| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 研究背景 | 第12页 |
| 1.2 海洋来源的芽孢杆菌产生的活性物质 | 第12-18页 |
| 1.2.1 脂肽类物化合物 | 第13-14页 |
| 1.2.2 聚酮类化合物 | 第14-16页 |
| 1.2.3 异香豆素类 | 第16-17页 |
| 1.2.4 脂肪酸 | 第17-18页 |
| 1.3 糖基转移酶 | 第18-23页 |
| 1.3.1 糖基转移酶的结构和作用机制 | 第18-20页 |
| 1.3.2 糖基转移酶的分类 | 第20-21页 |
| 1.3.3 糖基转移酶基因在基因组中的分布 | 第21-22页 |
| 1.3.4 糖基转移酶在天然产物结构多样性方面的研究 | 第22-23页 |
| 1.4 本课题研究目的和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 海洋芽孢杆菌B-9987中Macrolactins化合物的分离与鉴定 | 第25-38页 |
| 2.1 引言 | 第25-26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-27页 |
| 2.2.1 实验菌株 | 第26页 |
| 2.2.2 培养基和生化试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-29页 |
| 2.3.1 海洋芽孢杆菌B-9987发酵产物的提取分离 | 第27-29页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第29-37页 |
| 2.4.1 化合物1的结构解析 | 第29-32页 |
| 2.4.2 化合物2的结构解析 | 第32-35页 |
| 2.4.3 化合物3的结构解析 | 第35-37页 |
| 2.5 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 Macrolactins糖基转移酶基因的克隆及体外表达 | 第38-57页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 实验材料 | 第38-43页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第38-39页 |
| 3.2.2 引物 | 第39-40页 |
| 3.2.3 培养基和生化试剂 | 第40-42页 |
| 3.2.4 抗生素及其使用浓度 | 第42-43页 |
| 3.2.5 实验试剂及仪器 | 第43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-51页 |
| 3.3.1 芽孢杆菌B-9987基因组DNA的提取 | 第43-44页 |
| 3.3.2 大肠杆菌基质粒DNA的提取 | 第44页 |
| 3.3.3 大肠杆菌中质粒DNA的快速检测 | 第44-45页 |
| 3.3.4 PCR扩增糖基转移酶基因序列 | 第45-46页 |
| 3.3.5 DNA片段的胶回收(50 bp-40 kb) | 第46页 |
| 3.3.6 目的片段与载体的连接 | 第46-47页 |
| 3.3.7 E.coli电转化感受态细胞的制备及转化 | 第47页 |
| 3.3.8 靶蛋白表达条件的建立 | 第47-48页 |
| 3.3.9 靶蛋白的大量表达及纯化 | 第48-49页 |
| 3.3.10 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第49-50页 |
| 3.3.11 酶催化活性的HPLC检测 | 第50页 |
| 3.3.12 生物信息学分析 | 第50-51页 |
| 3.4 结果与分析 | 第51-56页 |
| 3.4.1 糖基转移酶基因bmmGT1的生物信息学分析 | 第51-53页 |
| 3.4.2 pET28a：：bmmGT1重组质粒的构建 | 第53-54页 |
| 3.4.3 BmmGT1的表达纯化 | 第54-55页 |
| 3.4.4 酶催化活性的检测 | 第55-56页 |
| 3.5 小结 | 第56-57页 |
| 第四章 糖基转移酶BmmGT1的酶学性质研究 | 第57-67页 |
| 4.1 引言 | 第57页 |
| 4.2 实验材料 | 第57-58页 |
| 4.2.1 实验试剂及仪器 | 第57-58页 |
| 4.3 实验方法 | 第58-61页 |
| 4.3.1 蛋白浓度的测定 | 第58页 |
| 4.3.2 最适pH的测定 | 第58-59页 |
| 4.3.3 最适温度的测定 | 第59-60页 |
| 4.3.4 金属离子及EDTA对BmmGT1酶活性的影响 | 第60页 |
| 4.3.5 Mg~(2+)浓度对BmmGT1酶活性的影响 | 第60页 |
| 4.3.6 酶促反应动力学常数的测定 | 第60-61页 |
| 4.4 结果与分析 | 第61-66页 |
| 4.4.1 蛋白浓度标准曲线 | 第61-62页 |
| 4.4.2 酶的最适pH | 第62-63页 |
| 4.4.3 酶的最适温度 | 第63页 |
| 4.4.4 金属离子及EDTA对BmmGT1酶活性的影响 | 第63-64页 |
| 4.4.5 Mg~(2+)浓度对BmmGT1酶活性的影响 | 第64页 |
| 4.4.6 BmmGT1催化macrolactin A的动力学参数测定 | 第64-66页 |
| 4.5 小结 | 第66-67页 |
| 第五章 糖基转移酶BmmGT1的底物多样性研究 | 第67-75页 |
| 5.1 引言 | 第67-68页 |
| 5.2 实验材料 | 第68页 |
| 5.3 实验方法 | 第68-70页 |
| 5.3.1 不同的糖基供体 | 第68页 |
| 5.3.2 不同的糖基受体 | 第68-69页 |
| 5.3.3 BmmGT1催化糖基化逆反应 | 第69页 |
| 5.3.4 BmmGT1催化MMA的动力学参数测定 | 第69-70页 |
| 5.4 结果与分析 | 第70-74页 |
| 5.4.1 不同的糖基供体 | 第70-71页 |
| 5.4.2 不同的糖基受体 | 第71-72页 |
| 5.4.3 BmmGT1催化糖基化逆反应 | 第72-73页 |
| 5.4.4 BmmGT1催化MMA的动力学参数测定 | 第73-74页 |
| 5.5 小结 | 第74-75页 |
| 第六章 糖基化反应得到的新化合物 | 第75-91页 |
| 6.1 引言 | 第75页 |
| 6.2 实验材料 | 第75页 |
| 6.3 实验方法 | 第75-77页 |
| 6.3.1 MA和UDP-D-N-乙酰葡萄糖胺糖基化反应产物的提取分离 | 第75-76页 |
| 6.3.2 MMA和UDP-D-葡萄糖糖基化反应产物的提取分离 | 第76-77页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第77-90页 |
| 6.4.1 化合物4的结构解析 | 第77-82页 |
| 6.4.2 化合物5的结构解析 | 第82-86页 |
| 6.4.3 化合物6的结构解析 | 第86-90页 |
| 6.5 小结 | 第90-91页 |
| 第七章 总结与展望 | 第91-93页 |
| 7.1 本研究工作总结 | 第91页 |
| 7.2 主要创新点 | 第91-92页 |
| 7.3 工作展望 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 个人简历 | 第100页 |
| 发表的学术论文 | 第100-101页 |
| 符号简写 | 第101-102页 |
