| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 0 前言 | 第13-34页 |
| ·细菌耐药性的研究现状 | 第13页 |
| ·铜绿假单胞菌的感染现状 | 第13-22页 |
| ·解决耐药性的策略 | 第22-23页 |
| ·RNA干扰技术 | 第23-26页 |
| ·反义核酸技术 | 第26-27页 |
| ·人工反式编码小RNA技术 | 第27-34页 |
| 1 针对单基因控制的弹性蛋白酶和外毒素A设计atsRNAs | 第34-54页 |
| ·实验材料和仪器 | 第35-37页 |
| ·方法 | 第37-48页 |
| ·构建铜绿假单胞菌atsRNA表达载体PRPA | 第37-41页 |
| ·针对弹性蛋白酶和外毒素A设计atsRNAs | 第41-45页 |
| ·转化atsRNAs至铜绿假单胞菌PAO1 | 第45-48页 |
| ·弹性蛋白酶活性测定 | 第48页 |
| ·结果 | 第48-53页 |
| ·铜绿假单胞菌中atsRNA表达载体的鉴定 | 第48-49页 |
| ·atsRNAs退火和磷酸化鉴定 | 第49页 |
| ·SRBL和SRTX系列atsRNAs干扰载体连接鉴定 | 第49-50页 |
| ·弹性蛋白酶活性测定结果 | 第50页 |
| ·RT-PCR鉴定lasB mRNA的表达 | 第50-51页 |
| ·RT-PCR鉴定外毒素A mRNA的表达 | 第51-52页 |
| ·atsRNAs对铜绿假单胞菌PA01生长的影响 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 2 针对phz操纵子控制合成的绿脓菌素设计atsRNAs | 第54-67页 |
| ·实验材料和仪器 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-60页 |
| ·针对phz操纵子中的phzF基因设计atsRNAs | 第55-56页 |
| ·转化atsRNAs至铜绿假单胞菌PAO1 | 第56-57页 |
| ·绿脓菌素的测定 | 第57页 |
| ·构建大肠杆菌靶-荧光蛋白融合载体pACYC-T7-phzF-EGF | 第57-59页 |
| ·针对phz操作子中phzA基因设计atsRNAs | 第59-60页 |
| ·转化atsRNAs至铜绿假单胞菌PAO1并检测干扰效果 | 第60页 |
| ·结果 | 第60-65页 |
| ·SRphF系列atsRNAs干扰载体连接鉴定 | 第60-61页 |
| ·SRphF系列atsRNAs对绿脓菌素表达的影响 | 第61页 |
| ·PCR鉴定pACYC-T7-phzF-EGFP载体构建 | 第61-62页 |
| ·检测SRphF系列atsRNAs在大肠杆菌中的干扰情况 | 第62-63页 |
| ·RT-PCR检测SRphF2表达量 | 第63页 |
| ·SRpzA系列atsRNAs对绿脓菌素表达的影响 | 第63-64页 |
| ·IPTG浓度对绿脓菌素合成量的影响 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 3 atsRNAs干扰群体感应调控蛋白LasR和RhlR | 第67-75页 |
| ·实验材料和仪器 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-70页 |
| ·针对群体感应调控蛋白lasR和rhlR设计atsRNAs | 第68-70页 |
| ·SRrhlR和SRlaR系列atsRNAs干扰载体连接并转化PAO1 | 第70页 |
| ·结果 | 第70-75页 |
| ·SRrhlR和SRlaR系列atsRNAs干扰载体连接鉴定 | 第71页 |
| ·SRrhlR系列atsRNAs对rhlR mRNA的影响 | 第71-72页 |
| ·SRrhlR系列atsRNAs对弹性蛋白酶LasB活性的影响 | 第72页 |
| ·SRrhlR系列atsRNAs对绿脓菌素表达的影响 | 第72-73页 |
| ·RT-PCR鉴定lasR mRNA的表达 | 第73-74页 |
| ·SRlaR系列atsRNAs对弹性蛋白酶LasB活性的影响 | 第74页 |
| ·SRlaR系列atsRNAs对绿脓菌素表达的影响 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75页 |
| 4 总结与展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 个人简历 | 第86页 |
| 在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第86页 |
