| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第13-24页 |
| 1.1 单核细胞增生李斯特菌简介 | 第13-16页 |
| 1.1.1 单核细胞增生李斯特菌生物学特征 | 第13-14页 |
| 1.1.2 单核细胞增生李斯特菌致病机理 | 第14-15页 |
| 1.1.3 单核细胞增生李斯特菌细胞壁结构 | 第15-16页 |
| 1.2 单核细胞增生李斯特菌的耐药性 | 第16-18页 |
| 1.2.1 单核细胞增生李斯特菌的耐药状况 | 第16-17页 |
| 1.2.2 单核细胞增生李斯特菌耐药机制 | 第17页 |
| 1.2.3 单核细胞增生李斯特菌盘尼西林结合蛋白的一般特征 | 第17-18页 |
| 1.3 单核细胞增生李斯特菌生物被膜研究进展 | 第18-21页 |
| 1.3.1 生物被膜简介 | 第18页 |
| 1.3.2 生物被膜形成过程 | 第18-19页 |
| 1.3.3 影响生物被膜形成的因素 | 第19-21页 |
| 1.4 L-鼠李糖简介 | 第21-23页 |
| 1.4.1 L-鼠李糖合成操纵子 | 第21-22页 |
| 1.4.2 RmlB蛋白简介 | 第22-23页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 单核细胞增生李斯特菌EGDe△rmlB缺失突变株的构建 | 第24-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 主要培养基配制 | 第24页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4 引物 | 第25-26页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-31页 |
| 2.2.1 单核细胞增生李斯特菌DNA的提取 | 第26页 |
| 2.2.2 同源重组片段扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.3 重组穿梭质粒pLSV101-rmlB(A+C)的构建及验证 | 第27页 |
| 2.2.4 重组穿梭质粒电转化Lm感受态细胞并鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.5 基因缺失突变株的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.6 PCR验证Lm EGDe△rmlB | 第29页 |
| 2.2.7 半定量RT-PCR验证RmlB缺失对其上下游基因转录表达的影响 | 第29-31页 |
| 2.3 实验结果 | 第31-35页 |
| 2.3.1 rmlB基因上下游同源臂rmlB(A+C)片段的扩增结果 | 第31-32页 |
| 2.3.2 重组穿梭质粒pLSV101-rmlB(A+C)的构建及鉴定结果 | 第32-33页 |
| 2.3.3 重组穿梭质粒pLSV101-rmlB(A+C)电转化入Lm感受态细胞 | 第33页 |
| 2.3.4 双交换菌株的筛选与验证 | 第33-34页 |
| 2.3.5 EGDe△rmlB突变株的筛选及验证 | 第34页 |
| 2.3.6 半定量RT-PCR验证RmlB缺失对其上下游基因转录表达的影响 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 RmlB在单核细胞增生李斯特菌生理功能中的作用 | 第37-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 菌株 | 第37页 |
| 3.1.2 主要培养基配制 | 第37页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第37-38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-39页 |
| 3.2.1 Lm生长曲线的测定 | 第38页 |
| 3.2.2 细菌鞭毛运动性试验 | 第38页 |
| 3.2.3 细菌形态大小的观察 | 第38页 |
| 3.2.4 细菌抗逆性实验 | 第38-39页 |
| 3.3 实验结果及分析 | 第39-41页 |
| 3.3.1 RmlB缺失对Lm生长的影响 | 第39页 |
| 3.3.2 RmlB缺失对Lm运动性的影响 | 第39-40页 |
| 3.3.3 RmlB缺失对Lm形态大小的影响 | 第40页 |
| 3.3.4 RmlB缺失对Lm抗逆性的影响 | 第40-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 单核细胞增生李斯特菌中RmlB缺失对细菌耐药性的影响 | 第43-51页 |
| 4.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 4.1.1 菌株 | 第43页 |
| 4.1.2 培养基 | 第43页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第43-44页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第44页 |
| 4.2 实验方法 | 第44-47页 |
| 4.2.1 最低抑菌浓度法 | 第44页 |
| 4.2.2 K-B纸片琼脂扩散法 | 第44-45页 |
| 4.2.3 抗生素耐受试验 | 第45页 |
| 4.2.4 半定量RT-PCR及qRT-PCR探究RmlB对Lm青霉素结合蛋白转录表达的影响 | 第45-47页 |
| 4.3 实验结果 | 第47-50页 |
| 4.3.1 比较EGDe和EGDe△rmlB对抗生素的敏感性 | 第47-48页 |
| 4.3.2 比较青霉素结合蛋白在EGDe和EGDe△rmlB中的转录表达差异 | 第48-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-51页 |
| 第五章 单核细胞增生李斯特菌中RmlB缺失对生物被膜形成能力的影响 | 第51-58页 |
| 5.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 5.1.1 菌株 | 第51页 |
| 5.1.2 培养基 | 第51页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第51-52页 |
| 5.1.4 实验仪器 | 第52页 |
| 5.2 实验方法 | 第52-54页 |
| 5.2.1 微孔板法检测菌株的生长和生物被膜的形成 | 第52页 |
| 5.2.2 荧光染色法观察细菌生物被膜的附着 | 第52-53页 |
| 5.2.3 半定量RT-PCR探究RmlB对Lm某些生物被膜相关基因转录表达的影响 | 第53-54页 |
| 5.3 实验结果 | 第54-56页 |
| 5.3.1 微孔板法检测菌株生物被膜的形成结果 | 第54-55页 |
| 5.3.2 荧光染色法观察细菌生物被膜形态结果 | 第55页 |
| 5.3.3 半定量RT-PCR比较某些生物被膜形成相关基因在EGDe和EGDe△rmlB中的转录表达差异 | 第55-56页 |
| 5.4 讨论 | 第56-58页 |
| 第六章 单核细胞增生李斯特菌中RmlB缺失对细菌毒力的影响 | 第58-67页 |
| 6.1 实验材料 | 第58-59页 |
| 6.1.1 菌株 | 第58页 |
| 6.1.2 培养基 | 第58页 |
| 6.1.3 实验试剂 | 第58-59页 |
| 6.1.4 实验仪器 | 第59页 |
| 6.2 实验方法 | 第59-61页 |
| 6.2.1 半定量RT-PCR探究RmlB对Lm毒力基因转录表达的影响及PrfA对鼠李糖合成相关基因转录表达的影响 | 第59-60页 |
| 6.2.2 细菌溶血活性检测 | 第60-61页 |
| 6.2.3 PrfA组成型高表达菌株EGDe△rmlB+pPrfA~*的构建 | 第61页 |
| 6.2.4 EGDe+pPrfA~*和EGDe△rmlB+pPrfA~*生长曲线测定 | 第61页 |
| 6.3 实验结果 | 第61-65页 |
| 6.3.1 半定量RT-PCR比较主要毒力基因在EGDe和EGDe△rmlB中的转录表达差异 | 第61-62页 |
| 6.3.2 rmlB基因的缺失对单核细胞增生李斯特菌溶血活性的影响 | 第62-63页 |
| 6.3.3 突变株EGDe△rmlB-pPrfA~*构建及筛选 | 第63页 |
| 6.3.4 PrfA组成型高表达时对菌株EGDeArmlB生长的影响 | 第63-64页 |
| 6.3.5 半定量RT-PCR比较鼠李糖合成相关基因在EGDe、EGDe△prfA和EGDe-pPrfA~*中的转录表达差异 | 第64-65页 |
| 6.4 讨论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
