| 本研究工作的主要创新点 | 第5-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第13-35页 |
| 1.1 嗜麦芽寡养单胞菌的基本生物学特征 | 第13-17页 |
| 1.1.1 嗜麦芽寡养单胞菌的分类地位 | 第13页 |
| 1.1.2 嗜麦芽寡养单胞菌的分布及形态特征 | 第13-14页 |
| 1.1.3 嗜麦芽寡养单胞菌的生化特征 | 第14页 |
| 1.1.4 嗜麦芽寡养单胞菌的机会致病性 | 第14-15页 |
| 1.1.5 嗜麦芽寡养单胞菌的极端耐药性 | 第15-16页 |
| 1.1.6 嗜麦芽寡养单胞菌的遗传学研究现状 | 第16-17页 |
| 1.2 噬菌体 | 第17-25页 |
| 1.2.1 噬菌体的多样性及应用价值 | 第17-20页 |
| 1.2.2 丝状噬菌体的生物学特性 | 第20-22页 |
| 1.2.3 丝状噬菌体DNA的复制方式 | 第22-23页 |
| 1.2.4 丝状噬菌体的基因组 | 第23-25页 |
| 1.3 细菌素 | 第25-34页 |
| 1.3.1 细菌素的基本特性及分类 | 第26-28页 |
| 1.3.2 类似于噬菌体尾部结构的细菌素 | 第28-30页 |
| 1.3.3 细菌素基因表达的调控方式 | 第30-32页 |
| 1.3.4 细菌素的应用价值 | 第32-34页 |
| 1.4 本论文的研究目的和意义 | 第34-35页 |
| 第二章 材料与方法 | 第35-58页 |
| 2.1 实验材料和仪器 | 第35-46页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第35-37页 |
| 2.1.2 引物 | 第37-40页 |
| 2.1.3 药品和试剂 | 第40-41页 |
| 2.1.4 培养基和溶液配制 | 第41-45页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第45-46页 |
| 2.2 实验方法 | 第46-57页 |
| 2.2.1 嗜麦芽菌素的纯化 | 第46页 |
| 2.2.2 透射电镜技术 | 第46页 |
| 2.2.3 嗜麦芽寡养单胞菌质粒的提取 | 第46-47页 |
| 2.2.4 SDS-PAGE电泳 | 第47-48页 |
| 2.2.5 Tricine-SDS-PAGE | 第48页 |
| 2.2.6 N-端测序 | 第48页 |
| 2.2.7 噬菌体核酸提取 | 第48-49页 |
| 2.2.8 双链DNA的合成 | 第49页 |
| 2.2.9 进化树图的绘制 | 第49页 |
| 2.2.10 嗜麦芽菌素杀菌活力检测 | 第49-50页 |
| 2.2.11 嗜麦芽菌素杀菌动力学实验 | 第50页 |
| 2.2.12 嗜麦芽菌素对温度、蛋白酶敏感性实验 | 第50页 |
| 2.2.13 嗜麦芽寡养单胞菌总DNA的提取 | 第50-51页 |
| 2.2.14 嗜麦芽菌素P28基因簇的注释 | 第51页 |
| 2.2.15 嗜麦芽菌素P28尾鞘蛋白抗血清制备 | 第51-52页 |
| 2.2.16 蛋白质浓度的标准曲线制作及细菌总蛋白质浓度测定 | 第52页 |
| 2.2.17 Western blot | 第52-53页 |
| 2.2.18 酶联免疫吸附实验(ELISA) | 第53页 |
| 2.2.19 嗜麦芽寡养单胞菌总RNA提取,逆转录PCR | 第53-54页 |
| 2.2.20 同源重组法敲除目的基因 | 第54-56页 |
| 2.2.21 缺失基因的回补 | 第56-57页 |
| 2.3 核酸序列号码 | 第57-58页 |
| 第三章 丝状噬菌体ΦSHP2 | 第58-67页 |
| 3.1 丝状噬菌体ΦSHP2的纯化和形态 | 第58-60页 |
| 3.2 质粒pSH2的序列分析 | 第60-63页 |
| 3.3 质粒pSH2是丝状噬菌体ΦSHP2的双链复制型(RF) | 第63页 |
| 3.4 丝状噬菌体ΦSHP2的衣壳蛋白 | 第63-64页 |
| 3.5 丝状噬菌体ΦSHP2与其它丝状噬菌体的进化关系 | 第64-65页 |
| 3.6 嗜麦芽寡养单胞菌丝状噬菌体的调控基序 | 第65-66页 |
| 3.7 小结 | 第66-67页 |
| 第四章 嗜麦芽菌素P28的生物学特征 | 第67-81页 |
| 4.1 嗜麦芽菌素P28的杀菌谱和活力 | 第67-68页 |
| 4.2 嗜麦芽菌素P28的杀菌动力学 | 第68页 |
| 4.3 嗜麦芽菌素P28对温度和蛋白酶的敏感性 | 第68-69页 |
| 4.4 嗜麦芽菌素P28的主要结构蛋白 | 第69-72页 |
| 4.5 嗜麦芽菌素P28的基因簇 | 第72-79页 |
| 4.5.1 基因簇的克隆 | 第72-73页 |
| 4.5.2 基因簇序列分析 | 第73-76页 |
| 4.5.3 基因簇正确性验证 | 第76-79页 |
| 4.6 嗜麦芽菌素在嗜麦芽寡养单胞菌中的分布性 | 第79-80页 |
| 4.7 小结 | 第80-81页 |
| 第五章 嗜麦芽菌素P28调控基因的初步鉴定 | 第81-101页 |
| 5.1 通过基因敲除法寻找嗜麦芽菌素P28的调控基因 | 第81-93页 |
| 5.1.1 嗜麦芽寡养单胞菌P28中lexA和recA基因序列的克隆 | 第82-83页 |
| 5.1.2 嗜麦芽寡养单胞菌P28lexA、recA和orf6基因的敲除 | 第83-85页 |
| 5.1.3 嗜麦芽菌素P28基因簇中orf1、orf2、orf3、orf4和orf7的敲除 | 第85-90页 |
| 5.1.4 嗜麦芽菌素P28基因簇中orf5的敲除 | 第90-93页 |
| 5.2 Western blot验证敲除基因的功能 | 第93-96页 |
| 5.2.1 嗜麦芽菌素P28尾鞘蛋白(ORF17)表达载体构建 | 第93-94页 |
| 5.2.2 嗜麦芽菌素P28尾鞘蛋白异源表达 | 第94-95页 |
| 5.2.3 嗜麦芽菌素P28尾鞘蛋白抗血清制备及效价检测 | 第95页 |
| 5.2.4 Western blot检测嗜麦芽寡养单胞菌P28Δorf3、P28Δorf6和P28Δorf4-6中尾鞘蛋白的表达 | 第95-96页 |
| 5.3 RT-PCR检测嗜麦芽菌素P28基因 | 第96-99页 |
| 5.3.1 嗜麦芽寡养单胞菌P28总RNA提取及DNA的去除 | 第97页 |
| 5.3.2 对嗜麦芽菌素P28调控基因及结构基因进行RT-PCR | 第97-99页 |
| 5.4 小结 | 第99-101页 |
| 研究总结和展望 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-117页 |
| 在读期间发表的论文 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
