| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 1 前言 | 第10-25页 |
| 1.1 小麦种子贮藏蛋白的组成及分类 | 第10-12页 |
| 1.2 醇溶蛋白基因的染色体定位及其等位变异 | 第12-14页 |
| 1.3 醇溶蛋白基因的克隆和分子结构 | 第14-15页 |
| 1.4 醇溶蛋白与乳糜泻的关系 | 第15-16页 |
| 1.5 醇溶蛋白的功能表达研究 | 第16-17页 |
| 1.6 醇溶蛋白基因对面粉品质的影响 | 第17-18页 |
| 1.7 α-醇溶蛋白基因克隆现状及展望 | 第18-21页 |
| 1.8 小麦醇溶蛋白的研究方法 | 第21-22页 |
| 1.9 小麦品质改良的研究现状 | 第22-25页 |
| 1.9.1 化学诱变育种 | 第23页 |
| 1.9.2 辐射诱变育种 | 第23页 |
| 1.9.3 体细胞无性系变异 | 第23-24页 |
| 1.9.4 外源 DNA 导入 | 第24页 |
| 1.9.5 体细胞杂交 | 第24-25页 |
| 1.9.6 转基因 | 第25页 |
| 1.9.7 有性杂交 | 第25页 |
| 1.10 本试验的目的及意义 | 第25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25-26页 |
| 2.1.2 菌株与载体 | 第26页 |
| 2.1.3 酶及主要生化试剂 | 第26页 |
| 2.1.4 主要仪器与设备 | 第26页 |
| 2.1.5 常规试剂的配制 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-36页 |
| 2.2.1 α-醇溶蛋白的提取和 A-PAGE 分析 | 第27-28页 |
| 2.2.1.1 α-醇溶蛋白的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.1.2 A-PAGE 电泳 | 第28页 |
| 2.2.2 小麦种子基因组的 DNA 提取 | 第28页 |
| 2.2.3 基因组 DNA 的质量鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.4 目的基因的克隆 | 第29-32页 |
| 2.2.4.1 引物设计 | 第29页 |
| 2.2.4.2 PCR 扩增目的基因 | 第29页 |
| 2.2.4.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第29-30页 |
| 2.2.4.4 PCR 产物的回收纯化 | 第30页 |
| 2.2.4.5 目的片段的连接 | 第30-31页 |
| 2.2.4.6 大肠杆菌转化 | 第31页 |
| 2.2.4.7 阳性克隆的筛选 | 第31-32页 |
| 2.2.4.8 阳性克隆的测序 | 第32页 |
| 2.2.4.9 基因染色体定位 | 第32页 |
| 2.2.5 α-醇溶蛋白基因的原核表达 | 第32-36页 |
| 2.2.5.1 PCR 切除信号肽编码序列 | 第32-33页 |
| 2.2.5.2 原核表达载体的构建与鉴定 | 第33页 |
| 2.2.5.3 质粒的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.5.4 重组质粒的诱导表达 | 第34-35页 |
| 2.2.5.5 重组蛋白的 SDS-PAGE 分析 | 第35-36页 |
| 2.2.6 表达产物纯化及功能分析 | 第36页 |
| 2.2.6.1 目的蛋白的纯化 | 第36页 |
| 2.2.6.2 目的蛋白功能鉴定 | 第36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-50页 |
| 3.1 供试材料的Α-醇溶蛋白基因的 A-PAGE 分析 | 第36-37页 |
| 3.2 α-醇溶蛋白基因编码区序列的克隆和序列分析 | 第37-44页 |
| 3.2.1 α-醇溶蛋白核苷酸序列分析 | 第37-40页 |
| 3.2.2 推导氨基酸的序列分析 | 第40-41页 |
| 3.2.3 半胱氨酸位置和数目分析 | 第41页 |
| 3.2.4 毒性多肽位点分析 | 第41-42页 |
| 3.2.5 系统进化分析 | 第42-44页 |
| 3.3 α-醇溶蛋白基因的染色体定位 | 第44-47页 |
| 3.4 基因的诱导表达与鉴定 | 第47-49页 |
| 3.5 目的蛋白的功能鉴定 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-54页 |
| 4.1 醇溶蛋白的分离 | 第50-51页 |
| 4.2 α-醇溶蛋白基因的分子克隆 | 第51-52页 |
| 4.3 α-醇溶蛋白基因的结构特征及染色体定位 | 第52-53页 |
| 4.4 α-醇溶蛋白基因的原核表达 | 第53-54页 |
| 4.5 表达产物的体外功能鉴定 | 第54页 |
| 5 结论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 | 第65页 |
