| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 符号说明及缩略词 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-31页 |
| 1.1 真菌纤维素酶及其转录调控的研究 | 第13-15页 |
| 1.1.1 真菌纤维素酶的种类 | 第13-14页 |
| 1.1.1.1 真菌纤维素酶的种类 | 第13-14页 |
| 1.1.1.2 真菌半纤维素酶的种类 | 第14页 |
| 1.1.2 真菌纤维素酶基因表达的转录调控 | 第14-15页 |
| 1.2 FluG-BrlA途径参与丝状真菌无性发育机制研究进展 | 第15-23页 |
| 1.2.1 brlA基因结构 | 第16页 |
| 1.2.2 BrlA、AbaA和WetA构成构巢曲霉无性发育的中心调控路径 | 第16-19页 |
| 1.2.2.1 brlA基因编码孢子发生中心调控路径的主要转录调控因子 | 第16-17页 |
| 1.2.2.2 AbaA通过与BrlA建立反馈回路自我增强中心调控路径 | 第17-18页 |
| 1.2.2.3 发育后期孢子成熟必需基因wetA | 第18页 |
| 1.2.2.4 受中心调控路径调节的基因 | 第18-19页 |
| 1.2.2.5 对中心调控路径起修饰作用的发育调节基因stuA和medA | 第19页 |
| 1.2.3 孢子发生中心调控路径的激活 | 第19-22页 |
| 1.2.3.1 fluG通过解除sfgA的抑制效应激活孢子发生途径 | 第19-20页 |
| 1.2.3.2 FlbA通过调节FadA的GTPase活性促进无性发育 | 第20页 |
| 1.2.3.3 FlbB、FlbD和FlbE对中心调控路径的调节 | 第20-21页 |
| 1.2.3.4 FlbC对中心调控路径的调节 | 第21-22页 |
| 1.2.4 FluG-BrlA途径的其它功能 | 第22页 |
| 1.2.5 BrlA参与草酸青霉无性发育机制 | 第22-23页 |
| 1.3 LaeA调节系统 | 第23-28页 |
| 1.3.1 laeA基因结构 | 第23-24页 |
| 1.3.2 LaeA的细胞定位 | 第24页 |
| 1.3.3 LaeA的功能 | 第24-28页 |
| 1.3.3.1 LaeA调节丝状真菌次级代谢 | 第24-25页 |
| 1.3.3.2 LaeA控制纤维素酶的表达 | 第25页 |
| 1.3.3.3 LaeA调节丝状真菌发育进程 | 第25-26页 |
| 1.3.3.4 LaeA参与控制Hulle细胞的形态建成 | 第26-27页 |
| 1.3.3.5 LaeA可能通过染色体修饰调节转录 | 第27-28页 |
| 1.3.3.6 LaeA的其它功能 | 第28页 |
| 1.4 本论文的立题依据和研究日的 | 第28-31页 |
| 第二章 草酸青霉LaeA调控孢子发生和纤维素酶表达的初步功能研究 | 第31-71页 |
| 2.1 材料和方法 | 第31-41页 |
| 2.1.1 菌株和培养基 | 第31-32页 |
| 2.1.2 常用试剂与仪器 | 第32-33页 |
| 2.1.2.1 常用试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.2.2 常用仪器 | 第33页 |
| 2.1.3 鉴定草酸青霉laeA同源基因 | 第33-34页 |
| 2.1.4 LaeA氨基酸序列分析 | 第34页 |
| 2.1.5 同源模建 | 第34页 |
| 2.1.6 LaeA相关突变菌株的构建 | 第34-37页 |
| 2.1.7 草酸青霉原生质体的制备、转化及转化子验证 | 第37-38页 |
| 2.1.7.1 原生质体的制备 | 第37页 |
| 2.1.7.2 原生质体转化 | 第37页 |
| 2.1.7.3 转化子验证 | 第37-38页 |
| 2.1.8 野生型及其构建菌株的表型分析 | 第38页 |
| 2.1.9 菌株的孢子计数 | 第38页 |
| 2.1.10 菌落形态显微观察 | 第38-39页 |
| 2.1.11 胞外蛋白SDS-PAGE分析 | 第39页 |
| 2.1.12 菌丝生物量测定 | 第39页 |
| 2.1.13 胞外蛋白浓度和酶活力的测定 | 第39-40页 |
| 2.1.14 △laeA中纤维素酶基因转录水平测定 | 第40-41页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第41-68页 |
| 2.2.1 草酸青霉114-2 LaeA的氨基酸序列分析 | 第41-43页 |
| 2.2.2 利用同源模建分析LaeA蛋白的空间结构 | 第43-45页 |
| 2.2.3 基因敲除、回补及过表达菌株的构建 | 第45-51页 |
| 2.2.3.1 laeA基因敲除、同补及过表达菌株的构建 | 第45-46页 |
| 2.2.3.2 laeA基因敲除、回补及过表达菌株的验证 | 第46-48页 |
| 2.2.3.3 creA基因敲除、clrB和xlnR基因过表达菌株的构建 | 第48-50页 |
| 2.2.3.4 creA基因敲除、clrB和xlnR基因过表达菌株的验证 | 第50-51页 |
| 2.2.4 LaeA相关突变菌株的表型分析 | 第51-55页 |
| 2.2.4.1 草酸青霉LaeA的功能与产孢相关 | 第51-52页 |
| 2.2.4.2 WT-PgpdA：：laeA和A10T-PgpdA：：laeA菌落表型没有明显变化 | 第52-53页 |
| 2.2.4.3 与△laeA相比AlaeAAcreA分生孢子产生能力进一步下降 | 第53-54页 |
| 2.2.4.4 △laeA-PgpdA：：clrB及△laeA-PgpdA::xlnR菌落表型与△laeA一致 | 第54-55页 |
| 2.2.5 LaeA相关突变菌株的孢子计数及显微观察 | 第55-57页 |
| 2.2.5.1 LaeA敲除株产分生孢子能力下降 | 第55-56页 |
| 2.2.5.2 LaeA相关突变株产孢延迟 | 第56-57页 |
| 2.2.6 LaeA敲除株生物量略有下降 | 第57-58页 |
| 2.2.7 LaeA相关突变菌株胞外蛋白分析及纤维素酶酶活力的测定 | 第58-62页 |
| 2.2.7.1 LaeA调控胞外蛋白的分泌及纤维素酶基因的表达 | 第58-60页 |
| 2.2.7.2 过表达LaeA导致纤维素酶酶活降低 | 第60-62页 |
| 2.2.8 LaeA的缺失对纤维素酶相关基因转录水平的影响 | 第62-66页 |
| 2.2.8.1 LaeA对纤维素酶合成调控主要发生在转录水平 | 第62-64页 |
| 2.2.8.2 LaeA敲除株中纤维素酶基因表达是其转录调控因子综合作用结果 | 第64-66页 |
| 2.2.9 LaeA是发酵后期纤维素酶转录调控因子行使功能所必需的 | 第66-68页 |
| 小结 | 第68-71页 |
| 第三章 草酸青霉LaeA介导BrlA调控孢子发生和纤维素酶表达的功能研究 | 第71-93页 |
| 3.1 材料和方法 | 第71-80页 |
| 3.1.1 菌株和培养基 | 第71-73页 |
| 3.1.2 鉴定草酸青霉brlA同源基因 | 第73页 |
| 3.1.3 BrlA氨基酸序列分析 | 第73页 |
| 3.1.4 LaeA和CreA相关突变株孢子发生调控基因转录水平测定 | 第73-74页 |
| 3.1.5 brlA过表达盒的构建 | 第74-75页 |
| 3.1.6 转化子的验证 | 第75页 |
| 3.1.7 brlA敲除株菌落形态和菌丝分支测定 | 第75-76页 |
| 3.1.8 A10T、A10T-PtrpC：：brlA和A10T-PgpdA：：brlA孢子计数 | 第76页 |
| 3.1.9 胞外蛋白SDS-PAGE分析 | 第76页 |
| 3.1.10 胞外蛋白浓度和酶活力的测定 | 第76页 |
| 3.1.11 △brlA中纤维素酶基因转录水平测定 | 第76页 |
| 3.1.12 LaeA和BrlA蛋白C末端FLAG-HA标签的敲入 | 第76页 |
| 3.1.13 串联亲和层析拉取LaeA蛋白复合物和BrlA蛋白复合物 | 第76-79页 |
| 3.1.14 LaeA和BrlA的Western Blot验证 | 第79-80页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第80-91页 |
| 3.2.1 LaeA和CreA相关突变株孢子发生调控基因转录水平测定 | 第80-82页 |
| 3.2.2 草酸青霉中BrlA表达是分生孢子产生的必要而非充分条件 | 第82-83页 |
| 3.2.3 纤维素酶基因启动子区均含有假定的BrlA/AbaA结合位点 | 第83-84页 |
| 3.2.4 BrlA敲除完全抑制分生孢子产生并引起菌丝分支数增加 | 第84-85页 |
| 3.2.5 BrlA敲除菌株纤维素酶酶活及转录水平测定 | 第85-87页 |
| 3.2.5.1 BrlA敲除引起纤维素酶酶活的提高 | 第85-86页 |
| 3.2.5.2 BrlA敲除株中纤维素酶基因转录水平上调 | 第86-87页 |
| 3.2.6 BrlA过表达菌株构建及转化子验证 | 第87-89页 |
| 3.2.7 BrlA过表达菌株孢子发生和纤维素酶酶活测定 | 第89-90页 |
| 3.2.7.1 A10T-PgpdA：：brlA较出发菌株分生孢子产生提高3.4倍 | 第89页 |
| 3.2.7.2 BrlA过表达菌株胞外蛋白分析及纤维素酶酶活力的测定 | 第89-90页 |
| 3.2.8 LaeA、BrlA蛋白复合物纯化及Western Blot验证 | 第90-91页 |
| 小结 | 第91-93页 |
| 论文创新性结果总结与展望 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-105页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第105-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第108页 |
