| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 重金属镉的基本特点 | 第11页 |
| 1.2 镉对机体的毒性损伤 | 第11-15页 |
| 1.2.1 镉对免疫器官的毒性作用 | 第11-12页 |
| 1.2.2 镉对肾脏的毒性作用 | 第12-13页 |
| 1.2.3 镉对肝脏的毒性作用 | 第13页 |
| 1.2.4 镉对其他器官的毒性作用 | 第13-15页 |
| 1.3 镉的毒性作用机制 | 第15-16页 |
| 1.3.1 镉与氧化应激 | 第15页 |
| 1.3.2 镉与钙离子 | 第15-16页 |
| 1.3.3 镉与金属硫蛋白 | 第16页 |
| 1.4 自噬 | 第16-17页 |
| 1.5 VMP1蛋白 | 第17-18页 |
| 1.6 自噬和凋亡的关系 | 第18页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 镉诱导脾组织和细胞中的自噬 | 第20-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 实验动物和细胞 | 第20页 |
| 2.1.2 相关试剂 | 第20-22页 |
| 2.1.3 实验器材 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-27页 |
| 2.2.1 镉暴露小鼠模型的建立 | 第22页 |
| 2.2.2 细胞培养、冻存和复苏 | 第22-23页 |
| 2.2.3 不同浓度的镉梯度处理细胞 | 第23页 |
| 2.2.4 MDC法检测自噬 | 第23-24页 |
| 2.2.5 Western Blot检测 | 第24-27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-30页 |
| 2.3.1 镉诱导小鼠脾脏组织自噬的发生 | 第27-29页 |
| 2.3.2 镉诱导Ramos细胞自噬的发生 | 第29页 |
| 2.3.3 MDC法检测镉诱导Ramos细胞自噬的产生 | 第29-30页 |
| 2.4 小结 | 第30-31页 |
| 第三章 VMP1在镉诱导自噬中的作用及其稳定性检测 | 第31-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第31页 |
| 3.1.2 实验相关试剂 | 第31-32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-36页 |
| 3.2.1 VMP1 siRNA转染Ramos细胞 | 第32-33页 |
| 3.2.2 RT-PCR检测 | 第33-36页 |
| 3.2.3 Western Blot检测 | 第36页 |
| 3.2.4 VMP1稳定性检测 | 第36页 |
| 3.3 实验结果 | 第36-40页 |
| 3.3.1 转染效率检测 | 第36-37页 |
| 3.3.2 RT-PCR筛选siRNA | 第37-38页 |
| 3.3.3 siRNA转染后VMP1蛋白检测 | 第38-39页 |
| 3.3.4 镉诱导Ramos细胞自噬依赖于VMP1 | 第39页 |
| 3.3.5 镉增加VMP1的稳定性 | 第39-40页 |
| 3.4 小结 | 第40-41页 |
| 第四章 ROS和钙离子在镉诱导自噬中的作用 | 第41-52页 |
| 4.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第41页 |
| 4.1.2 实验相关试剂 | 第41-42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-44页 |
| 4.2.1 XTT法测细胞存活率 | 第42页 |
| 4.2.2 DCF法测ROS | 第42-43页 |
| 4.2.3 Fluo3-AM法测钙离子 | 第43-44页 |
| 4.3 实验结果 | 第44-51页 |
| 4.3.1 Cd处理降低细胞的存活率 | 第44-45页 |
| 4.3.2 Cd能诱导Ramos细胞自由基的增加 | 第45页 |
| 4.3.3 TCP能抑制细胞内的自由基和钙离子 | 第45-47页 |
| 4.3.4 TCP具有保护作用 | 第47-48页 |
| 4.3.5 2-APB对细胞内的钙离子和自由基的影响 | 第48-49页 |
| 4.3.6 2-APB具有保护作用 | 第49-51页 |
| 4.4 小结 | 第51-52页 |
| 第五章 镉诱导的自噬促进细胞凋亡 | 第52-58页 |
| 5.1 实验材料 | 第52页 |
| 5.1.1 实验仪器 | 第52页 |
| 5.1.2 实验相关试剂 | 第52页 |
| 5.2 实验方法 | 第52-54页 |
| 5.2.1 Aninxin V流式凋亡检测 | 第52-53页 |
| 5.2.2 LDH法检测乳酸脱氢酶活性 | 第53-54页 |
| 5.3 实验结果 | 第54-57页 |
| 5.3.1 镉诱导细胞凋亡 | 第54页 |
| 5.3.2 镉诱导的自噬促进了凋亡 | 第54-57页 |
| 5.4 小结 | 第57-58页 |
| 第六章 讨论与展望 | 第58-62页 |
| 6.1 讨论 | 第58-60页 |
| 6.2 展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参加课题 | 第68页 |
