| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 一、引言 | 第15-30页 |
| 1.1 植物逆境胁迫应答与ABA信号转导 | 第15-24页 |
| 1.1.1 植物适应逆境胁迫的信号通路研究 | 第15-17页 |
| 1.1.2 植物适应盐胁迫的分子机制 | 第17-19页 |
| 1.1.3 植物干旱胁迫机制 | 第19-23页 |
| 1.1.4 ABA和非生物胁迫信号 | 第23-24页 |
| 1.2 AP2家族转录因子研究进展 | 第24-29页 |
| 1.2.1 GhRAV1在逆境胁迫应答方面的进展情况 | 第25-26页 |
| 1.2.2 GhRAV1在BR应答方面的进展情况 | 第26-28页 |
| 1.2.3 GhAP2蛋白的研究进展情况 | 第28-29页 |
| 1.3 立题依据和研究意义 | 第29-30页 |
| 二、材料与方法 | 第30-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-35页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第30页 |
| 2.1.2 菌种和质粒 | 第30页 |
| 2.1.3 工具酶 | 第30页 |
| 2.1.4 常用储存液 | 第30页 |
| 2.1.5 常用缓冲液 | 第30-31页 |
| 2.1.6 常用培养基(细菌培养、植物培养) | 第31-34页 |
| 2.1.7 PCR扩增所需试剂 | 第34页 |
| 2.1.8 离体胚所需培养基(BT培养基) | 第34页 |
| 2.1.9 树脂切片所需试剂 | 第34页 |
| 2.1.10 烟草表皮细胞注射液 | 第34-35页 |
| 2.1.11 仪器设备 | 第35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-44页 |
| 2.2.1 基因及蛋白序列分析 | 第35-36页 |
| 2.2.2 组织表达分析 | 第36-38页 |
| 2.2.3 胁迫处理情况下基因表达量 | 第38页 |
| 2.2.4 分离目的基因 | 第38页 |
| 2.2.5 载体构建方法及连接转化 | 第38页 |
| 2.2.6 大肠杆菌(E.coli-DH5α)、农杆菌(LBA4404、GV3101)感受态细胞的制备及转化 | 第38-39页 |
| 2.2.7 质粒DNA的提取(碱裂解法) | 第39页 |
| 2.2.8 GhRAV1亚细胞定位 | 第39页 |
| 2.2.9 拟南芥表型分析 | 第39-41页 |
| 2.2.10 棉花基因组GDNA的提取 | 第41页 |
| 2.2.11 棉花不同组织RNA的提取 | 第41页 |
| 2.2.12 棉花组织培养方法 | 第41页 |
| 2.2.13 棉花离体胚培养方法 | 第41页 |
| 2.2.14 酵母转录自激活检测方法 | 第41-42页 |
| 2.2.15 GhRAV1蛋白与棉花基因组DNA Pull-down实验 | 第42-44页 |
| 三、实验结果 | 第44-71页 |
| 3.1 GHRAV1蛋白结构及序列分析 | 第44-47页 |
| 3.1.1 cDNA的分离与鉴定 | 第44页 |
| 3.1.2 蛋白序列同源性分析 | 第44-45页 |
| 3.1.3 GhRAV1蛋白同源进化分析 | 第45-47页 |
| 3.2 GHRA1表达模式分析 | 第47页 |
| 3.3 GHRA1基因在不同处理条件下的差异表达 | 第47-49页 |
| 3.3.1 GhRAV1基因在胁迫条件下的差异表达(幼苗) | 第47-48页 |
| 3.3.2 GhRAV1基因在BL处理条件下的差异表达(纤维) | 第48-49页 |
| 3.4 GHRA1基因转录激活活性检测 | 第49-51页 |
| 3.4.1 pGBKT7-GhRAV1表达载体的构建及酵母转化 | 第49页 |
| 3.4.2 pGBKT7-GhRAV1转录激活活性检测 | 第49-51页 |
| 3.5 GHRAV1蛋白的靶基因分离鉴定 | 第51-53页 |
| 3.5.1 pet32a-GhRAV1融合表达载体的构建 | 第51-52页 |
| 3.5.2 GhRAV1蛋白的诱导及纯化 | 第52-53页 |
| 3.5.3 高纯度棉花基因组DNA的提取 | 第53页 |
| 3.5.4 靶基因分离鉴定结果 | 第53页 |
| 3.6 GHRAV1蛋白亚细胞定位分析 | 第53-55页 |
| 3.6.1 pBI121-GhRAV1-GFP融合表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 3.6.2 pBI121-GhRAV1-GFP融合蛋白在烟草表皮细胞的荧光定位观察 | 第54-55页 |
| 3.7 pMD-GHRAV1过量表达载体的构建及转基因植株的获得 | 第55-57页 |
| 3.7.1 pMD-GhRAV1过量表达载体的构建 | 第55页 |
| 3.7.2 pMD-GhRAV1过量表达拟南芥植株的鉴定 | 第55-57页 |
| 3.8 GHRA1转基因拟南芥的胁迫表型分析 | 第57-64页 |
| 3.8.1 GhRAV1转基因拟南芥对ABA的应答 | 第57-59页 |
| 3.8.2 GhRAV1转基因拟南芥增强对盐胁迫的敏感性 | 第59-62页 |
| 3.8.3 GhRAV1转基因拟南芥增强对干旱胁迫的敏感性 | 第62-63页 |
| 3.8.4 GhRAV1过量表达转基因拟南芥中胁迫相关基因的表达分析 | 第63-64页 |
| 3.9 GHRAV1转基因拟南芥的BR应答分析 | 第64-66页 |
| 3.9.1 GhRAV1转基因拟南芥根长受BL影响 | 第64-65页 |
| 3.9.2 GhRAV1转基因拟南芥根组织切片分析 | 第65-66页 |
| 3.10 GHAP2 RNAI转基因棉花分析 | 第66-71页 |
| 3.10.1 GhAP2基因在ACC处理下的差异表达 | 第66页 |
| 3.10.2 pMD-35S：：GhAP2RNAi转基因棉花鉴定 | 第66-67页 |
| 3.10.3 pMD-35S：：GhAP2RNAi转基因棉花的RNA水平鉴定 | 第67-68页 |
| 3.10.4 ACC处理下,pMD-35S：：GhAP2RNAi转基因棉花的离体胚珠实验 | 第68-69页 |
| 3.10.5 35S：：GhAP2RNAi转基因棉花的组培及继代培养 | 第69-71页 |
| 四、讨论 | 第71-76页 |
| 4.1 GHRAV1结构及进化分析 | 第71页 |
| 4.2 GHRAV1组织表达与转录抑制活性 | 第71-72页 |
| 4.3 GHRAV1受干旱和高盐诱导表达 | 第72页 |
| 4.4 一些胁迫相关基因可能受GHRAV1调节 | 第72-73页 |
| 4.5 GHRAV1转基因拟南芥植株生理指标的改变 | 第73-74页 |
| 4.6 GHRAV1可能参与BR信号应答 | 第74页 |
| 4.7 GHAP2可能参与乙烯信号应答 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 硕士研究生期间发表的论文 | 第83-84页 |
| 附录：本文缩写符号 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
