| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 常用缩略词 | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| 第一节 鱼类抗菌肽的研究 | 第12-16页 |
| 1 鱼类抗菌肽的分类 | 第12-13页 |
| ·不含半胱氨酸形成α螺旋结构 | 第12-13页 |
| ·含有多个半胱氨酸形成β折叠结构 | 第13页 |
| ·组蛋白样的抗菌肽 | 第13页 |
| ·具有糖基化修饰的抗菌肽 | 第13页 |
| 2 鱼类抗菌肽的生物学活性 | 第13-14页 |
| 3 鱼类抗菌肽的抗菌机制 | 第14-15页 |
| 4 鱼类抗菌肽表达特异性 | 第15-16页 |
| 第二节 抗菌肽hepcidin的研究进展 | 第16-18页 |
| 1 Hepcidin的分子结构 | 第16-17页 |
| 2 Hepcidin的表达调控 | 第17-18页 |
| 3 Hepcidin的功能活性 | 第18页 |
| 第三节 抗菌肽基因工程及应用前景 | 第18-22页 |
| 1 抗菌肽的基因工程 | 第18-21页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第19-21页 |
| ·酵母表达系统 | 第21页 |
| 2 应用前景 | 第21-22页 |
| 第四节 本实验的目的意义、技术路线 | 第22-24页 |
| 1 目的意义 | 第22-23页 |
| 2 技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 黄鳝hepcidin基因ORF的克隆 | 第24-33页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第24-26页 |
| ·方法 | 第26-29页 |
| ·hepcidin基因ORF克隆策略 | 第26页 |
| ·hepcidin基因引物的设计 | 第26页 |
| ·总RNA提取 | 第26-27页 |
| ·反转录 | 第27页 |
| ·ORF扩增 | 第27-28页 |
| ·目的片段回收 | 第28页 |
| ·连接 | 第28-29页 |
| ·转化 | 第29页 |
| ·测序验证 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-31页 |
| ·总RNA提取 | 第29-30页 |
| ·hepcidin基因ORF克隆 | 第30页 |
| ·测序验证 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| 第三章 Hepcidin氨基酸序列的生物信息学分析 | 第33-48页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·网络资源及应用软件 | 第33-34页 |
| ·网络资源 | 第33页 |
| ·应用软件 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-35页 |
| ·氨基酸组成、分子量、等电点分析 | 第34页 |
| ·信号肽分析 | 第34页 |
| ·跨膜区分析 | 第34页 |
| ·疏水性分析 | 第34页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第34-35页 |
| ·蛋白质三级结构预测 | 第35页 |
| ·蛋白质功能结构域分析 | 第35页 |
| ·多序列分析及基因进化分析 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-46页 |
| ·编码的氨基酸序列 | 第35-36页 |
| ·蛋白质基本性质分析 | 第36-37页 |
| ·信号肽分析 | 第37页 |
| ·跨膜区分析 | 第37-38页 |
| ·疏水性分析 | 第38-39页 |
| ·Hepcidin编码蛋白质二级结构预测 | 第39-42页 |
| ·编码蛋白质三级结构预测 | 第42-43页 |
| ·结构功能域分析 | 第43-44页 |
| ·同源性分析 | 第44-46页 |
| ·讨论 | 第46页 |
| ·小结 | 第46-48页 |
| 第四章 黄鳝抗菌肽hepcidin原核表达载体的构建及表达 | 第48-66页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-54页 |
| ·Hepcidin基因原核表达载体的构建 | 第49-52页 |
| ·黄鳝抗菌肽hepcidin的原核表达 | 第52-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-63页 |
| ·加酶切位点引物的PCR扩增 | 第54-55页 |
| ·目的基因片段与表达载体pET32a(+)的双酶切鉴定 | 第55-56页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第56-57页 |
| ·重组表达质粒的序列鉴定 | 第57页 |
| ·重组表达蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第57-59页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第59-60页 |
| ·诱导时间的优化 | 第60-61页 |
| ·重组蛋白可溶性鉴定 | 第61-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| ·关于表达载体pET32a(+) | 第63页 |
| ·关于表达菌 | 第63-64页 |
| ·含信号肽序列的hepcidin基因在pET32a(+)中不表达的原因分析 | 第64页 |
| ·关于表达条件的优化 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 第五章 总结与展望 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
