| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 禾谷镰刀菌和小麦赤霉病 | 第11页 |
| 1.2 真菌转化的方法 | 第11-14页 |
| 1.2.1 根癌农杆菌介导转化真菌效率的影响因素 | 第12-13页 |
| 1.2.2 农杆菌介导转化真菌的方法在真菌研究中的应用 | 第13-14页 |
| 1.3 海藻糖合成酶基因的研究进展 | 第14-19页 |
| 1.3.1 海藻糖的合成及海藻糖的功能 | 第14-16页 |
| 1.3.1.1 海藻糖的合成方式 | 第14-15页 |
| 1.3.1.2 海藻糖的功能 | 第15-16页 |
| 1.3.2 △tps在真菌中的表型 | 第16-18页 |
| 1.3.2.1 △tps1在真菌中的表型 | 第16-17页 |
| 1.3.2.2 △tps2在真菌中的表型 | 第17-18页 |
| 1.3.3 海藻糖合成酶基因在转基因中的应用 | 第18-19页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 酶和试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 培养基及试剂 | 第20-24页 |
| 2.1.3.1 培养基 | 第20-21页 |
| 2.1.3.2 根癌农杆菌介导转化相关试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3.3 质粒DNA提取相关试剂 | 第22页 |
| 2.1.3.4 测酶活的相关试剂 | 第22-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-39页 |
| 2.2.1 载体的构建 | 第24-26页 |
| 2.2.1.1 载体构建的方法 | 第24页 |
| 2.2.1.2 质粒的抽提 | 第24-25页 |
| 2.2.1.3 DNA片段回收 | 第25页 |
| 2.2.1.4 感受态细胞制备及转化 | 第25-26页 |
| 2.2.2 菌体PCR方法鉴定 | 第26页 |
| 2.2.3 农杆菌介导转化禾谷镰刀菌 | 第26-27页 |
| 2.2.4 PCR检测 | 第27-28页 |
| 2.2.4.1 菌丝基因组DNA的抽提(大样法) | 第27-28页 |
| 2.2.4.2 PCR分别验证目的基因是否发生同源重组整合 | 第28页 |
| 2.2.5 Southern blot | 第28-30页 |
| 2.2.6 表型分析 | 第30-31页 |
| 2.2.7 接种不同碳源和氮源的培养基的分析 | 第31页 |
| 2.2.8 产孢率分析 | 第31页 |
| 2.2.9 半定量PCR | 第31-32页 |
| 2.2.9.1 菌丝的培养 | 第31-32页 |
| 2.2.9.2 RNA的提取以及cDNA的获得 | 第32页 |
| 2.2.9.3 半定量PCR的方法 | 第32页 |
| 2.2.10 离体法测硝酸还原酶的酶活 | 第32-34页 |
| 2.2.10.1 实验原理 | 第32-33页 |
| 2.2.10.2 标准曲线制作 | 第33页 |
| 2.2.10.3 酶的提取: | 第33页 |
| 2.2.10.4 酶活的测定 | 第33-34页 |
| 2.2.11 胚芽鞘苗期接种 | 第34-35页 |
| 2.2.11.1 种子处理和发芽 | 第34页 |
| 2.2.11.2 胚芽鞘接种 | 第34页 |
| 2.2.11.3 病症及鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.12 田间花期接种 | 第35页 |
| 2.2.12.1 单花接种 | 第35页 |
| 2.2.12.2 喷雾接种 | 第35页 |
| 2.2.12.3 田间致病力的统计方法 | 第35页 |
| 2.2.13 F.graminearum总RNA提取及cDNA的获得 | 第35-38页 |
| 2.2.13.1 RNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.13.2 总RNA中基因组DNA的去除 | 第36页 |
| 2.2.13.3 cDNA第一链的合成 | 第36-38页 |
| 2.2.14 引物 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-56页 |
| 3.1 pLH-HygB-TPS2载体的构建 | 第39-41页 |
| 3.2 转化子的相关鉴定 | 第41-46页 |
| 3.2.1 菌体PCR和两翼PCR | 第41-43页 |
| 3.2.2 Southern blot | 第43-45页 |
| 3.2.3 RT-PCR | 第45-46页 |
| 3.3 转化子与野生型相关的性质分析 | 第46-56页 |
| 3.3.1 NMR结果分析 | 第46-47页 |
| 3.3.2 表型鉴定以及抗胁迫性的相关分析 | 第47页 |
| 3.3.3 碳源和氮源的相关分析 | 第47-50页 |
| 3.3.3.1 对不同氮源和碳源的利用 | 第47-49页 |
| 3.3.3.2 硝酸还原酶酶活的分析 | 第49-50页 |
| 3.3.4 苗期接种 | 第50-51页 |
| 3.3.5 花期接种 | 第51-53页 |
| 3.3.6 产孢率分析 | 第53-54页 |
| 3.3.7 半定量PCR | 第54-55页 |
| 3.3.8 pMD18连接ORF测序 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-60页 |
| 4.1 海藻糖合成酶与碳利用相关代谢 | 第56页 |
| 4.2 海藻糖与氮代谢的关系 | 第56-57页 |
| 4.3 致病力与海藻糖合成酶的关系 | 第57页 |
| 4.4 F.graminearum中的海藻糖基因缺失体的相关性质 | 第57-60页 |
| 参考文献 | 第60-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 附录: | 第71-74页 |
