| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文章综述 | 第13-56页 |
| 1.1 RNA 沉默通路中的关键蛋白 | 第14-23页 |
| 1.1.1 依赖 RNA 的 RNA 聚合酶 | 第14-18页 |
| 1.1.2 DCL-like 蛋白 | 第18-21页 |
| 1.1.3 Argonaute 蛋白 | 第21-23页 |
| 1.2 小 RNA 的种类及产生途径 | 第23-32页 |
| 1.2.1 siRNAs | 第24-27页 |
| 1.2.2 miRNAs | 第27-31页 |
| 1.2.3 piRNAs | 第31-32页 |
| 1.3 RNA 沉默抑制子 | 第32-40页 |
| 1.3.1 VSR 抑制对病毒 RNA 的识别和切割 | 第33-34页 |
| 1.3.2 VSR 干扰 RISC 的组装 | 第34-35页 |
| 1.3.3 VSR 作用于 AGOs 蛋白 | 第35-36页 |
| 1.3.4 VSR 模拟 GW/WG 寄主蛋白阻止 RISC 介导的目标选择 | 第36页 |
| 1.3.5 VSR 作用于次级 siRNAs 的扩增 | 第36-37页 |
| 1.3.6 VSR 通过诱导 miRNA168 去抑制 AGO1 | 第37-38页 |
| 1.3.7 VSR 干扰对病毒基因组的表观修饰 | 第38-40页 |
| 1.3.8 病毒复制中间体作为 VSR 介导的 RNA 沉默 | 第40页 |
| 1.4 常用的植物转基因技术 | 第40-50页 |
| 1.4.1 amiRNAs 转基因技术 | 第40-43页 |
| 1.4.2 Co-suppression 转基因技术 | 第43-44页 |
| 1.4.3 Antisense 转基因技术 | 第44页 |
| 1.4.4 HpRNA 转基因技术 | 第44-46页 |
| 1.4.5 VIGS 转基因技术 | 第46-50页 |
| 1.4.6 TGS 转基因技术 | 第50页 |
| 1.5 水稻矮缩病毒 | 第50-54页 |
| 1.5.1 水稻矮缩病毒在植株上的症状和传播特点 | 第50-51页 |
| 1.5.2 水稻矮缩病毒编码蛋白的功能研究进展 | 第51-54页 |
| 1.6 本博士论文的研究内容 | 第54-56页 |
| 1.6.1 分析水稻矮缩病毒序列的 artifical miRNAs 异源表达 | 第54页 |
| 1.6.2 过表达 OsRDR6 的转基因水稻抗水稻矮缩病毒效果分析 | 第54-55页 |
| 1.6.3 RDV S10IR 转基因水稻抗水稻矮缩病毒效果分析 | 第55-56页 |
| 第二章 水稻矮缩病毒的 artificial miRNAs 在水稻中的异源表达 | 第56-79页 |
| 2.1 实验材料和方法 | 第56-69页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第56页 |
| 2.1.2 引物设计 | 第56页 |
| 2.1.3 构建 artifical miRNAs 载体 | 第56-58页 |
| 2.1.4 转化水稻愈伤组织和获得转基因植物 | 第58-60页 |
| 2.1.5 RNA blot 鉴定 artifical miRNAs 转基因植物 | 第60-64页 |
| 2.1.6 Southern blot 检测 T-DNA 插入的拷贝数 | 第64-68页 |
| 2.1.7 基因组 PCR | 第68页 |
| 2.1.8 反转录（reverse transcription，RT）-PCR | 第68-69页 |
| 2.2 实验结果 | 第69-75页 |
| 2.2.1 artificial miRNAs 的引物设计 | 第69-70页 |
| 2.2.2 artifical miRNA 前体二级结构预测 | 第70-71页 |
| 2.2.3 amiRNA 载体的构建 | 第71-72页 |
| 2.2.4 在转基因水稻中 amiRNAs 的表达效率 | 第72-74页 |
| 2.2.5 在转基因水稻中鉴定 amiRNA 的表达水平和拷贝数之间的关系 | 第74-75页 |
| 2.3 讨论 | 第75-79页 |
| 2.3.1 amiRNAs 的表达效率 | 第76-78页 |
| 2.3.2 amiRNAs 的相对表达水平和 T-DNA 拷贝数之间的关系 | 第78-79页 |
| 第三章 转基因水稻中过量表达的 OsRDR6 在抗水稻矮缩病毒作用 | 第79-102页 |
| 3.1 实验材料和方法 | 第79-91页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第79页 |
| 3.1.2 OsRDR6 多克隆抗体的制备 | 第79-81页 |
| 3.1.3 检测 OsRDR6 多克隆抗体 | 第81-84页 |
| 3.1.4 过表达 OsRDR6 植物载体的构建 | 第84-85页 |
| 3.1.5 水稻愈伤组织的转化和转基因植物的获得 | 第85页 |
| 3.1.6 Western blot 鉴定 OsRDR6 转基因植物 | 第85页 |
| 3.1.7 Southern blot 鉴定转基因植株的拷贝数 | 第85页 |
| 3.1.8 病毒侵染实验 | 第85-86页 |
| 3.1.9 分子检测感植株 | 第86-88页 |
| 3.1.10 凝胶迁移（EMSA）实验 | 第88-91页 |
| 3.1.11 RDV Pns10 和 OsRDR6 蛋白在烟草中的共同瞬时表达 | 第91页 |
| 3.1.12 检测 T2 代转基因水稻中 OsRDR6 mRNA 和 siRNAs | 第91页 |
| 3.2 实验结果 | 第91-99页 |
| 3.2.1 OsRDR6 抗体的特异性检测 | 第91-92页 |
| 3.2.2 Western blot 鉴定过表达 OsRDR6 转基因水稻 | 第92-93页 |
| 3.2.3 Southern blot 鉴定过表达 OsRDR6 转基因株系的拷贝数 | 第93页 |
| 3.2.4 OsRDR6 转基因株系对水稻矮缩病毒没有产生抗性 | 第93-96页 |
| 3.2.5 分析 RDV 侵染的 OsRDR6 转基因水稻 | 第96页 |
| 3.2.6 RDV Pns10 不能结合 OsRDR6 的非翻译区和翻译区序列 | 第96-97页 |
| 3.2.7 分析 RDV Pns11 与 OsRDR6 在烟草中共同瞬时表达 | 第97-98页 |
| 3.2.8 过量表达的 OsRDR6 是不能稳定遗传的 | 第98-99页 |
| 3.3 实验讨论 | 第99-102页 |
| 第四章 利用 RNAi 原理沉默水稻矮缩病毒 Pns10 的转基因水稻抗病毒分析 | 第102-112页 |
| 4.1 实验材料和方法 | 第102-106页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第102页 |
| 4.1.2 S10IR 载体的构建 | 第102-104页 |
| 4.1.3 水稻愈伤组织的转化和转基因植物的获得 | 第104-105页 |
| 4.1.4 RNA blot 鉴定 S10IR 转基因植物 | 第105页 |
| 4.1.5 Southern blot 检测 T-DNA 插入的拷贝数 | 第105页 |
| 4.1.6 病毒侵染实验 | 第105页 |
| 4.1.7 分子检测感植株 | 第105-106页 |
| 4.2 实验结果 | 第106-109页 |
| 4.2.1 S10IR 转基因载体的构建和植物转化 | 第106页 |
| 4.2.2 S10IR 转基因植物的鉴定 | 第106-107页 |
| 4.2.3 RDV 侵染 S10IR 转基因植物 | 第107-108页 |
| 4.2.4 分析 RDV 侵染 S10IR 转基因植物 | 第108-109页 |
| 4.3 结果讨论 | 第109-112页 |
| 第五章 实验总结和展望 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-133页 |
| 附录 水稻愈伤组织培养所需的培养基配方 | 第133-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
| 作者简介 | 第136页 |
