| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-25页 |
| 1.1 荧光蛋白简介 | 第10-15页 |
| 1.1.1 荧光蛋白 | 第10页 |
| 1.1.2 荧光蛋白的发展简史 | 第10-11页 |
| 1.1.3 绿色荧光蛋白的结构和发光原理 | 第11-12页 |
| 1.1.4 多种多样的荧光蛋白 | 第12-14页 |
| 1.1.5 荧光蛋白的新应用 | 第14-15页 |
| 1.2 生物传感器简介 | 第15-17页 |
| 1.2.1 遗传编码的荧光生物传感器的优点 | 第15页 |
| 1.2.2 遗传编码的荧光生物传感器的实例 | 第15-17页 |
| 1.3 基因编码生物传感器的设计 | 第17-20页 |
| 1.3.1 基因编码生物传感器的设计原理 | 第17-18页 |
| 1.3.2 报告基因的选择 | 第18-19页 |
| 1.3.3 生物传感器的优化 | 第19-20页 |
| 1.4 NADP~+简介 | 第20-23页 |
| 1.4.1 NADP~+是细胞内重要的调控因子 | 第20-21页 |
| 1.4.2 NADP~+的代谢研究 | 第21-23页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 第2章 基于FRET设计荧光生物传感器 | 第25-52页 |
| 2.1 引言 | 第25-26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.2.1 菌种、质粒及基因 | 第26页 |
| 2.2.2 药品与试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第27页 |
| 2.2.4 溶液配置 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-41页 |
| 2.3.1 获取大肠杆菌MG1655的kpr基因 | 第28-31页 |
| 2.3.2 抽提pET-28a(+)质粒 | 第31-32页 |
| 2.3.3 kpr基因与pET-28a(+)载体的酶切连接 | 第32-33页 |
| 2.3.4 构建菌株的获取 | 第33-34页 |
| 2.3.5 传感器的linker优化 | 第34-39页 |
| 2.3.6 获取BL21菌株 | 第39-40页 |
| 2.3.7 荧光蛋白的获得 | 第40页 |
| 2.3.8 荧光生物传感器的体外检测 | 第40-41页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第41-51页 |
| 2.4.1 实验设计原理 | 第41-44页 |
| 2.4.2 kpr基因的获取 | 第44-45页 |
| 2.4.3 kpr/pET-28a(+)/BL21的构建 | 第45页 |
| 2.4.4 传感器的linker优化 | 第45-46页 |
| 2.4.5 荧光生物传感器的特点 | 第46-48页 |
| 2.4.6 K的灵敏度和特异性分析 | 第48-49页 |
| 2.4.7 linker优化得到的生物传感器 | 第49-50页 |
| 2.4.8 K1的灵敏度和特异性分析 | 第50-51页 |
| 2.5 讨论及结论 | 第51-52页 |
| 2.5.1 讨论 | 第51页 |
| 2.5.2 结论 | 第51-52页 |
| 第3章 基于FRET优化生物传感器 | 第52-71页 |
| 3.1 引言 | 第52-55页 |
| 3.2 实验材料 | 第55-57页 |
| 3.2.1 试剂 | 第55页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第55-56页 |
| 3.2.3 溶液配制 | 第56页 |
| 3.2.4 引物设计 | 第56-57页 |
| 3.3 实验方法 | 第57-60页 |
| 3.3.1 分子对接 | 第57-58页 |
| 3.3.2 定点突变 | 第58-60页 |
| 3.3.3 荧光生物传感器的体外检测 | 第60页 |
| 3.3.4 荧光生物传感器的体内检测 | 第60页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第60-69页 |
| 3.4.1 分子对接 | 第60-62页 |
| 3.4.2 定点突变 | 第62-64页 |
| 3.4.3 分子对接结果的实验验证 | 第64-66页 |
| 3.4.4 荧光生物传感器灵敏性检测 | 第66-68页 |
| 3.4.5 NADPsor灵敏度和特异性的分析 | 第68页 |
| 3.4.6 NADPsor体内检测的应用 | 第68-69页 |
| 3.5 讨论和结论 | 第69-71页 |
| 3.5.1 讨论 | 第69-70页 |
| 3.5.2 结论 | 第70-71页 |
| 第4章 总结与展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-82页 |
| 附录 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |