摘要 | 第4-7页 |
Abstract | 第7-10页 |
英文缩略语 | 第11-18页 |
第一部分:血链球菌pox对H_2O_2,细胞外多糖及生物膜形成的影响 | 第18-38页 |
1 前言 | 第18-20页 |
2 材料和方法 | 第20-28页 |
2.1 实验用菌株及质粒 | 第20页 |
2.2 主要试剂和仪器 | 第20-23页 |
2.2.1 主要试剂 | 第20-22页 |
2.2.2 主要仪器 | 第22-23页 |
2.3 实验方法 | 第23-28页 |
2.3.1 细菌复苏、培养及冻存 | 第23页 |
2.3.2 SK36(WT)基因组DNA提取 | 第23页 |
2.3.3 转化 | 第23页 |
2.3.4 SK36 pox基因缺失突变株 Δpox的构建 | 第23-24页 |
2.3.5 SK36 pox基因复原突变株 Δpox-compl的构建 | 第24-25页 |
2.3.6 PB琼脂平板观察 Δpox的H_2O_2产生情况 | 第25页 |
2.3.7 观察 Δpox的生存能力 | 第25页 |
2.3.8 刚果红平板观察 Δpox的细胞外多糖生成情况 | 第25-26页 |
2.3.9 96 孔板结晶紫微量滴定法观察 Δpox的生物膜形成情况 | 第26页 |
2.3.10 RNA的提取,cDNA的合成及real-time RT-PCR | 第26-27页 |
2.3.11 统计分析 | 第27-28页 |
3 结果 | 第28-35页 |
3.1 SK36 Δpox及 Δpox-compl的构建与鉴定 | 第28-29页 |
3.2 SK36 Δpox中H_2O_2产量降低 | 第29-30页 |
3.3 SK36 Δpox生存能力增高 | 第30-32页 |
3.4 SK36 Δpox细胞外多糖生成增加 | 第32-33页 |
3.5 SK36 Δpox生物膜形成减少 | 第33-34页 |
3.6 pox基因在S. sanguinis生长周期中的表达情况分析 | 第34-35页 |
4 讨论 | 第35-37页 |
5 结论 | 第37-38页 |
第二部分:血链球菌Pox介导产生的H_2O_2对细菌细胞程序化死亡的影响 | 第38-53页 |
1 前言 | 第38-40页 |
2 材料和方法 | 第40-45页 |
2.1 实验用菌株及质粒 | 第40页 |
2.2 主要试剂和仪器 | 第40-41页 |
2.2.1 主要试剂 | 第40页 |
2.2.2 主要仪器 | 第40-41页 |
2.3 实验方法 | 第41-45页 |
2.3.1 细菌复苏、培养及冻存 | 第41页 |
2.3.2 SK36(WT)基因组DNA提取 | 第41页 |
2.3.3 转化 | 第41页 |
2.3.4 Δpox及 Δpox-compl的构建 | 第41页 |
2.3.5 WT及突变株中羟基生成情况分析 | 第41-42页 |
2.3.6 观察WT及突变株细胞膜电位的情况 | 第42页 |
2.3.7 WT及突变株中细胞DNA片段化分析 | 第42-43页 |
2.3.8 WT及突变株中细胞内DNA结构的分析 | 第43页 |
2.3.9 WT及突变株中PS外翻情况的分析 | 第43页 |
2.3.10 RNA的提取,cDNA的合成及real-time RT-PCR | 第43-44页 |
2.3.11 统计分析 | 第44-45页 |
3 结果 | 第45-50页 |
3.1 Δpox中羟基减少 | 第45页 |
3.2 H_2O_2诱导细菌细胞膜电位去极化 | 第45-46页 |
3.3 H_2O_2诱导细菌DNA片段化 | 第46-47页 |
3.4 H_2O_2诱导细菌染色体凝集 | 第47-49页 |
3.5 H_2O_2诱导细菌PS外翻于细胞膜 | 第49页 |
3.6 DNA损伤修复相关基因在 Δpox中表达上调 | 第49-50页 |
4 讨论 | 第50-52页 |
5 结论 | 第52-53页 |
第三部分:血链球菌Pox介导产生的H_2O_2对细菌感受态形成的影响 | 第53-74页 |
1 前言 | 第53-55页 |
2 材料和方法 | 第55-62页 |
2.1 实验用菌株及质粒 | 第55页 |
2.2 主要试剂和仪器 | 第55-56页 |
2.2.1 主要试剂 | 第55页 |
2.2.2 主要仪器 | 第55-56页 |
2.3 实验方法 | 第56-62页 |
2.3.1 细菌复苏、培养及冻存 | 第56页 |
2.3.2 SK36(WT)及其突变株基因组DNA的提取 | 第56页 |
2.3.3 DH-5α 中质粒的提取 | 第56-57页 |
2.3.4 转化 | 第57页 |
2.3.5 Δpox及 Δpox-compl的构建 | 第57页 |
2.3.6 ΔspxA2及 ΔpoxΔspx A2的构建 | 第57-58页 |
2.3.7 ΔspxA2-compl的构建 | 第58-59页 |
2.3.8 SpxA2定点突变株spxA2(C10A)和spxA2(C13A)的构建 | 第59页 |
2.3.9 PB琼脂平板观察 ΔspxA2和 ΔpoxΔspxA2的H_2O_2产生情况 | 第59页 |
2.3.10 WT及突变株自发转化能力分析 | 第59-60页 |
2.3.11 RNA的提取,cDNA的合成及real-time RT-PCR | 第60页 |
2.3.12 统计分析 | 第60-62页 |
3 结果 | 第62-72页 |
3.1 SK36Δpox的感受态被激活 | 第62-63页 |
3.2 ΔspxA2的感受态形成受抑制 | 第63-65页 |
3.3 ΔpoxΔspxA2中感受态情况分析 | 第65-66页 |
3.4 ΔspxA2中内源性H_2O_2产生情况分析 | 第66-67页 |
3.5 H_2O_2对spxA2基因表达的影响情况 | 第67-68页 |
3.6 SpxA2的CXXC结构对感受态形成的影响情况 | 第68-72页 |
4 讨论 | 第72-73页 |
5 结论 | 第73-74页 |
本研究创新性的自我评价 | 第74-75页 |
参考文献 | 第75-83页 |
综述 | 第83-96页 |
参考文献 | 第89-96页 |
攻读学位期间取得的研究成果 | 第96-97页 |
致谢 | 第97-98页 |
个人简历 | 第98页 |