| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 综述文献 | 第14-28页 |
| 1. Sohlh2基因的生理功能 | 第14-15页 |
| 2. 转基因动物生产制备研究进展 | 第15-19页 |
| 2.1 反转录病毒感染法 | 第16页 |
| 2.2 显微注射法 | 第16-17页 |
| 2.3 胚胎干细胞法 | 第17页 |
| 2.4 体细胞核移植法 | 第17页 |
| 2.5 精子载体法 | 第17-19页 |
| 3. 精子捕获并内化外源DNA的分子机制,SMGT的影响因素及存在问题 | 第19-22页 |
| 3.1 SMGT精子捕获并内化外源DNA的分子机制 | 第19-20页 |
| 3.2 外源DNA对SMGT的效率影响 | 第20页 |
| 3.3 精子质量对SMGT的效率影响 | 第20页 |
| 3.4 精子与外源基因孵育时间、温度及混合比例对SMGT效率的影响 | 第20-21页 |
| 3.5 孵育溶液中的电荷密度对SMGT效率的影响 | 第21页 |
| 3.6 SMGT存在的问题 | 第21-22页 |
| 4. 细胞穿膜肽的定义以及研究进展 | 第22-27页 |
| 4.1 细胞穿膜肽的结构特点以及分类 | 第22-23页 |
| 4.2 细胞穿膜肽与外源物质的连接方式 | 第23-24页 |
| 4.3 细胞穿膜肽的穿膜机制 | 第24-27页 |
| 5. 研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 水牛Sohlh2基因克隆及生物信息学分析 | 第28-38页 |
| 1 试验材料与方法 | 第28-33页 |
| 1.1 试验材料 | 第28-30页 |
| 1.2 试验方法 | 第30-33页 |
| 2 试验结果 | 第33-36页 |
| 2.1 总RNA的提取 | 第33页 |
| 2.2 克隆得到的水牛Sohlh2基因 | 第33-34页 |
| 2.3 水牛Sohlh2基因pMD18-T重组质粒克隆及鉴定 | 第34页 |
| 2.4 序列提交 | 第34页 |
| 2.5 Sohlh2基因生物信息学分析 | 第34-36页 |
| 3 分析与讨论 | 第36-37页 |
| 3.1 水牛Sohlh2基因的克隆 | 第36-37页 |
| 3.2 水牛Sohlh2基因的生物信息学分析 | 第37页 |
| 4 结论 | 第37-38页 |
| 第三章 水牛Sohlh2基因表达模式的研究 | 第38-46页 |
| 1 试验材料与方法 | 第38-41页 |
| 1.1 试验材料 | 第38-39页 |
| 1.2 试验方法 | 第39-41页 |
| 2 试验结果 | 第41-45页 |
| 2.1 定量引物验证 | 第41-42页 |
| 2.2 Sohlh2基因在水牛组织中表达模式的建立 | 第42页 |
| 2.3 Sohlh2基因真核表达载体及慢病毒载体的构建 | 第42-43页 |
| 2.4 慢病毒包装及滴度测定 | 第43-45页 |
| 3 分析和讨论 | 第45-46页 |
| 3.1 Sohlh2基因在不同组织的mRNA表达 | 第45页 |
| 3.2 构建Sohlh2基因的慢病毒载体 | 第45-46页 |
| 4 结论 | 第46页 |
| 第四章 穿膜肽在不同细胞及精子上的转染效率 | 第46-62页 |
| 1 材料和方法 | 第47-50页 |
| 1.1 材料 | 第47-48页 |
| 1.2 试验方法 | 第48-50页 |
| 2 实验结果 | 第50-58页 |
| 2.1 探讨C105y和Sohlh2基因质粒孵育条件及不同细胞类型对五种穿膜肽转染效果的影响 | 第50-54页 |
| 2.2 流式细胞仪检测不同穿膜肽的转染效率 | 第54-55页 |
| 2.3 穿膜肽与探针fam在不同孵育液和孵育温度下对猪精子转染效果的影响 | 第55-58页 |
| 3 分析讨论 | 第58-61页 |
| 3.1 探讨C105y和Sohlh2基因质粒孵育条件及不同细胞类型对五种穿膜肽转染效果的影响 | 第58-60页 |
| 3.2 流式细胞仪检测不同穿膜肽的转染效率 | 第60页 |
| 3.3 穿膜肽与探针fam在不同孵育液和孵育温度下对猪精子转染效果的影响 | 第60-61页 |
| 4 结论 | 第61-62页 |
| 第五章 利用穿膜肽和慢病毒进行IVF制备转Sohlh2基因猪胚胎 | 第62-75页 |
| 1 材料和方法 | 第62-66页 |
| 1.1 材料 | 第62-64页 |
| 1.2 试验方法 | 第64-66页 |
| 2 实验结果 | 第66-72页 |
| 2.1 不同方式处理精子对精子活率、平均曲线运动速度(VCL)、平均直线运动速度(VSL)和前向性(STR)影响 | 第66-70页 |
| 2.2 不同载体(慢病毒和穿膜肽C105y)对转Sohlh2基因猪胚胎发育的影响 | 第70-72页 |
| 3 分析与讨论 | 第72-74页 |
| 3.1 不同方式处理精子对精子活率、平均曲线运动速度(VCL)、平均直线运动速度(VSL)和前向性(STR)影响 | 第72-73页 |
| 3.2 不同载体(慢病毒和穿膜肽C105y)对转Sohlh基因猪胚胎发育的影响 | 第73-74页 |
| 4 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第81页 |
