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杰迈布兰病病毒Vif蛋白通过泛素介导的蛋白质降解途径对抗牛APOBEC3蛋白的抗病毒作用

中文摘要第4-7页
Abstract第7-9页
中英文对照第13-14页
第1章 绪论第14-34页
    1.1 背景知识第14-31页
        1.1.1 JDV及其致病性简介第14-18页
        1.1.2 Vif蛋白第18-19页
        1.1.3 APOBEC3蛋白家族第19-23页
        1.1.4 APOBEC与Vif相互作用第23-28页
        1.1.5 泛素-蛋白酶体降解途径第28-31页
    1.2 论文设计第31-34页
        1.2.1 论文目的和意义第31-32页
        1.2.2 实验设计第32-34页
第2章 材料与方法第34-50页
    2.1 材料、仪器和试剂第34-39页
        2.1.1 菌株第34页
        2.1.2 质粒构建第34-35页
        2.1.3 细胞系和实验试剂第35-37页
        2.1.4 抗体第37页
        2.1.5 RNAi第37-38页
        2.1.6 主要仪器第38-39页
    2.2 实验方法第39-50页
        2.2.1 聚合酶链式反应(PCR)第39-40页
        2.2.2 DNA的纯化回收第40-41页
        2.2.3 T载体蓝白斑筛选第41-42页
        2.2.4 双酶切反应及突变体的消化第42页
        2.2.5 连接反应第42-43页
        2.2.6 感受态细胞的转化第43页
        2.2.7 质粒提取第43-45页
        2.2.8 细胞培养和细胞系的构建第45-46页
        2.2.9 细胞转染第46-47页
        2.2.10 Western Blot及显色第47页
        2.2.11 凝胶制备第47-48页
        2.2.12 RNA提取第48页
        2.2.13 荧光素酶检测(luciferase assay)第48-49页
        2.2.14 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)第49页
        2.2.15 细胞感染第49-50页
第3章 结果与讨论第50-80页
    3.1 JDV Vif对bt A3s具有拮抗功能第50-55页
        3.1.1 JDV Vif对bt A3s的降解能力存在差异第50-51页
        3.1.2 JDV Vif拮抗bt A3s的抗病毒作用第51-52页
        3.1.3 JDV Vif降解bt A3s通过蛋白酶体降解途径第52-55页
        3.1.4 小结第55页
    3.2 JDV Vif介导的E3泛素连接酶复合体成员的鉴定第55-62页
        3.2.1 JDV Vif劫持宿主细胞Elongin B/C及Cullin2形成E3泛素连接酶复合体第55-59页
        3.2.2 JDV Vif与BIV Vif中和牛A3F抗病毒作用的比较第59-60页
        3.2.3 JDV Vif与BIV Vif的进化关系第60-61页
        3.2.4 小结第61-62页
    3.3 JDV Vif需要BC box及Cullin box与ElonginB/C及Cullin2结合第62-67页
        3.3.1 JDV Vif BC box及Cullin box的鉴定第62-63页
        3.3.2 BC box及cullin box参与JDV Vif介导的牛A3F降解第63-64页
        3.3.3 BC box及cullin box突变体拮抗牛A3F抗病毒功能第64-65页
        3.3.4 JDV Vif BC box及cullin box分别结合Elongin B/C及Cullin2第65-67页
    3.4 JDV Vif的H95-C113-H115-C133区参与抑制牛A3F抗病毒功能第67-72页
        3.4.1 TPEN抑制JDV Vif介导的牛A3F降解第67-68页
        3.4.2 JDV Vif锌指功能区的鉴定第68页
        3.4.3 JDV Vif H95-C113-H115-C133突变体抑制JDV Vif介导的牛A3F的降解第68-70页
        3.4.4 H95-C113-H115-C133突变体拮抗牛A3F抗病毒功能第70-71页
        3.4.5 JDV Vif H95-C113-H115-C133的参与结合Cullin2第71-72页
        3.4.6 小结第72页
    3.5 RBX1-UBE2M参与JDV Vif介导牛A3F降解第72-76页
        3.5.1 JDV Vif-CRL E3连接酶的Neddylation参与JDV Vif介导的牛A3F降解第72-73页
        3.5.2 Cul2△Nedd突变体可以降低JDV Vif对牛A3F抗病毒作用的拮抗第73-75页
        3.5.3 泛素化系统RBX1-UBE2M的参与第75-76页
        3.5.4 小结第76页
    3.6 讨论第76-80页
第4章 结论第80-82页
参考文献第82-96页
作者简介第96-98页
致谢第98页

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