| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-20页 |
| 第一节 肺炎链球菌及其危害 | 第12-13页 |
| 第二节 肺炎链球菌疫苗的历史和现状 | 第13-15页 |
| 第三节 肺炎链球菌溶血素蛋白 Ply | 第15-16页 |
| 第四节 BLP 技术 | 第16-18页 |
| 第五节 论文设计 | 第18-20页 |
| （一） 论文目的 | 第18-19页 |
| （二） 实验设计 | 第19-20页 |
| 第二章 PlyWT 及其减毒突变体 PlyM2 的制备 | 第20-36页 |
| 第一节 材料、试剂与仪器 | 第20-22页 |
| （一） 主要仪器 | 第20页 |
| （二） 菌株、载体及细胞 | 第20-21页 |
| （三） 酶及试剂盒 | 第21页 |
| （四） 主要试剂 | 第21页 |
| （五） 主要溶液的配制 | 第21-22页 |
| 第二节 实验方法 | 第22-29页 |
| （一）转化 | 第22-23页 |
| （二） 质粒的小量提取操作 | 第23-24页 |
| （三） 核酸的琼脂糖凝胶回收操作 | 第24页 |
| （四） pRSETB-PlyM2 表达载体的构建 | 第24-25页 |
| （五） 点突变 PCR 制备 PlyWT 基因 | 第25-26页 |
| （六） SDS-PAGE 蛋白凝胶电泳 | 第26-27页 |
| （七） Western-Blot 检测 | 第27-28页 |
| （八） 目的蛋白的大量表达 | 第28页 |
| （九） 镍亲和层析法蛋白纯化 | 第28-29页 |
| 第三节 实验结果 | 第29-35页 |
| （一） pRSETB-PlyM2 表达质粒的构建 | 第29-31页 |
| （二） pRSETB-PlyWT 表达质粒的构建 | 第31-32页 |
| （三） PlyM2 和 PlyWT 的表达 | 第32-33页 |
| （四） PlyM2 和 PlyWT 的纯化 | 第33-35页 |
| 第四节 本章小结 | 第35-36页 |
| 第三章 PlyM2 的结构检测、溶血活性检测及单克隆抗体的制备 | 第36-54页 |
| 第一节 材料、试剂与仪器 | 第36-37页 |
| （一） 主要仪器 | 第36页 |
| （二） 细胞及动物 | 第36页 |
| （三） 主要试剂 | 第36-37页 |
| （四） 主要溶液配制 | 第37页 |
| 第二节 实验方法 | 第37-44页 |
| （一） PlyM2 与 PlyWT 的结构检测 | 第37-38页 |
| （二） PlyM2 与 PlyWT 的溶血活性检测 | 第38-39页 |
| （三） Ply 单克隆抗体的制备与检测 | 第39-44页 |
| 第三节 实验结果 | 第44-53页 |
| （一） PlyM2 与 PlyWT 的结构检测 | 第44-48页 |
| （二） PlyM2 与 PlyWT 的溶血活性检测 | 第48-50页 |
| （三） Ply 单克隆抗体的制备与检测 | 第50-53页 |
| 第四节 本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 PlyM2 氢氧化铝佐剂免疫原性及保护性研究 | 第54-64页 |
| 第一节 材料、试剂 | 第54页 |
| （一） 主要菌株 | 第54页 |
| （二） 主要试剂 | 第54页 |
| （三） 主要设备 | 第54页 |
| 第二节 实验方法 | 第54-57页 |
| （一） PlyM2 的免疫原性 | 第54-55页 |
| （二） PlyM2 多抗抑制实验 | 第55-56页 |
| （三） PlyM2 攻毒保护性实验 | 第56-57页 |
| 第三节 实验结果 | 第57-62页 |
| （一） PlyM2 的免疫原性 | 第57-58页 |
| （二） PlyM2 多抗抑制实验 | 第58-59页 |
| （三） PlyM2 攻毒保护性实验 | 第59-62页 |
| 第四节 本章小结 | 第62-64页 |
| 第五章 PlyM2 的 BLP 技术应用 | 第64-83页 |
| 第一节 材料、试剂与仪器 | 第64页 |
| （一） 菌种及载体 | 第64页 |
| （二） 主要试剂 | 第64页 |
| （三） 主要溶液的配制方法 | 第64页 |
| 第二节 实验方法 | 第64-70页 |
| （一） PlyPA 的制备 | 第64-67页 |
| （二） BLP 的制备、鉴定与定量方法的建立 | 第67-68页 |
| （三） BLP-PlyPA 疫苗的制备 | 第68-69页 |
| （四） BLP-PlyPA 免疫结果与检测 | 第69-70页 |
| 第三节 实验结果 | 第70-81页 |
| （一） PlyPA 的制备 | 第70-75页 |
| （二） BLP 的制备，鉴定与定量方法的建立 | 第75-78页 |
| （三） BLP-PlyPA 疫苗的制备 | 第78-80页 |
| （四） BLP-PlyPA 免疫结果与检测 | 第80-81页 |
| 第四节 本章小结 | 第81-83页 |
| 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
