| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 β-葡聚糖概述 | 第10-11页 |
| 1.2 β-1,3-1,4-葡聚糖酶 | 第11-14页 |
| 1.2.1 β-葡聚糖酶的分类 | 第11-12页 |
| 1.2.2 β-1,3-1,4-葡聚糖酶的来源 | 第12-13页 |
| 1.2.3 β-1,3-1,4-葡聚糖酶的结构和作用机理 | 第13-14页 |
| 1.2.4 β-1,3-1,4-葡聚糖酶的生化特性 | 第14页 |
| 1.3 β-1,3-1,4-葡聚糖酶的分子生物学研究 | 第14-16页 |
| 1.3.1 β-1,3-1,4-葡聚糖酶的基因克隆 | 第14-15页 |
| 1.3.2 β-1,3-1,4-葡聚糖酶的基因表达 | 第15-16页 |
| 1.4 β-1,3-1,4-葡聚糖酶在生物防治领域的应用 | 第16-17页 |
| 1.5 本研究目的意义 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第18-23页 |
| 2.1.1 菌株 | 第18页 |
| 2.1.2 载体 | 第18-19页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.4 主要试验试剂的配制 | 第20-21页 |
| 2.1.5 培养基 | 第21页 |
| 2.1.6 供试病原菌孢子悬液的制备 | 第21-22页 |
| 2.1.7 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-33页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第23页 |
| 2.2.2 β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的克隆 | 第23-26页 |
| 2.2.3 β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的序列分析 | 第26页 |
| 2.2.4 重组表达载体 pET28a(+)-bgl 的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.5 重组酶的诱导表达 | 第27-30页 |
| 2.2.6 重组酶的纯化 | 第30页 |
| 2.2.7 重组酶抗真菌活性测定 | 第30-31页 |
| 2.2.8 重组酶的特性研究 | 第31-33页 |
| 第三章 结果与分析 | 第33-50页 |
| 3.1 β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因克隆 | 第33-34页 |
| 3.1.1 β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的扩增 | 第33页 |
| 3.1.2 阳性克隆质粒的鉴定 | 第33-34页 |
| 3.2 β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因序列分析 | 第34-39页 |
| 3.2.1 β-1,3-1,4-葡聚糖酶核苷酸序列分析 | 第34-35页 |
| 3.2.2 β-1,3-1,4-葡聚糖酶同源性分析 | 第35-37页 |
| 3.2.3 β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因序列中稀有密码子分析 | 第37-38页 |
| 3.2.4 β-1,3-1,4-葡聚糖酶在大肠杆菌中密码子偏好性分析 | 第38页 |
| 3.2.5 β-1,3-1,4-葡聚糖酶疏水性分析 | 第38-39页 |
| 3.3 重组表达载体 pET28a(+)-bgl 的构建 | 第39-41页 |
| 3.3.1 重组表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 3.3.2 重组表达载体的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.4 重组酶的诱导表达 | 第41-43页 |
| 3.4.1 重组酶的 SDS-PAGE 检测 | 第41-42页 |
| 3.4.2 免疫印迹 Western-Blot 检测 | 第42页 |
| 3.4.3 诱导表达条件的优化 | 第42-43页 |
| 3.4.4 重组酶的纯化 | 第43页 |
| 3.5 重组酶抗真菌活性 | 第43-46页 |
| 3.5.1 重组酶对梨链格孢霉孢子萌发的影响 | 第43-44页 |
| 3.5.2 重组酶对梨链格孢霉菌丝生长的抑制作用 | 第44页 |
| 3.5.3 重组酶对梨链格孢霉的抑制作用 | 第44-45页 |
| 3.5.4 重组酶对梨采后黑斑病的防治效果 | 第45-46页 |
| 3.6 重组酶的特性研究 | 第46-50页 |
| 3.6.1 温度对重组酶抑菌活性的影响 | 第46页 |
| 3.6.2 pH 值对重组酶抑菌活性的影响 | 第46-47页 |
| 3.6.3 光照对重组酶抑菌活性的影响 | 第47-48页 |
| 3.6.4 金属离子对重组酶抑菌活性的影响 | 第48-50页 |
| 第四章 讨论 | 第50-52页 |
| 4.1 β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的克隆及表达载体的构建 | 第50页 |
| 4.2 β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第50-51页 |
| 4.3 重组 β-1,3-1,4-葡聚糖酶抑菌性质的研究 | 第51-52页 |
| 第五章 结论 | 第52-54页 |
| 第六章 展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
