变性电泳SDS-PAGE所涉及溶液 | 第18-19页 |
| 2.2.2.4 蛋白染色:银染法、考马斯亮蓝染色法 | 第19页 |
| 2.2.2.5 蛋白纯化相关溶液 | 第19页 |
| 2.3 植物材料 | 第19-20页 |
| 2.4 抗生素的配制 | 第20页 |
| 2.5 试剂盒及酶等生化试剂 | 第20页 |
| 2.6 菌株及质粒 | 第20页 |
| 2.7 常用实验方法 | 第20-25页 |
| 2.7.1 感受态细胞制备方法(CaCl_2法) | 第20-21页 |
| 2.7.2 克隆载体连接 | 第21页 |
| 2.7.3 大肠杆菌转化 | 第21页 |
| 2.7.4 重组子的筛选 | 第21-22页 |
| 2.7.5 重组蛋白的诱导表达 | 第22页 |
| 2.7.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第22页 |
| 2.7.7 蛋白染色——银染法、考马斯亮蓝染色法 | 第22-23页 |
| 2.7.8 蛋白纯化及超滤 | 第23页 |
| 2.7.9 Western-Blot(蛋白免疫印迹)方法 | 第23-25页 |
| 第三章 虎眼万年青(Ornithogalum caudatum)多功能糖基转移酶的挖掘及功能鉴定 | 第25-117页 |
| 3.1 实验方法 | 第26-36页 |
| 3.1.1 虎眼万年青(Ornithogalum caudatum)转录组序列分析 | 第26页 |
| 3.1.2 虎眼万年青cDNA合成及OcUGT1基因克隆 | 第26-27页 |
| 3.1.3 生物信息学分析 | 第27-28页 |
| 3.1.4 表达载体构建 | 第28-29页 |
| 3.1.4.1 质粒提取 | 第28页 |
| 3.1.4.2 表达载体酶切 | 第28-29页 |
| 3.1.4.3 基因片段扩增 | 第29页 |
| 3.1.4.4 In-Fusion技术快速连接 | 第29页 |
| 3.1.5 蛋白诱导表达及检测 | 第29-30页 |
| 3.1.6 OcUGT1的纯化及超滤 | 第30页 |
| 3.1.7 蛋白定量 | 第30-31页 |
| 3.1.8 OcUGT1功能鉴定 | 第31-34页 |
| 3.1.8.1 糖基化功能及底物宽泛性鉴定 | 第31-32页 |
| 3.1.8.2 OcUGT1糖基化反应最适温度分析 | 第32页 |
| 3.1.8.3 OcUGT1糖基化反应最适pH分析 | 第32-33页 |
| 3.1.8.4 OcUGT1糖基化反应对金属离子依赖性分析 | 第33页 |
| 3.1.8.5 OcUGT1酶促动力学参数测定 | 第33页 |
| 3.1.8.6 OcUGT1对不同糖基受体转化效率的测定 | 第33页 |
| 3.1.8.7 OcUGT1糖基化的可逆反应功能鉴定 | 第33-34页 |
| 3.1.8.8 OcUGT1水解功能鉴定及相关酶学参数测定 | 第34页 |
| 3.1.8.9 OcUGT1转糖功能鉴定及相关酶学参数测定 | 第34页 |
| 3.1.9 OcUGT1植物组织表达水平分析 | 第34-35页 |
| 3.1.10 所用引物、菌株及质粒 | 第35-36页 |
| 3.2 实验结果 | 第36-52页 |
| 3.2.1 虎眼万年青糖基转移酶OcUGT1的克隆 | 第36-37页 |
| 3.2.2 OcUGT1生物信息学分析 | 第37-38页 |
| 3.2.2.1 OcUGT1 ORF预测及蛋白理化性质预测 | 第37页 |
| 3.2.2.2 OcUGT1跨膜区及蛋白性质预测 | 第37-38页 |
| 3.2.3 OcUGT1分子进化树的构建及多序列比对结果 | 第38-39页 |
| 3.2.3.1 OcUGT1分子进化树的构建 | 第38-39页 |
| 3.2.3.2 OcUGT1多序列比对 | 第39页 |
| 3.2.4 OcUGT1表达载体构建及异源表达、纯化 | 第39-41页 |
| 3.2.5 OcUGT1糖基化功能及相关酶学参数的测定 | 第41-44页 |
| 3.2.6 OcUGT1糖基化可逆反应功能鉴定 | 第44-46页 |
| 3.2.6.1 NDP-糖合成反应 | 第44-45页 |
| 3.2.6.2 苷元交换反应 | 第45-46页 |
| 3.2.6.3 糖交换反应 | 第46页 |
| 3.2.7 OcUGT1水解功能鉴定及相关酶学参数测定 | 第46-48页 |
| 3.2.8 OcUGT1转糖功能鉴定及相关酶学参数测定 | 第48-50页 |
| 3.2.9 本章总结 | 第50-52页 |
| 附录 | 第52-117页 |
| 第四章 利用OcUGT1催化糖基化及转糖反应生物合成7,8-二羟基黄酮苷 | 第117-129页 |
| 4.1 实验方法 | 第117页 |
| 4.2 实验结果 | 第117-122页 |
| 4.2.1 通过OcUGT1糖基化及转糖功能催化合成7,8-二羟基黄酮苷 | 第117-122页 |
| 附录 | 第122-129页 |
| 第五章 睾酮糖苷的生物合成及糖基供体筛选 | 第129-135页 |
| 5.1 实验方法 | 第129页 |
| 5.2 实验结果 | 第129-132页 |
| 5.2.1 通过OcUGT1糖基化及转糖功能催化合成睾酮糖苷 | 第129-132页 |
| 附录 | 第132-135页 |
| 第六章 桑多斯虎眼万年青(Ornithogalum saundersiae)中橙酮糖基转移酶的分离及功能鉴定 | 第135-160页 |
| 6.1 实验方法 | 第135页 |
| 6.2 实验结果 | 第135-144页 |
| 6.2.1 桑多斯虎眼万年青糖基转移酶OsUGT1的克隆 | 第135页 |
| 6.2.2 OsUGT1生物信息学分析 | 第135-136页 |
| 6.2.3 OsUGT1异源表达及纯化 | 第136-139页 |
| 6.2.4 OsUGT1糖基化功能鉴定及酶学参数测定 | 第139-141页 |
| 6.2.5 OsUGT1转糖及水解功能鉴定 | 第141-143页 |
| 6.2.6 本章总结 | 第143-144页 |
| 附录 | 第144-160页 |
| 第七章 全文总结与创新点 | 第160-161页 |
| 参考文献 | 第161-165页 |
| 致谢 | 第165-167页 |
| 个人简介 | 第167页 |
