| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-32页 |
| ·手性化合物简介 | 第14-15页 |
| ·手性亚砜类化合物 | 第15-17页 |
| ·手性亚砜类化合物简介 | 第15-16页 |
| ·手性亚砜类化合物的用途 | 第16-17页 |
| ·手性亚砜类化合物的生物合成途径 | 第17-24页 |
| ·酶催化硫醚不对称氧化 | 第17-22页 |
| ·微生物整细胞催化硫醚不对称氧化 | 第22-23页 |
| ·抗体催化亚砜化 | 第23-24页 |
| ·细胞色素P450单加氧酶 | 第24-29页 |
| ·细胞色素P450单加氧酶催化的反应及其机制 | 第24-26页 |
| ·细胞色素P450单加氧酶的分类 | 第26-27页 |
| ·细胞色素P450单加氧酶的应用 | 第27-29页 |
| ·P450单加氧酶反应过程中辅酶再生 | 第29-30页 |
| ·电化学法再生 | 第29-30页 |
| ·酶偶联再生 | 第30页 |
| ·其它再生方法 | 第30页 |
| ·本课题主要研究目的及意义 | 第30-31页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第31-32页 |
| 第2章 硫醚单加氧酶产生菌株的鉴定及其催化特性 | 第32-44页 |
| ·前言 | 第32页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·药品和试剂 | 第32-33页 |
| ·主要仪器设备及分析软件 | 第33页 |
| ·菌株与培养基 | 第33页 |
| ·抗生素的配制 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-36页 |
| ·菌种的筛选 | 第33-34页 |
| ·ECU0066菌落形态特征 | 第34页 |
| ·ECU0066菌株基因组DNA的提取 | 第34页 |
| ·PCR扩增16S rDNA | 第34-35页 |
| ·T-A克隆及蓝白斑筛选 | 第35页 |
| ·重组质粒的鉴定及外源基因的测序 | 第35页 |
| ·序列分析及数据处理 | 第35-36页 |
| ·实验结果 | 第36-42页 |
| ·菌种筛选 | 第36页 |
| ·菌落特征 | 第36-37页 |
| ·基因组DNA提取 | 第37页 |
| ·16S rDNA PCR扩增及其鉴定 | 第37-38页 |
| ·16S rDNA基因序列的测序及系统发育分析 | 第38-39页 |
| ·ECU0066催化硫醚生成亚砜的特征 | 第39-40页 |
| ·ECU0066催化硫醚生成亚砜的诱导与抑制 | 第40-42页 |
| ·ECU0066对其它化合物的转化 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 第3章 红球菌中硫醚单加氧酶基因的克隆及其序列分析 | 第44-59页 |
| ·前言 | 第44页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·药品与试剂 | 第44页 |
| ·菌株与培养基 | 第44页 |
| ·引物合成 | 第44-45页 |
| ·主要仪器设备及分析软件 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-48页 |
| ·引物设计 | 第45-46页 |
| ·目的基因保守序列的PCR扩增 | 第46页 |
| ·染色体步移 | 第46-48页 |
| ·序列分析及数据处理 | 第48页 |
| ·实验结果 | 第48-57页 |
| ·保守序列PCR扩增结果 | 第48-49页 |
| ·染色体步移扩增未知序列 | 第49-53页 |
| ·序列分析 | 第53-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 第4章 P450SMO在大肠杆菌中的表达、纯化及其性质 | 第59-85页 |
| ·前言 | 第59页 |
| ·实验材料 | 第59-60页 |
| ·工具酶与化学试剂 | 第59页 |
| ·菌株与质粒载体 | 第59-60页 |
| ·培养基 | 第60页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-64页 |
| ·引物设计与P450SMO的克隆 | 第60-61页 |
| ·表达载体构建 | 第61页 |
| ·重组菌的培养及酶的诱导表达 | 第61-62页 |
| ·重组菌整细胞对硫醚转化 | 第62页 |
| ·重组P450SMO的纯化 | 第62页 |
| ·P450SMO的理化性质 | 第62-63页 |
| ·重组菌表达条件的优化 | 第63-64页 |
| ·实验结果 | 第64-82页 |
| ·重组质粒的构建 | 第64-66页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第66页 |
| ·重组菌酶活定性检测 | 第66-67页 |
| ·P450SMO的纯化及其性质表征 | 第67-70页 |
| ·P450SMO对不同硫醚底物的转化 | 第70-71页 |
| ·P450SMO对7-乙氧基香豆素的脱烃活性 | 第71-72页 |
| ·重组菌表达条件的优化 | 第72-78页 |
| ·重组菌整细胞反应条件优化 | 第78-81页 |
| ·重组菌整细胞对对氯苯甲硫醚的不对称氧化 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-83页 |
| ·小结 | 第83-85页 |
| 第5章 P450SM0辅酶再生体系的构建及其用于硫醚不对称氧化研究 | 第85-112页 |
| ·前言 | 第85-86页 |
| ·实验材料 | 第86-87页 |
| ·药品与试剂 | 第86页 |
| ·质粒与菌株 | 第86页 |
| ·主要仪器与设备 | 第86-87页 |
| ·引物合成 | 第87页 |
| ·实验方法 | 第87-94页 |
| ·枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶(GDH)基因的克隆与表达 | 第87-89页 |
| ·葡萄糖脱氢酶活力测定 | 第89页 |
| ·葡萄糖脱氢酶用于体外P450SMO催化过程中辅酶再生 | 第89页 |
| ·P450SMO与GDH共表达体系的构建 | 第89-94页 |
| ·重组菌整细胞转化 | 第94页 |
| ·实验结果 | 第94-110页 |
| ·枯草芽孢杆菌中葡萄糖脱氢酶基因(gdh)的克隆 | 第94-95页 |
| ·葡萄糖脱氢酶表达载体的构建 | 第95-96页 |
| ·葡萄糖脱氢酶在大肠杆菌中高效表达 | 第96-97页 |
| ·不同浓度辅酶NADPH对P450SMO转化硫醚的影响 | 第97-98页 |
| ·P450SMO不同反应体系对硫醚转化 | 第98-99页 |
| ·体外双酶偶联体系不对称转化硫醚 | 第99-100页 |
| ·重组菌整细胞共表达体系的构建 | 第100-105页 |
| ·重组大肠杆菌BL21(pET28a-P450SMO-GDH)表达条件的优化 | 第105-108页 |
| ·重组菌BL21(pET28a-P450SMO-GDH)在硫醚转化过程中辅酶再生作用 | 第108-109页 |
| ·重组菌BL21(pET28a-P450SMO-GDH)对对氯苯甲硫醚的转化 | 第109-110页 |
| ·讨论 | 第110-111页 |
| ·小结 | 第111-112页 |
| 结论与展望 | 第112-115页 |
| 参考文献 | 第115-131页 |
| 附录 | 第131-137页 |
| 攻读博士学位期间撰写的论文和专利 | 第137-138页 |
| 致谢 | 第138-139页 |
| 卷内备考表 | 第139页 |
