| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRAST | 第6-8页 |
| 主要英文缩写对照 | 第11-12页 |
| 第一章、综述 | 第12-23页 |
| 1.1 猪瘟病毒的分子生物学特性 | 第12-17页 |
| 1.2 猪瘟病毒的致病机理 | 第17-18页 |
| 1.3 猪瘟病毒N~(pro)蛋白在感染中的作用 | 第18-20页 |
| 1.4 IRF-1 | 第20-21页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章、材料与方法 | 第23-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-30页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第23页 |
| 2.1.2 毒株、克隆及表达载体、菌种、细胞 | 第23页 |
| 2.1.3 引物合成 | 第23-25页 |
| 2.1.4 主要试剂及相关溶液配制 | 第25-29页 |
| 2.1.5 主要仪器与设备 | 第29-30页 |
| 2.2 技术路线 | 第30-31页 |
| 2.2.1 猪瘟病毒N~(pro)蛋白和猪源IRF-1蛋白多克隆抗体制备 | 第30页 |
| 2.2.2 猪瘟病毒N~(pro)蛋白与宿主猪IRF-1蛋白相关性的初步探索 | 第30-31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-41页 |
| 2.3.1 目的基因的克隆 | 第31-33页 |
| 2.3.2 原核表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.3.3 重组蛋白的诱导表达 | 第34-36页 |
| 2.3.4 重组蛋白表达形式鉴定 | 第36页 |
| 2.3.5 可溶性蛋白的纯化与透析 | 第36-37页 |
| 2.3.6 重组蛋白免疫小鼠制备抗体 | 第37页 |
| 2.3.7 蛋白多克隆抗体特异性及效价检测 | 第37-39页 |
| 2.3.8 实时荧光定量PCR实验 | 第39-41页 |
| 第三章、实验结果 | 第41-59页 |
| 3.1 N~(pro)蛋白原核表达载体的构建及多克隆抗体的制备 | 第41-50页 |
| 3.1.1 N~(pro)基因片段的克隆 | 第41-42页 |
| 3.1.2 原核表达载体pET-N~(pro)的构建 | 第42-43页 |
| 3.1.3 pET-N~(pro)转化Rosetta重组菌的表达情况 | 第43-45页 |
| 3.1.4 重组蛋白N~(pro)的纯化及鉴定 | 第45-47页 |
| 3.1.5 Western blot检测N~(pro)蛋白多克隆抗体特异性和反应性 | 第47-50页 |
| 3.2 IRF-1原核表达载体的构建及多克隆抗体的制备 | 第50-57页 |
| 3.2.1 IRF-1目的基因片段的克隆 | 第50-51页 |
| 3.2.2 原核表达载体pET-IRF-1的构建 | 第51-52页 |
| 3.2.3 pET-IRF-1转化Rosetta重组菌的表达情况 | 第52-53页 |
| 3.2.4 IRF-1重组蛋白的纯化及鉴定 | 第53-55页 |
| 3.2.5 Western blot检测IRF-1蛋白多克隆抗体特异性和反应性 | 第55-57页 |
| 3.3 猪瘟病毒N~(pro)蛋白与宿主猪IRF-1蛋白相关性的初步探索 | 第57-59页 |
| 3.3.1 实时荧光定量PCR检测猪瘟病毒对IRF-1 mRNA的影响 | 第57-58页 |
| 3.3.2 Western blot检测猪瘟病毒对IRF-1蛋白水平的影响 | 第58-59页 |
| 第四章、讨论 | 第59-65页 |
| 4.1 原核表达策略 | 第59-60页 |
| 4.2 蛋白表达条件的优化 | 第60-61页 |
| 4.3 重组蛋白的纯化 | 第61-62页 |
| 4.4 影响抗体制备的因素 | 第62-63页 |
| 4.5 验证多克隆抗体的反应性和特异性 | 第63页 |
| 4.6 猪瘟病毒与IRF-1相关性的初步探索 | 第63-65页 |
| 第五章、结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读学位期间发表的论文情况 | 第79页 |
