| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-11页 |
| 第一章 免疫检查点TIM-3的概念及其研究现状 | 第11-15页 |
| 1.1 TIM-3的分子结构 | 第12页 |
| 1.2 TIM-3的配体及各自作用机制 | 第12-13页 |
| 1.3 TIM-3/Galectin-9通路在肿瘤中的调节机制 | 第13-15页 |
| 第二章 制备纯化的TIM-3单抗 | 第15-29页 |
| 2.1 实验材料、试剂及仪器设备 | 第15页 |
| 2.1.1 实验材料与试剂 | 第15页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第15页 |
| 2.2 实验方法 | 第15-20页 |
| 2.2.1 制备TIM-3抗体 | 第15-16页 |
| 2.2.2 制备杂交瘤细胞 | 第16-19页 |
| 2.2.3 制备腹水 | 第19页 |
| 2.2.4 收获腹水 | 第19-20页 |
| 2.2.5 纯化腹水 | 第20页 |
| 2.3 TIM-3单抗的特异性鉴定 | 第20-24页 |
| 2.3.1 质粒的电转染 | 第20-21页 |
| 2.3.2 Westernblotting测单抗特异性 | 第21-22页 |
| 2.3.3 免疫荧光技术 | 第22页 |
| 2.3.4 流式细胞仪检测TIM-3单抗的特异性识别 | 第22-24页 |
| 2.4 结果与分析 | 第24-28页 |
| 2.4.1 TIM-3单抗在蛋白层面的特异性识别 | 第24-25页 |
| 2.4.2 TIM-3单抗在细胞层面的特异性识别 | 第25-26页 |
| 2.4.3 TIM-3单抗在人PBMC细胞上的特异性识别 | 第26-27页 |
| 2.4.4 TIM-3单抗亲和性测定 | 第27-28页 |
| 2.5 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 阻断TIM-3/Galectin-9通路激活T细胞的活性和功能 | 第29-42页 |
| 3.1 实验器材 | 第29页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第29页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第29页 |
| 3.1.3 实验试剂及其配制方法 | 第29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-35页 |
| 3.2.1 阻断TIM-3/Galectin-9通路后IL-2和IFN-γ水平的变化量 | 第29-30页 |
| 3.2.2 同种异体混合淋巴细胞培养(LMR) | 第30-33页 |
| 3.2.3 LDH法测TIM-3单抗体外杀伤性 | 第33-34页 |
| 3.2.4 RTCA法测TIM-3体外杀伤性 | 第34-35页 |
| 3.3 实验结果 | 第35-40页 |
| 3.3.1 IL-2和IFN-γ在mRNA水平的变化量 | 第35-37页 |
| 3.3.2 IFN-γ在蛋白水平的变化量 | 第37页 |
| 3.3.3 同种异体混合淋巴细胞培养 | 第37-38页 |
| 3.3.4 LDH法测TIM-3单抗对肿瘤细胞的杀伤性 | 第38-39页 |
| 3.3.5 RTCA法测体外杀伤性 | 第39-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 TIM-3单抗在动物体内的功能性分析 | 第42-50页 |
| 4.1 实验器材 | 第42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-43页 |
| 4.2.1 乳腺癌MDA-MB-231转染Luciferase荧光基因 | 第42-43页 |
| 4.2.2 乳腺癌MDA-MB-231-Luc原位肿瘤建模 | 第43页 |
| 4.3 实验结果 | 第43-48页 |
| 4.3.1 TIM-3单抗对小鼠原位乳腺癌的抑制荷瘤小鼠体内肿瘤生长 | 第43-46页 |
| 4.3.2 TIM-3单抗对小鼠原位乳腺癌生活质量的影响 | 第46-47页 |
| 4.3.3 TIM-3单抗治疗小鼠原位乳腺癌的安全性分析 | 第47-48页 |
| 4.4 讨论 | 第48-50页 |
| 总结与展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
