| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第11-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-36页 |
| 2.1 材料 | 第14-22页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第14页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第14-15页 |
| 2.1.3 主要仪器及配置 | 第15-16页 |
| 2.1.4 溶液配置 | 第16-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-36页 |
| 2.2.1 神经病理性疼痛模型(SNL)制备及分组 | 第22页 |
| 2.2.2 颅内病毒注射以及颅内埋管 | 第22-25页 |
| 2.2.2.1 颅内伏核区慢病毒以及过表达注射 | 第23-24页 |
| 2.2.2.2 颅内伏核区埋管 | 第24页 |
| 2.2.2.3 颅内伏核区给药 | 第24-25页 |
| 2.2.3 行为学检测 | 第25-27页 |
| 2.2.3.1 机械性痛觉过敏行为学测试 | 第25页 |
| 2.2.3.2 热痛觉过敏的行为学测试 | 第25-26页 |
| 2.2.3.3 糖水偏好行为学实验 | 第26页 |
| 2.2.3.4 强迫游泳行为学实验 | 第26-27页 |
| 2.2.3.5 滚轮行为学实验 | 第27页 |
| 2.2.4 Real-timePCR | 第27-30页 |
| 2.2.4.1 组织总RNA提取 | 第27-28页 |
| 2.2.4.2 逆转录反应(20μL体系) | 第28-29页 |
| 2.2.4.3 引物设计 | 第29页 |
| 2.2.4.4 Real-timePCR(实时定量PCR)(10μl) | 第29-30页 |
| 2.2.4.5 结果分析采用2-(35)(35)CT(Livak法) | 第30页 |
| 2.2.5 WesternBlotting(免疫印迹试验) | 第30-34页 |
| 2.2.5.1 样品蛋白质提取及蛋白浓度测定 | 第30-31页 |
| 2.2.5.2 样品蛋白变性 | 第31页 |
| 2.2.5.3 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第31-33页 |
| 2.2.5.4 转膜(全湿法) | 第33页 |
| 2.2.5.5 免疫反应 | 第33页 |
| 2.2.5.6 图像分析 | 第33-34页 |
| 2.2.6 免疫荧光染色 | 第34-35页 |
| 2.2.6.1 制备组织 | 第34页 |
| 2.2.6.2 免疫荧光染色 | 第34-35页 |
| 2.2.7 统计分析 | 第35-36页 |
| 第三章 结果 | 第36-66页 |
| 3.1 L5脊神经结扎诱导的小鼠痛觉过敏和抑郁样行为并导致伏核区趋化因子表达升高 | 第36-42页 |
| 3.1.1 神经病理性疼痛模型(SNL)诱导机械性触诱发痛、热痛觉过敏和抑郁样行为 | 第36-38页 |
| 3.1.2 SNL引起伏核区CCL2mRNA和蛋白表达升高 | 第38-39页 |
| 3.1.3 SNL诱导小鼠伏核区CCL2免疫阳性神经元细胞增多 | 第39-42页 |
| 3.2 神经病理性疼痛模型诱导小鼠伏核区CCR2的表达水平升高 | 第42-47页 |
| 3.2.1 SNL模型引起伏核区CCR2mRNA和蛋白表达上调 | 第42-43页 |
| 3.2.2 SNL引起小鼠伏核区CCR2免疫阳性神经元细胞数增多 | 第43-47页 |
| 3.3 抑制CCR2可以缓解SNL引起的神经病理性疼痛和蛋白表达 | 第47-52页 |
| 3.3.1 伏核区注射CCR2shRNA干扰慢病毒可以缓解SNL模型后CCR2蛋白水平的变化 | 第47-49页 |
| 3.3.2 伏核区注射CCR2shRNA干扰慢病毒可缓解SNL模型引起的痛觉过敏和抑郁样行为 | 第49-52页 |
| 3.4 伏核区注射CCL2过表达病毒能够诱导痛觉过敏和抑郁样行为 | 第52-54页 |
| 3.4.1 CCL2过表达病毒引起伏核区CCL2mRNA表达水平上调 | 第52-53页 |
| 3.4.2 CCL2过表达病毒引起痛觉过敏和抑郁样行为 | 第53-54页 |
| 3.5 SNL模型激活NR2B信号分子,CCR2参与并调控NR2B磷酸化表达变化 | 第54-59页 |
| 3.5.1 SNL模型后伏核中NR2B表达水平上调 | 第54-55页 |
| 3.5.2 SNL后伏核内NR2B的表达水平和细胞分布 | 第55-57页 |
| 3.5.3 CCR2shRNA降低SNL模型引起的伏核NR2B磷酸化水平 | 第57-58页 |
| 3.5.4 CCL2过表达病毒引起小鼠伏核内NR2B磷酸化表达升高 | 第58-59页 |
| 3.6 伏核内注射NR2B拮抗剂对SNL引起的神经病理性疼痛和抑郁样行为的影响 | 第59-61页 |
| 3.6.1 伏核内NR2B选择性的拮抗剂缓解SNL引起的小鼠痛敏行为以及抑郁样行为 | 第59-61页 |
| 3.7 伏核区ERK信号分子参与SNL诱导的NR2B磷酸化水平的增加 | 第61-66页 |
| 3.7.1 SNL后,CCL2/CCR2作用于ERK调节伏核区内NR2B的磷酸化水平 | 第61-64页 |
| 3.7.2 ERK抑制剂降低SNL后伏核区内NR2B的磷酸化水平 | 第64页 |
| 3.7.3 ERK抑制剂缓解SNL模型引起的痛觉过敏和抑郁样行为 | 第64-66页 |
| 第四章 讨论 | 第66-71页 |
| 4.1 SNL模型引起伏核区趋化因子及其受体表达增加 | 第66-67页 |
| 4.2 CCL2/CCR2在神经病理性疼痛中的重要作用 | 第67-68页 |
| 4.3 CCL2/CCR2介导神经病理性疼痛以及其伴随抑郁症状 | 第68页 |
| 4.4 伏核壳区CCL2/CCR2可调节NMDA受体介导的电流 | 第68-69页 |
| 4.5 CCL2/CCR2诱导ERK依赖性的NR2B磷酸化并对疼痛行为和抑郁样行为产生作用 | 第69-71页 |
| 第五章 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 英文缩写词表 | 第77-78页 |
| 综述 伏核中趋化因子对神经病理性疼痛和抑郁样行为的调节作用 | 第78-89页 |
| 综述参考文献 | 第85-89页 |
| 在攻读硕士学位期间公开发表的论文和参加的项目 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
