| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第12-16页 |
| 1.1 课题来源、研究目的和意义 | 第12-13页 |
| 1.2 国内外研究概况 | 第13-15页 |
| 1.3 论文的主要研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-24页 |
| 2.1 研究资料及仪器设备 | 第16-17页 |
| 2.1.1 研究对象 | 第16页 |
| 2.1.2 细胞株 | 第16页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.4 主要设备与仪器 | 第17页 |
| 2.2 实验流程与方法 | 第17-24页 |
| 2.2.1 免疫组织化学染色 | 第17-18页 |
| 2.2.2 细胞以及组织总RNA提取 | 第18页 |
| 2.2.3 逆转录反应 | 第18-19页 |
| 2.2.4 实时荧光定量PCR反应 | 第19页 |
| 2.2.5 细胞复苏 | 第19页 |
| 2.2.6 细胞培养 | 第19页 |
| 2.2.7 细胞冻存 | 第19-20页 |
| 2.2.8 细胞转染技术 | 第20页 |
| 2.2.9 细胞增殖检测实验(CCK8) | 第20页 |
| 2.2.10 细胞侵袭迁移检测实验(Transwell) | 第20页 |
| 2.2.11 划痕实验 | 第20-21页 |
| 2.2.12 细胞总蛋白提取 | 第21页 |
| 2.2.13 WesternBlot | 第21-22页 |
| 2.2.14 双荧光素酶报告基因分析实验 | 第22-23页 |
| 2.2.15 裸鼠成瘤实验 | 第23页 |
| 2.2.16 统计学分析 | 第23-24页 |
| 第三章 结果 | 第24-53页 |
| 3.1 CRC中ASPN表达情况 | 第24-27页 |
| 3.1.1 ASPN在结直肠组织中表达情况 | 第24-26页 |
| 3.1.2 ASPN在CRC四种细胞株中表达情况 | 第26-27页 |
| 3.1.3 CRC肿瘤组织、癌旁组织中ASPN表达差异 | 第27页 |
| 3.2 CRC中ASPN表达与临床病理参数之间的关系 | 第27-29页 |
| 3.3 生存分析 | 第29-31页 |
| 3.4 敲减ASPN导致CRC侵袭迁移、增殖能力减弱 | 第31-37页 |
| 3.4.1 CRC细胞中转染siASPN后转染效率以及相关蛋白检测 | 第31-33页 |
| 3.4.2 敲减ASPN后,CRC细胞侵袭迁移能力减弱 | 第33-35页 |
| 3.4.3 敲减ASPN后,CRC细胞增殖能力减弱 | 第35-37页 |
| 3.5 ASPN在CRC中由miR-101、miR-26a调控 | 第37-41页 |
| 3.5.1 生物信息学软件预测ASPN是miR-101、miR-26a的靶基因 | 第37-38页 |
| 3.5.2 CRC癌组织和癌旁组织中miR-101、miR-26a表达 | 第38页 |
| 3.5.3 CRC四种细胞株中miR-101、miR-26a表达 | 第38-39页 |
| 3.5.4 双荧光素酶报告基因证实ASPN是miR-101、miR-26a的靶基因 | 第39-40页 |
| 3.5.5 实时荧光定量PCR检测miR-101、miR-26a转染效率 | 第40页 |
| 3.5.6 WesternBlot验证调控关系 | 第40-41页 |
| 3.6 miR-101、miR-26a对CRC影响和敲减ASPN一致 | 第41-49页 |
| 3.6.1 miR-101、miR-26a可下调CRC细胞侵袭迁移能力 | 第41-46页 |
| 3.6.2 miR-101、miR-26a可使CRC细胞增殖能力减弱 | 第46-49页 |
| 3.7 miR-101、miR-26a可逆转ASPN的致癌作用,并调节PI3K/AKT信号 | 第49-53页 |
| 3.7.1 WesternBlot检测共转染后PI3K/AKT信号通路的改变 | 第49-50页 |
| 3.7.2 划痕、Transwell实验验证共转染后CRC细胞侵袭迁移能力的改变 | 第50-52页 |
| 3.7.3 CCK8实验验证共转染后CRC细胞增殖能力的改变 | 第52-53页 |
| 第四章 讨论 | 第53-56页 |
| 第五章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 英文缩写词表 | 第62-63页 |
| 综述 | 第63-74页 |
| 综述参考文献 | 第70-74页 |
| 在攻读硕士学位期间参加的项目 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
