摘要 | 第5-7页 |
ABSTRACT | 第7-8页 |
英文缩写索引 | 第12-13页 |
第一章 绪论 | 第13-26页 |
1.1 呼吸道上皮细胞 | 第14-17页 |
1.1.1 呼吸道上皮细胞的功能与特征 | 第14页 |
1.1.2 哮喘对呼吸道上皮细胞的影响 | 第14-17页 |
1.2 小GTP酶Rac1 | 第17-19页 |
1.2.1 Rac1的特性 | 第17-18页 |
1.2.2 Rac1和支气管哮喘 | 第18-19页 |
1.2.3 Rac1在凋亡中的作用 | 第19页 |
1.3 吞噬作用 | 第19-21页 |
1.3.1 吞噬作用的分类 | 第19-20页 |
1.3.2 Rac1与非专职吞噬作用 | 第20-21页 |
1.4 本实验研究目的、方法、实验设计方案及意义 | 第21-26页 |
1.4.1 实验研究目的 | 第21-22页 |
1.4.2 方法 | 第22页 |
1.4.3 实验设计 | 第22-24页 |
1.4.3.1 实验研究思路 | 第22页 |
1.4.3.2 技术路线 | 第22-24页 |
1.4.4 实验研究意义 | 第24-26页 |
第二章 姜黄素诱导A549细胞的凋亡及Rac1抑制剂对其凋亡的影响 | 第26-36页 |
2.1 材料和仪器 | 第26-27页 |
2.1.1 细胞 | 第26页 |
2.1.2 实验仪器 | 第26-27页 |
2.1.3 实验材料与试剂 | 第27页 |
2.2 实验方法 | 第27-30页 |
2.2.1 A549细胞的培养 | 第27-28页 |
2.2.2 DMEM 培养基配置方法 | 第28页 |
2.2.3 细胞的复苏,消化和冻存 | 第28-29页 |
2.2.4 姜黄素诱导凋亡实验 | 第29页 |
2.2.5 Hoechst核染色与流式细胞术检测凋亡 | 第29-30页 |
2.2.6 流式法检测Rac1抑制剂对姜黄素诱导凋亡影响 | 第30页 |
2.2.7 统计学相关分析 | 第30页 |
2.3 结果 | 第30-34页 |
2.3.1 姜黄素可以诱导A549细胞发生凋亡 | 第30-31页 |
2.3.2 选定适宜诱导时间和姜黄素浓度诱导凋亡 | 第31-32页 |
2.3.3 Rac1抑制剂NSC23766可促进姜黄素诱导的A549细胞凋亡 | 第32-34页 |
2.4 讨论 | 第34-36页 |
第三章 气道上皮细胞A549对同系凋亡细胞的吞噬作用 | 第36-45页 |
3.1 实验仪器和材料 | 第36-38页 |
3.1.1 实验仪器 | 第36-37页 |
3.1.2 试验相关材料和试剂 | 第37页 |
3.1.3 实验溶液配制 | 第37-38页 |
3.2 实验方法 | 第38-41页 |
3.2.1 A549 细胞的培养,冻存与复苏与 2.2.3 中所述操作标准一致 | 第38页 |
3.2.2 CFSE染色方法 | 第38页 |
3.2.3 碘化丙碇(PI)染色步骤 | 第38-39页 |
3.2.4 A549细胞共培养体系的建立 | 第39页 |
3.2.5 IL-33 与Rac1总RNA的提取 | 第39页 |
3.2.6 将提取的IL-33,Rac1的RNA逆转录成cDNA | 第39-40页 |
3.2.7 引物的设计与合成 | 第40页 |
3.2.8 荧光定量PCR方法(qRT-PCR)检测IL-33,Rac1m RNA水平 | 第40-41页 |
3.2.9 统计学分析 | 第41页 |
3.3 实验结果 | 第41-43页 |
3.3.1 A549细胞对于凋亡细胞的吞噬能力 | 第41-43页 |
3.3.2 A549 细胞吞噬凋亡细胞时 IL-33,Rac1 的表达水平 | 第43页 |
3.4 讨论 | 第43-45页 |
第四章 小GTP酶Rac1参与调控A549细胞的吞噬作用 | 第45-54页 |
4.1 实验所材料与试剂 | 第45-47页 |
4.1.1 实验仪器 | 第45-46页 |
4.1.2 实验材料与试剂 | 第46页 |
4.1.3 实验所需溶液的配制 | 第46-47页 |
4.2 实验方法 | 第47-48页 |
4.2.1 A549 细胞的培养,冻存与复苏与 2.2.3 中所述操作标准一致 | 第47页 |
4.2.2 CFSE染色方法 | 第47页 |
4.2.3 A549细胞共培养体系的建立 | 第47页 |
4.2.4 IL-33/与Rac1总RNA的提取、逆转录及实时荧光定量PCR检 测IL-33、Rac1表达水平 | 第47-48页 |
4.2.5 Rac1 siRNA的转录程序 | 第48页 |
4.2.6 统计学分析 | 第48页 |
4.3 实验结果 | 第48-53页 |
4.3.1 Rac1 siRNA使A549细胞表达下调 | 第48-49页 |
4.3.2 转入Rac1 siRNA后A549的吞噬能力降低 | 第49-50页 |
4.3.3 加入Rac1抑制剂后A549的吞噬能力降低 | 第50-51页 |
4.3.4 加入Rac1抑制剂后A549细胞吞噬凋亡细胞时IL-33,Rac1的基因表达水平变化 | 第51-53页 |
4.4 讨论 | 第53-54页 |
第五章 主要结论与展望 | 第54-56页 |
5.1 主要结论 | 第54页 |
5.2 展望 | 第54-56页 |
参考文献 | 第56-61页 |
致谢 | 第61-63页 |
攻读硕士学位期间发表和待发表的论文 | 第63页 |