中文摘要 | 第4-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
中英文对照 | 第13-14页 |
第1章 绪论 | 第14-34页 |
1.1 背景知识 | 第14-31页 |
1.1.1 JDV及其致病性简介 | 第14-18页 |
1.1.2 Vif蛋白 | 第18-19页 |
1.1.3 APOBEC3蛋白家族 | 第19-23页 |
1.1.4 APOBEC与Vif相互作用 | 第23-28页 |
1.1.5 泛素-蛋白酶体降解途径 | 第28-31页 |
1.2 论文设计 | 第31-34页 |
1.2.1 论文目的和意义 | 第31-32页 |
1.2.2 实验设计 | 第32-34页 |
第2章 材料与方法 | 第34-50页 |
2.1 材料、仪器和试剂 | 第34-39页 |
2.1.1 菌株 | 第34页 |
2.1.2 质粒构建 | 第34-35页 |
2.1.3 细胞系和实验试剂 | 第35-37页 |
2.1.4 抗体 | 第37页 |
2.1.5 RNAi | 第37-38页 |
2.1.6 主要仪器 | 第38-39页 |
2.2 实验方法 | 第39-50页 |
2.2.1 聚合酶链式反应(PCR) | 第39-40页 |
2.2.2 DNA的纯化回收 | 第40-41页 |
2.2.3 T载体蓝白斑筛选 | 第41-42页 |
2.2.4 双酶切反应及突变体的消化 | 第42页 |
2.2.5 连接反应 | 第42-43页 |
2.2.6 感受态细胞的转化 | 第43页 |
2.2.7 质粒提取 | 第43-45页 |
2.2.8 细胞培养和细胞系的构建 | 第45-46页 |
2.2.9 细胞转染 | 第46-47页 |
2.2.10 Western Blot及显色 | 第47页 |
2.2.11 凝胶制备 | 第47-48页 |
2.2.12 RNA提取 | 第48页 |
2.2.13 荧光素酶检测(luciferase assay) | 第48-49页 |
2.2.14 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation) | 第49页 |
2.2.15 细胞感染 | 第49-50页 |
第3章 结果与讨论 | 第50-80页 |
3.1 JDV Vif对bt A3s具有拮抗功能 | 第50-55页 |
3.1.1 JDV Vif对bt A3s的降解能力存在差异 | 第50-51页 |
3.1.2 JDV Vif拮抗bt A3s的抗病毒作用 | 第51-52页 |
3.1.3 JDV Vif降解bt A3s通过蛋白酶体降解途径 | 第52-55页 |
3.1.4 小结 | 第55页 |
3.2 JDV Vif介导的E3泛素连接酶复合体成员的鉴定 | 第55-62页 |
3.2.1 JDV Vif劫持宿主细胞Elongin B/C及Cullin2形成E3泛素连接酶复合体 | 第55-59页 |
3.2.2 JDV Vif与BIV Vif中和牛A3F抗病毒作用的比较 | 第59-60页 |
3.2.3 JDV Vif与BIV Vif的进化关系 | 第60-61页 |
3.2.4 小结 | 第61-62页 |
3.3 JDV Vif需要BC box及Cullin box与ElonginB/C及Cullin2结合 | 第62-67页 |
3.3.1 JDV Vif BC box及Cullin box的鉴定 | 第62-63页 |
3.3.2 BC box及cullin box参与JDV Vif介导的牛A3F降解 | 第63-64页 |
3.3.3 BC box及cullin box突变体拮抗牛A3F抗病毒功能 | 第64-65页 |
3.3.4 JDV Vif BC box及cullin box分别结合Elongin B/C及Cullin2 | 第65-67页 |
3.4 JDV Vif的H95-C113-H115-C133区参与抑制牛A3F抗病毒功能 | 第67-72页 |
3.4.1 TPEN抑制JDV Vif介导的牛A3F降解 | 第67-68页 |
3.4.2 JDV Vif锌指功能区的鉴定 | 第68页 |
3.4.3 JDV Vif H95-C113-H115-C133突变体抑制JDV Vif介导的牛A3F的降解 | 第68-70页 |
3.4.4 H95-C113-H115-C133突变体拮抗牛A3F抗病毒功能 | 第70-71页 |
3.4.5 JDV Vif H95-C113-H115-C133的参与结合Cullin2 | 第71-72页 |
3.4.6 小结 | 第72页 |
3.5 RBX1-UBE2M参与JDV Vif介导牛A3F降解 | 第72-76页 |
3.5.1 JDV Vif-CRL E3连接酶的Neddylation参与JDV Vif介导的牛A3F降解 | 第72-73页 |
3.5.2 Cul2△Nedd突变体可以降低JDV Vif对牛A3F抗病毒作用的拮抗 | 第73-75页 |
3.5.3 泛素化系统RBX1-UBE2M的参与 | 第75-76页 |
3.5.4 小结 | 第76页 |
3.6 讨论 | 第76-80页 |
第4章 结论 | 第80-82页 |
参考文献 | 第82-96页 |
作者简介 | 第96-98页 |
致谢 | 第98页 |