摘要 | 第5-8页 |
ABSTRACT | 第8-10页 |
英文缩略词 | 第14-17页 |
引言 | 第17-25页 |
1.1 假基因(PSEUDOGENE) | 第17-19页 |
1.2 OCT4(OCTAMER-BINDING TRANSCRIPTION FACTOR 4)与其假基因POU5F1B(POU DOMAIN CLASS 5 TRANSCRIPTION FACTOR 1B GENE) | 第19-20页 |
1.3 BMI1(MOLONEY MURINE LEUKEMIA VIRUS INTEGRATION SITE 1)与其假基因BMI1P1(MOLONEY MURINE LEUKEMIA VIRUS INTEGRATION SITE | 第20-21页 |
1.4 急性髓细胞白血病(ACUTE MYELOID LEUKEMIA,AML) | 第21-23页 |
1.5 肝细胞癌(HEPATOCELLULAR CARCINOMA,HCC) | 第23-25页 |
第一部分 假基因BMI1P1在急性髓系白血病中表达的临床研究 | 第25-42页 |
第一章 研究的背景及目的、方法及方案设计、研究意义 | 第25-27页 |
1.1 研究背景及目的 | 第25-26页 |
1.2 研究方法及方案设计 | 第26页 |
1.2.1 实时定量PCR(RQ-PCR) | 第26页 |
1.3 实验方案 | 第26页 |
1.4 研究的意义 | 第26-27页 |
第二章 AML中假基因BMI1P1的临床研究 | 第27-42页 |
2.1 实验材料 | 第27-28页 |
2.1.1 研究对象 | 第27页 |
2.1.2 主要试剂 | 第27页 |
2.1.3 主要仪器 | 第27-28页 |
2.1.4 RQ-PCR引物 | 第28页 |
2.2 实验方法 | 第28-32页 |
2.2.1 BMMNCs分离和总RNA的提取 | 第28-29页 |
2.2.2 逆转录 | 第29页 |
2.2.3 通过RQ-PCR分析样本中BMI1P1表达含量 | 第29-30页 |
2.2.4 PCR产物纯化与回收 | 第30页 |
2.2.5 重组载体构建 | 第30页 |
2.2.6 重组质粒转化 | 第30-31页 |
2.2.7 重组质粒提取及鉴定、测序 | 第31页 |
2.2.8 阳性模板建立 | 第31-32页 |
2.2.9 细胞遗传学检查 | 第32页 |
2.2.10 统计学分析 | 第32页 |
2.3 实验结果 | 第32-38页 |
2.3.1 健康对照组中BMI1P1表达水平 | 第32页 |
2.3.2 各型AML患者中BMI1P1表达水平 | 第32-34页 |
2.3.3 BMI1P1基因表达具有辅助诊断标记意义 | 第34-35页 |
2.3.4 AML的临床和实验室特征 | 第35-36页 |
2.3.5 BMI1P1表达与AML预后的关系 | 第36-38页 |
2.4 讨论 | 第38-42页 |
第二部分 假基因POU5F1B在HCC中的机制研究 | 第42-70页 |
第一章 研究背景及目的、实验方法及方案设计、意义 | 第42-48页 |
1.1 研究背景及目的 | 第42-43页 |
1.2 实验方法与方案设计 | 第43-44页 |
1.2.1 细胞培养技术 | 第43-44页 |
1.2.2 蛋白免疫印迹(Western Blot) | 第44页 |
1.3 实验设计 | 第44-47页 |
1.3.1 POU5F1B质粒载体构建及细胞转染 | 第45页 |
1.3.2 细胞实验 | 第45-46页 |
1.3.3 机制研究 | 第46-47页 |
1.4 研究的意义 | 第47-48页 |
第二章 POU5F1B促进HCC形成的机制研究 | 第48-70页 |
2.1 实验材料 | 第48-50页 |
2.1.1 细胞株 | 第48页 |
2.1.2 引物 | 第48页 |
2.1.4 主要试剂 | 第48-49页 |
2.1.5 主要仪器 | 第49-50页 |
2.2 实验方法 | 第50-55页 |
2.2.1 细胞培养 | 第50页 |
2.2.2 细胞的换液与传代 | 第50页 |
2.2.3 细胞冻存 | 第50-51页 |
2.2.4 细胞复苏 | 第51页 |
2.2.5 RQ-PCR测定细胞株中POU5F1B的表达 | 第51页 |
2.2.6 蛋白提取 | 第51页 |
2.2.7 Western blot测定细胞株中OCT4的表达 | 第51-53页 |
2.2.8 生长实验 | 第53页 |
2.2.9 生存实验 | 第53-54页 |
2.2.10 凋亡实验 | 第54页 |
2.2.11 划痕实验 | 第54页 |
2.2.12 平板克隆形成实验 | 第54-55页 |
2.2.13 肿瘤球形成实验 | 第55页 |
2.2.14 耐药实验 | 第55页 |
2.3 实验结果 | 第55-67页 |
2.3.1 POU5F1B-Hep3B细胞和Mock-Hep3B细胞的成功构建 | 第55-57页 |
2.3.2 si-POU5F1B-Hep3B和si-mock-Hep3B细胞的构建 | 第57页 |
2.3.3 POU5F1B促进细胞增殖和迁移 | 第57-60页 |
2.3.4 POU5F1B抑制细胞凋亡 | 第60-61页 |
2.3.5 肿瘤球形成实验 | 第61页 |
2.3.6 POU5F1B基因对化疗具有耐受性 | 第61-64页 |
2.3.7 机制研究 | 第64-67页 |
2.4 讨论 | 第67-70页 |
结论 | 第70-71页 |
1.1 主要结论 | 第70页 |
1.2 展望 | 第70-71页 |
参考文献 | 第71-77页 |
致谢 | 第77-78页 |
攻读硕士学位期间发表的学术论文及其他科研成果 | 第78-79页 |