| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第10-24页 |
| 1.1 胆固醇的结构与功能 | 第10页 |
| 1.2 胆固醇代谢紊乱与动脉粥样硬化 | 第10-11页 |
| 1.3 胆固醇的合成调控 | 第11页 |
| 1.4 低密度脂蛋白与低密度脂蛋白受体 | 第11-12页 |
| 1.5 低密度脂蛋白受体介导的低密度脂蛋白的内吞作用 | 第12-13页 |
| 1.6 低密度脂蛋白受体的调控 | 第13-14页 |
| 1.7 通过PCSK9诱导的LDLR降解 | 第14-15页 |
| 1.8 通过泛素连接酶IDOL诱导的LDLR降解 | 第15-16页 |
| 1.9 泛素-蛋白酶体途径 | 第16-17页 |
| 1.10 去泛素化酶对细胞稳态的调控 | 第17-21页 |
| 1.11 SUMO化修饰以及去SUMO化修饰 | 第21-24页 |
| 2 实验材料和方法 | 第24-36页 |
| 2.1 材料和试剂 | 第24页 |
| 2.2 抗体 | 第24页 |
| 2.3 细胞系和培养基 | 第24页 |
| 2.4 菌株与质粒 | 第24-25页 |
| 2.5 分子生物学常规方法 | 第25页 |
| 2.6 真核表达质粒的转染 | 第25页 |
| 2.7 RNA干扰 | 第25-26页 |
| 2.8 组织/细胞裂解液的提取 | 第26页 |
| 2.8.1 组织裂解液的提取 | 第26页 |
| 2.8.2 全细胞裂解液的提取 | 第26页 |
| 2.9 Western blot分析蛋白表达 | 第26-27页 |
| 2.10 RNA抽提及定量 | 第27-28页 |
| 2.11 逆转录PCR | 第28页 |
| 2.12 Real-time PCR | 第28页 |
| 2.13 腺相关病毒的包装与纯化 | 第28-29页 |
| 2.14 腺相关病毒介导的基因过表达 | 第29页 |
| 2.15 肝脏中脂质的测定 | 第29-30页 |
| 2.16 免疫荧光 | 第30页 |
| 2.17 重组蛋白的原核表达 | 第30-31页 |
| 2.18 兔源多克隆抗体的制备 | 第31页 |
| 2.19 抗体的亲和纯化 | 第31-32页 |
| 2.20 DiI-LDL内吞 | 第32-33页 |
| 2.21 培养基中分泌蛋白收集 | 第33页 |
| 2.22 体内泛素化分析 | 第33-34页 |
| 2.23 体内SUMO化分析 | 第34-36页 |
| 3 实验结果 | 第36-48页 |
| 3.1 ZRANB1调控LDLR稳定性的功能及作用机制研究 | 第36-40页 |
| 3.1.1 ZRANB1可以增加LDLR的蛋白水平 | 第36页 |
| 3.1.2 ZRAN-JB1的酶活位点突变后,仍能增加LDLR的蛋白量 | 第36-38页 |
| 3.1.3 内源LDLR蛋白水平在ZRANB1稳定表达细胞中明显增加 | 第38页 |
| 3.1.4 ZRANB1可以影响LDLR的泛素化水平,但不依赖于泛素连接酶IDOL | 第38-39页 |
| 3.1.5 ZRANB1可能通过泛素链接酶Z-E3来影响LDLR的泛素化水平 | 第39-40页 |
| 3.2 SENP1调控LDLR稳定性的功能及机制研究 | 第40-48页 |
| 3.2.1 SENP1蛋白可以稳定LDLR的蛋白水平 | 第40-41页 |
| 3.2.2 稳定表达SENP1的细胞株LDLR蛋白水平增加 | 第41-42页 |
| 3.2.3 敲除SENP1的细胞株LDLR蛋白水平减少 | 第42-43页 |
| 3.2.4 在小鼠内通过腺相关病毒过表达SENP1可以稳定LDLR的蛋白水平 | 第43-44页 |
| 3.2.5 体外转录与翻译制备的SENP1蛋白不具有去泛素化酶活性 | 第44-45页 |
| 3.2.6 SENP1不能拮抗由IDOL引起的LDLR的降解 | 第45-46页 |
| 3.2.7 SENP1不能拮抗由PCSK9引起的LDLR的降解 | 第46-48页 |
| 4. 分析与讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 附录 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
