| 中文摘要 | 第4-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 第一章 miR-34a 下调c-Met 蛋白表达从而抑制肝癌细胞侵袭转移 | 第19-55页 |
| 一. 背景知识 | 第19-29页 |
| 1.1 miRNA 的研究进展 | 第19-25页 |
| 1.1.1 miRNA 简介 | 第19-20页 |
| 1.1.2 miRNA 的生物发生 | 第20页 |
| 1.1.3 miRNA 对靶基因的作用机制 | 第20-21页 |
| 1.1.4 miRNA 的生物功能 | 第21页 |
| 1.1.5 miRNA 与肿瘤侵袭转移 | 第21-25页 |
| 1.2 HGF/c-Met 系统的研究进展 | 第25-28页 |
| 1.2.1 HGF/c-Met 蛋白 | 第25-27页 |
| 1.2.2 HGF 体外实验研究 | 第27页 |
| 1.2.3 c-Met 蛋白表达与原发性肝癌 | 第27页 |
| 1.2.4 HGF/c-Met 系统作用机制 | 第27-28页 |
| 1.3 立题依据及设计 | 第28-29页 |
| 二. 实验材料 | 第29-33页 |
| 2.1 质粒、菌株及细胞系 | 第29页 |
| 2.2 肝癌病人肿瘤标本 | 第29页 |
| 2.3 主要试剂 | 第29-30页 |
| 2.4 主要溶液 | 第30-32页 |
| 2.5 引物 | 第32-33页 |
| 2.6 主要仪器 | 第33页 |
| 三. 实验方法 | 第33-40页 |
| 3.1 细胞培养 | 第33页 |
| 3.2 细胞及组织样品RNA 的提取 | 第33-34页 |
| 3.3 cDNA 的合成 | 第34页 |
| 3.4 实时定量PCR | 第34-35页 |
| 3.5 HepG2 细胞基因组DNA 的提取 | 第35页 |
| 3.6 构建包含c-Met 3’UTR 的报告基因载体 | 第35-36页 |
| 3.7 哺乳动物细胞的转染 | 第36-37页 |
| 3.8 双荧光素酶报告基因检测 | 第37页 |
| 3.9 Western blot 分析 | 第37-38页 |
| 3.10 细胞增殖能力检测 | 第38页 |
| 3.11 流式细胞术检测 | 第38-39页 |
| 3.12 细胞离散分析 | 第39页 |
| 3.13 细胞侵袭转移分析 | 第39-40页 |
| 3.14 统计学处理方法 | 第40页 |
| 四. 实验结果 | 第40-53页 |
| 4.1 荧光素酶报告基因技术证明miR-34a 负调控c-Met 基因表达 | 第40-41页 |
| 4.2 肝癌病人及组织样本分析 | 第41-42页 |
| 4.3 qRT-PCR 检测肝癌及癌旁组织样本中miR-34a 的表达 | 第42-44页 |
| 4.4 miR-34a 的表达下调与肝癌组织的侵袭转移有关 | 第44页 |
| 4.5 在人类肝癌组织中miR-34a 和c-Met 的表达呈负相关 | 第44-45页 |
| 4.6 qRT-PCR 验证不同肝癌细胞系中c-Met 的表达 | 第45-46页 |
| 4.7 在HepG2 细胞中miR-34a 下调c-Met 的表达，同时也减少ERK1/2 的磷酸化水平 | 第46-48页 |
| 4.8 在 HepG2 细胞中 miR-34a 对增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响 | 第48-49页 |
| 4.9 HGF 刺激HepG2 细胞转移具有浓度依赖性 | 第49-50页 |
| 4.10 miR-34a 抑制HepG2 细胞离散 | 第50-51页 |
| 4.11 miR-34a 抑制HepG2 细胞转移 | 第51-52页 |
| 4.12 miR-34a 抑制HepG2 细胞侵袭 | 第52-53页 |
| 五. 讨论 | 第53-54页 |
| 六. 小结 | 第54-55页 |
| 第二章 甲型减毒嵌合流感病毒诱导HIV-1 广谱的中和抗体 | 第55-102页 |
| 第一节 背景知识 | 第55-65页 |
| 一. 流感病毒的相关背景 | 第55-58页 |
| 1.1 流感简介 | 第55-56页 |
| 1.2 采用哺乳动物细胞培养流感病毒的优越性 | 第56-57页 |
| 1.3 流感病毒受体简介 | 第57页 |
| 1.4 Vero 细胞用于疫苗生产和研发 | 第57页 |
| 1.5 立题依据及设计 | 第57-58页 |
| 二. HIV-1 及AIDS 疫苗的背景知识 | 第58-65页 |
| 2.1 HIV-1 病毒简介 | 第58页 |
| 2.2 HIV-1 的包膜蛋白 | 第58-59页 |
| 2.3 HIV-1 和流感病毒的包膜蛋白比较 | 第59-61页 |
| 2.4 HIV-1 的MPER 区 | 第61页 |
| 2.5 AIDS 疫苗及其研究进展 | 第61-63页 |
| 2.6 立题依据及设计 | 第63-65页 |
| 第二节 在Vero 细胞中过表达SIAT1 刺激人类流感病毒增殖 | 第65-75页 |
| 一. 实验材料 | 第65-67页 |
| 1.1 质粒、病毒及细胞系 | 第65页 |
| 1.2 主要试剂 | 第65-66页 |
| 1.3 主要溶液 | 第66页 |
| 1.4 构建SIAT1 表达载体引物 | 第66页 |
| 1.5 主要仪器 | 第66-67页 |
| 二. 实验方法 | 第67-69页 |
| 2.1 细胞培养 | 第67页 |
| 2.2 pcDNA3.1-SIAT1-Myc 表达质粒构建 | 第67页 |
| 2.3 稳定表达SIAT1 的Vero 细胞系的建立 | 第67-68页 |
| 2.4 Western blot 分析 | 第68页 |
| 2.5 免疫荧光显微技术 | 第68页 |
| 2.6 噬菌斑测定 | 第68-69页 |
| 2.7 统计学处理方法 | 第69页 |
| 三. 实验结果 | 第69-73页 |
| 3.1 pcDNA3.1-SIAT1-Myc 表达质粒的构建 | 第69页 |
| 3.2 稳定表达SIAT1 的Vero-SIAT1 细胞系的建立 | 第69-71页 |
| 3.3 Vero-SIAT1 细胞的α-2,6 和α-2,3 唾液酸化作用 | 第71-72页 |
| 3.4 在Vero-SIAT1 细胞中流感病毒的增殖 | 第72-73页 |
| 四. 讨论 | 第73-74页 |
| 五. 小结 | 第74-75页 |
| 第三节 甲型减毒嵌合流感病毒诱导HIV-1 广谱的中和抗体 | 第75-102页 |
| 一. 实验材料 | 第75-80页 |
| 1.1 质粒、病毒及细胞系 | 第75-76页 |
| 1.2 实验动物 | 第76页 |
| 1.3 主要试剂 | 第76-77页 |
| 1.4 主要溶液 | 第77-78页 |
| 1.5 引物 | 第78-79页 |
| 1.6 肽合成 | 第79-80页 |
| 1.7 主要仪器 | 第80页 |
| 二. 实验方法 | 第80-88页 |
| 2.1 细胞培养 | 第80页 |
| 2.2 甲型嵌合流感病毒载体的构建 | 第80-82页 |
| 2.3 哺乳动物细胞的转染 | 第82页 |
| 2.4 转染子病毒的鸡胚传代和验证 | 第82-84页 |
| 2.5 Western blot 分析 | 第84页 |
| 2.6 TCID50 法检测甲型减毒嵌合流感病毒的滴度 | 第84-85页 |
| 2.7 豚鼠免疫策略及方法 | 第85-86页 |
| 2.8 豚鼠血清的制备 | 第86-87页 |
| 2.9 ELISA 检测 | 第87页 |
| 2.10 HIV-1 假病毒中和抗体检测 | 第87-88页 |
| 2.11 统计学处理方法 | 第88页 |
| 三. 实验结果与讨论 | 第88-101页 |
| 3.1 甲型嵌合流感病毒载体的构建 | 第88-91页 |
| 3.2 甲型减毒嵌合流感病毒的包装及纯化 | 第91-93页 |
| 3.3 甲型减毒嵌合流感病毒的鉴定 | 第93-94页 |
| 3.4 TCID50 实验检测甲型减毒嵌合流感病毒的滴度 | 第94-95页 |
| 3.5 甲型减毒嵌合流感病毒诱导豚鼠的体液免疫应答 | 第95-101页 |
| 四. 小结 | 第101-102页 |
| 结论 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-112页 |
| 作者简历 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
