| 缩略词表 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| abstract | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第13-19页 |
| 1.1 抑癌蛋白PTEN的重要性 | 第13-15页 |
| 1.2 PTEN的精细调控与肿瘤的关系 | 第15-16页 |
| 1.3 PTEN的泛素化与去泛素化调控 | 第16-17页 |
| 1.4 CRISPR/CAS9基因编辑技术 | 第17-19页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第19-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 小鼠DNA提取试剂 | 第19页 |
| 2.1.2 细胞以及组织裂解液 | 第19页 |
| 2.1.3 蛋白免疫印迹试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.4 细胞培养试剂 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-25页 |
| 2.2.1 鼠尾DNA的提取与基因型鉴定 | 第20-21页 |
| 2.2.2 质粒的提取 | 第21页 |
| 2.2.3 细胞或组织RNA的提取 | 第21页 |
| 2.2.4 细胞的培养 | 第21-22页 |
| 2.2.5 MEF细胞的分离与培养 | 第22-23页 |
| 2.2.6 蛋白免疫印迹 | 第23页 |
| 2.2.7 蛋白免疫共沉淀 | 第23页 |
| 2.2.8 间接免疫荧光 | 第23-24页 |
| 2.2.9 克隆形成实验 | 第24页 |
| 2.2.10 Transwell实验 | 第24页 |
| 2.2.11 统计方法 | 第24-25页 |
| 第三章 生理条件下WWP2是PTEN重要的泛素化酶 | 第25-34页 |
| 3.1 WWP2与CHIP小鼠的基因型鉴定 | 第25-26页 |
| 3.2 WWP2敲除的小鼠体型变小,体重变轻 | 第26-27页 |
| 3.3 CHIP敲除后小鼠的生长发育阻滞 | 第27-28页 |
| 3.4 WWP2敲除后PTEN的蛋白水平上升,AKT通路受到抑制 | 第28-29页 |
| 3.5 WWP2基因敲除不影响PTEN的转录水平 | 第29-30页 |
| 3.6 WWP2敲除后PTEN的泛素化水平增加 | 第30页 |
| 3.7 CHIP 缺失既不影响 PTEN 的蛋白水平，也不影响其泛素化水平 | 第30-32页 |
| 3.8 小结 | 第32页 |
| 3.9 讨论 | 第32-34页 |
| 第四章 USP10通过去泛素化稳定PTEN | 第34-41页 |
| 4.1 USP10基因敲除细胞株的构建 | 第34-36页 |
| 4.1.1 sgRNA序列的设计 | 第34页 |
| 4.1.2 重组质粒的构建与鉴定 | 第34-35页 |
| 4.1.3 病毒的包装 | 第35页 |
| 4.1.4 USP10基因敲除细胞株的构建与筛选 | 第35-36页 |
| 4.2 USP10 敲除后细胞的增殖和迁移能力增强 | 第36-37页 |
| 4.3 USP10 敲除后，PTEN 的蛋白水平下降，AKT 信号通路激活 | 第37-38页 |
| 4.4 USP10敲除后PTEN的泛素化水平明显增加 | 第38-39页 |
| 4.5 USP10 敲除后细胞质和细胞核 PTEN 蛋白水平都下降 | 第39页 |
| 4.6 小结 | 第39页 |
| 4.7 讨论 | 第39-41页 |
| 第五章 结论与展望 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 附录A 基因型鉴定引物 | 第47-48页 |
| 附录B 实验仪器 | 第48-49页 |
| 作者在学期间取得的学术成果 | 第49-50页 |
| 个人简历 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
