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血链球菌Pox介导产生的H2O2对细菌细胞程序化死亡及感受态形成的影响

摘要第4-7页
Abstract第7-10页
英文缩略语第11-18页
第一部分:血链球菌pox对H_2O_2,细胞外多糖及生物膜形成的影响第18-38页
    1 前言第18-20页
    2 材料和方法第20-28页
        2.1 实验用菌株及质粒第20页
        2.2 主要试剂和仪器第20-23页
            2.2.1 主要试剂第20-22页
            2.2.2 主要仪器第22-23页
        2.3 实验方法第23-28页
            2.3.1 细菌复苏、培养及冻存第23页
            2.3.2 SK36(WT)基因组DNA提取第23页
            2.3.3 转化第23页
            2.3.4 SK36 pox基因缺失突变株 Δpox的构建第23-24页
            2.3.5 SK36 pox基因复原突变株 Δpox-compl的构建第24-25页
            2.3.6 PB琼脂平板观察 Δpox的H_2O_2产生情况第25页
            2.3.7 观察 Δpox的生存能力第25页
            2.3.8 刚果红平板观察 Δpox的细胞外多糖生成情况第25-26页
            2.3.9 96 孔板结晶紫微量滴定法观察 Δpox的生物膜形成情况第26页
            2.3.10 RNA的提取,cDNA的合成及real-time RT-PCR第26-27页
            2.3.11 统计分析第27-28页
    3 结果第28-35页
        3.1 SK36 Δpox及 Δpox-compl的构建与鉴定第28-29页
        3.2 SK36 Δpox中H_2O_2产量降低第29-30页
        3.3 SK36 Δpox生存能力增高第30-32页
        3.4 SK36 Δpox细胞外多糖生成增加第32-33页
        3.5 SK36 Δpox生物膜形成减少第33-34页
        3.6 pox基因在S. sanguinis生长周期中的表达情况分析第34-35页
    4 讨论第35-37页
    5 结论第37-38页
第二部分:血链球菌Pox介导产生的H_2O_2对细菌细胞程序化死亡的影响第38-53页
    1 前言第38-40页
    2 材料和方法第40-45页
        2.1 实验用菌株及质粒第40页
        2.2 主要试剂和仪器第40-41页
            2.2.1 主要试剂第40页
            2.2.2 主要仪器第40-41页
        2.3 实验方法第41-45页
            2.3.1 细菌复苏、培养及冻存第41页
            2.3.2 SK36(WT)基因组DNA提取第41页
            2.3.3 转化第41页
            2.3.4 Δpox及 Δpox-compl的构建第41页
            2.3.5 WT及突变株中羟基生成情况分析第41-42页
            2.3.6 观察WT及突变株细胞膜电位的情况第42页
            2.3.7 WT及突变株中细胞DNA片段化分析第42-43页
            2.3.8 WT及突变株中细胞内DNA结构的分析第43页
            2.3.9 WT及突变株中PS外翻情况的分析第43页
            2.3.10 RNA的提取,cDNA的合成及real-time RT-PCR第43-44页
            2.3.11 统计分析第44-45页
    3 结果第45-50页
        3.1 Δpox中羟基减少第45页
        3.2 H_2O_2诱导细菌细胞膜电位去极化第45-46页
        3.3 H_2O_2诱导细菌DNA片段化第46-47页
        3.4 H_2O_2诱导细菌染色体凝集第47-49页
        3.5 H_2O_2诱导细菌PS外翻于细胞膜第49页
        3.6 DNA损伤修复相关基因在 Δpox中表达上调第49-50页
    4 讨论第50-52页
    5 结论第52-53页
第三部分:血链球菌Pox介导产生的H_2O_2对细菌感受态形成的影响第53-74页
    1 前言第53-55页
    2 材料和方法第55-62页
        2.1 实验用菌株及质粒第55页
        2.2 主要试剂和仪器第55-56页
            2.2.1 主要试剂第55页
            2.2.2 主要仪器第55-56页
        2.3 实验方法第56-62页
            2.3.1 细菌复苏、培养及冻存第56页
            2.3.2 SK36(WT)及其突变株基因组DNA的提取第56页
            2.3.3 DH-5α 中质粒的提取第56-57页
            2.3.4 转化第57页
            2.3.5 Δpox及 Δpox-compl的构建第57页
            2.3.6 ΔspxA2及 ΔpoxΔspx A2的构建第57-58页
            2.3.7 ΔspxA2-compl的构建第58-59页
            2.3.8 SpxA2定点突变株spxA2(C10A)和spxA2(C13A)的构建第59页
            2.3.9 PB琼脂平板观察 ΔspxA2和 ΔpoxΔspxA2的H_2O_2产生情况第59页
            2.3.10 WT及突变株自发转化能力分析第59-60页
            2.3.11 RNA的提取,cDNA的合成及real-time RT-PCR第60页
            2.3.12 统计分析第60-62页
    3 结果第62-72页
        3.1 SK36Δpox的感受态被激活第62-63页
        3.2 ΔspxA2的感受态形成受抑制第63-65页
        3.3 ΔpoxΔspxA2中感受态情况分析第65-66页
        3.4 ΔspxA2中内源性H_2O_2产生情况分析第66-67页
        3.5 H_2O_2对spxA2基因表达的影响情况第67-68页
        3.6 SpxA2的CXXC结构对感受态形成的影响情况第68-72页
    4 讨论第72-73页
    5 结论第73-74页
本研究创新性的自我评价第74-75页
参考文献第75-83页
综述第83-96页
    参考文献第89-96页
攻读学位期间取得的研究成果第96-97页
致谢第97-98页
个人简历第98页

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