| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 主要符号表 | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-41页 |
| 1.1 植物中miRNA简介 | 第17-24页 |
| 1.1.1 植物中miRNA的合成及作用机制 | 第19-22页 |
| 1.1.2 植物中miRNA功能的研究方法 | 第22-24页 |
| 1.2 miR396在植物中的功能是近年来研究热点 | 第24-32页 |
| 1.2.1 植物中miR396简介 | 第24-25页 |
| 1.2.2 植物中GRFs简介 | 第25-28页 |
| 1.2.3 miR396及其靶基因GRFs在植物中的生理功能 | 第28-31页 |
| 1.2.4 miR396及其非GRFs靶基因在植物中的生理功能 | 第31-32页 |
| 1.3 番茄果实生长发育研究进展 | 第32-38页 |
| 1.3.1 番茄果实生长发育简介 | 第32-33页 |
| 1.3.2 番茄果实大小相关的数量性状位点 | 第33-34页 |
| 1.3.3 番茄果实形状相关的数量性状位点 | 第34-35页 |
| 1.3.4 植物激素对番茄果实生长发育影响 | 第35-37页 |
| 1.3.5 番茄萼片对番茄果实的影响 | 第37-38页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第38-41页 |
| 1.4.1 研究目的与意义 | 第38页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第38-40页 |
| 1.4.3 技术路线 | 第40-41页 |
| 第二章 番茄中miR396及其靶基因的鉴定和表达模式分析 | 第41-66页 |
| 2.1 引言 | 第41-42页 |
| 2.2 实验材料 | 第42-46页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第42页 |
| 2.2.2 菌株与载体 | 第42页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第42-44页 |
| 2.2.4 主要仪器与设备 | 第44-45页 |
| 2.2.5 本章引物 | 第45-46页 |
| 2.3 实验方法 | 第46-53页 |
| 2.3.1 番茄组织总RNA提取 | 第46页 |
| 2.3.2 反转录及RT-qPCR | 第46-48页 |
| 2.3.3 PCR扩增及胶回收 | 第48-49页 |
| 2.3.4 目的基因与载体的连接及大肠杆菌转化 | 第49-50页 |
| 2.3.5 大肠杆菌质粒提取及测序分析 | 第50-51页 |
| 2.3.6 SlDRM5的亚细胞定位 | 第51-52页 |
| 2.3.7 植物中GRFs系统发育树构建 | 第52页 |
| 2.3.8 番茄GRFs蛋白结构域分析 | 第52-53页 |
| 2.3.9 番茄中基因的表达模式 | 第53页 |
| 2.4 结果与分析 | 第53-62页 |
| 2.4.1 番茄中miR396a和miR396b的鉴定 | 第53-55页 |
| 2.4.2 番茄不同组织中miR396a和miR396b的表达模式 | 第55-56页 |
| 2.4.3 番茄中miR396靶基因的鉴定 | 第56-60页 |
| 2.4.4 番茄中GRFs的命名、蛋白结构域分析及表达模式 | 第60-61页 |
| 2.4.5 番茄不同组织中miR396靶基因的表达分析 | 第61-62页 |
| 2.5 讨论 | 第62-66页 |
| 第三章 miR396功能抑制后对番茄果实生长发育的影响 | 第66-82页 |
| 3.1 引言 | 第66-67页 |
| 3.2 实验材料 | 第67-68页 |
| 3.2.1 植物材料 | 第67页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第67-68页 |
| 3.2.3 主要仪器与设备 | 第68页 |
| 3.2.4 本章引物 | 第68页 |
| 3.3 实验方法 | 第68-71页 |
| 3.3.1 番茄叶片DNA提取及转基因鉴定 | 第68-69页 |
| 3.3.2 番茄组织总RNA提取、反转录及RT-qPCR | 第69-70页 |
| 3.3.3 番茄组织的测量 | 第70页 |
| 3.3.4 显微镜观察分析细胞大小和数目 | 第70-71页 |
| 3.4 结果与分析 | 第71-79页 |
| 3.4.1 miR396功能抑制后番茄果实及其表皮细胞变大 | 第71-74页 |
| 3.4.2 miR396功能抑制后番茄果实心室数增加 | 第74-76页 |
| 3.4.3 miR396功能抑制后番茄萼片及其表皮细胞变大 | 第76-79页 |
| 3.5 讨论 | 第79-82页 |
| 第四章 miR396功能抑制后番茄果实的转录组分析 | 第82-100页 |
| 4.1 引言 | 第82页 |
| 4.2 实验材料 | 第82-83页 |
| 4.2.1 植物材料 | 第83页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第83页 |
| 4.2.3 主要仪器设备 | 第83页 |
| 4.3 实验方法 | 第83-85页 |
| 4.3.1 番茄叶片DNA提取及转基因鉴定 | 第83页 |
| 4.3.2 番茄组织总RNA提取 | 第83-84页 |
| 4.3.3 番茄果实mRNA文库构建及RNA-seq测序 | 第84页 |
| 4.3.4 RNA-seq数据分析流程 | 第84页 |
| 4.3.5 番茄果实硬度的测量 | 第84-85页 |
| 4.3.6 番茄果实果胶含量的测定 | 第85页 |
| 4.4 结果与分析 | 第85-98页 |
| 4.4.1 RNA-seq测序所需总RNA样品的提取 | 第85-87页 |
| 4.4.2 RNA-seq测序数据分析 | 第87-88页 |
| 4.4.3 miR396靶基因的基因表达值FPKM分析 | 第88页 |
| 4.4.4 番茄果实大小和形状相关基因的FPKM值分析 | 第88-89页 |
| 4.4.5 差异表达基因筛选 | 第89-90页 |
| 4.4.6 差异表达基因的GO功能富集分析 | 第90-92页 |
| 4.4.7 差异表达基因的KEGG通路富集分析 | 第92-94页 |
| 4.4.8 番茄果实中细胞壁相关的差异表达基因 | 第94-96页 |
| 4.4.9 番茄5 DPA果实中植物激素相关的差异表达基因 | 第96-98页 |
| 4.5 讨论 | 第98-100页 |
| 第五章 不同miR396靶基因GRFs超表达后对番茄果实的影响 | 第100-127页 |
| 5.1 引言 | 第100页 |
| 5.2 实验材料 | 第100-104页 |
| 5.2.1 植物材料 | 第100-101页 |
| 5.2.2 菌株与载体 | 第101页 |
| 5.2.3 主要试剂 | 第101-103页 |
| 5.2.4 主要仪器设备 | 第103页 |
| 5.2.5 本章引物 | 第103-104页 |
| 5.3 实验方法 | 第104-110页 |
| 5.3.1 番茄组织总RNA提取、反转录及RT-qPCR | 第104页 |
| 5.3.2 pEASY-rGRFs载体的构建 | 第104-105页 |
| 5.3.3 pCAMBIA1300-rGRFs-3HA超表达载体的构建 | 第105-107页 |
| 5.3.4 农杆菌介导的番茄遗传转化(叶盘法) | 第107-110页 |
| 5.3.5 番茄叶片DNA提取及转基因鉴定 | 第110页 |
| 5.3.6 番茄组织的测量 | 第110页 |
| 5.4 结果与分析 | 第110-125页 |
| 5.4.1 获得含有重组质粒pCAMBIA1300-rGRFs-3HA的农杆菌 | 第110-113页 |
| 5.4.2 番茄超表达rGRFs(rGRFs-OE)再生植株鉴定和基因表达分析 | 第113-115页 |
| 5.4.3 T_0代rGRFs-OE番茄果实及萼片的表型分析 | 第115-118页 |
| 5.4.4 T_1代rGRFs-OE番茄果实的表型分析 | 第118-123页 |
| 5.4.5 T_1代rGRFs-OE番茄心室数分析 | 第123页 |
| 5.4.6 T_1代rGRFs-OE番茄萼片的表型分析 | 第123-125页 |
| 5.5 讨论 | 第125-127页 |
| 第六章 结论与展望 | 第127-129页 |
| 6.1 主要结论 | 第127页 |
| 6.2 主要创新点 | 第127-128页 |
| 6.3 展望 | 第128-129页 |
| 参考文献 | 第129-146页 |
| 致谢 | 第146-148页 |
| 附录 | 第148-162页 |
| 作者简介 | 第162-164页 |
