| 缩写词 | 第10-12页 |
| 摘要 | 第12-17页 |
| Abstract | 第17-22页 |
| 第一章 引言 | 第23-34页 |
| 1 植物Ran基因研究进展 | 第24-27页 |
| 1.1 Ran与植物生长发育 | 第25页 |
| 1.2 Ran与植物信号转导途径 | 第25-26页 |
| 1.3 Ran与植物抗逆性 | 第26页 |
| 1.4 Ran与植物miRNAs | 第26-27页 |
| 1.5 Ran与植物甲基化 | 第27页 |
| 2 植物启动子克隆的研究进展 | 第27-28页 |
| 3 转录组测序在转基因植物上的应用 | 第28-29页 |
| 4 龙眼分子生物学研究进展 | 第29-31页 |
| 5 本研究的意义和主要研究内容 | 第31-34页 |
| 5.1 本研究的意义 | 第31-32页 |
| 5.2 本研究的主要内容 | 第32-34页 |
| 5.2.1 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因启动子的克隆与生物信息学分析 | 第32页 |
| 5.2.2 DlRan3A和DlRan3B基因启动子功能验证 | 第32页 |
| 5.2.3 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因的表达模式分析 | 第32-33页 |
| 5.2.4 35S或特异启动子驱动下异位表达龙眼DlRan3A和DlRan3B基因的功能分析 | 第33页 |
| 5.2.5 35S或特异启动子驱动下异位表达龙眼DlRan3A和DlRan3B基因的转录组学分析 | 第33页 |
| 5.2.6 DlRan3A和DlRan3B基因原位转化龙眼的功能分析 | 第33-34页 |
| 第二章 龙眼胚性培养物DlRan3A和DlRan3B基因启动子的克隆及生物信息学分析 | 第34-57页 |
| 1 材料与方法 | 第35-37页 |
| 1.1 材料 | 第35页 |
| 1.2 主要试剂 | 第35页 |
| 1.3 方法 | 第35-37页 |
| 1.3.1 龙眼胚性愈伤组织DNA的提取 | 第35页 |
| 1.3.2 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因启动子克隆与测序 | 第35-37页 |
| 1.3.3 生物信息学分析 | 第37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-54页 |
| 2.1 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因5'调控序列的获得 | 第37页 |
| 2.2 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因5'调控序列的进一步获得 | 第37-38页 |
| 2.3 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因启动子转录起始位点的预测 | 第38-41页 |
| 2.4 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因启动子的功能元件分析 | 第41-54页 |
| 2.4.1 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因启动子中含有多个光反应元件 | 第45-47页 |
| 2.4.2 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因启动子中含有多个激素应答元件 | 第47-49页 |
| 2.4.3 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因启动子中含有多个逆境响应元件 | 第49-50页 |
| 2.4.4 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因启动子中含有胚乳表达响应元件 | 第50-51页 |
| 2.4.5 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因启动子中序列中含有的其他功能元件以及功能未知的元件 | 第51-53页 |
| 2.4.6 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因启动子CpG岛的预测 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-57页 |
| 3.1 龙眼Ran家族启动子克隆方法的选择 | 第54页 |
| 3.2 龙眼DlRan3A基因启动子序列"CpG岛"的潜在功能 | 第54-55页 |
| 3.3 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因启动子的潜在功能 | 第55-57页 |
| 第三章 龙眼胚性培养物DlRan3A和DlRan3B基因启动子的功能分析 | 第57-68页 |
| 1 材料与方法 | 第57-63页 |
| 1.1 材料 | 第57页 |
| 1.2 菌种和载体 | 第57-58页 |
| 1.3 主要试剂 | 第58页 |
| 1.4 方法 | 第58-63页 |
| 1.4.1 启动子缺失片段载体构建 | 第58-62页 |
| 1.4.2 农杆菌感受态的制备和转化 | 第62-63页 |
| 1.4.3 农杆菌介导转化烟草的GUS瞬时表达分析 | 第63页 |
| 2 结果与分析 | 第63-66页 |
| 2.1 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因启动子的缺失分析 | 第63-65页 |
| 2.2 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因启动子的激素应答 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-68页 |
| 第四章 龙眼胚性培养物DlRan3A和DlRan3B基因的表达模式分析 | 第68-82页 |
| 1 材料与方法 | 第69-71页 |
| 1.1 材料和处理 | 第69-70页 |
| 1.1.1 龙眼材料 | 第69页 |
| 1.1.2 龙眼胚性愈伤组织的激素和非生物胁迫因素处理 | 第69-70页 |
| 1.2 方法 | 第70-71页 |
| 1.2.1 总RNA提取及cDNA合成 | 第70页 |
| 1.2.2 实时荧光定量PCR分析 | 第70-71页 |
| 2 结果分析 | 第71-78页 |
| 2.1 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因的组织特异性表达谱 | 第71-72页 |
| 2.2 龙眼体胚发生过程中DlRan3A和DlRan3B基因的表达模式 | 第72-73页 |
| 2.3 龙眼合子胚发育过程中DlRan3A和DlRan3B基因的表达模式 | 第73-74页 |
| 2.4 龙眼种子萌发过程中DlRan3A和DlRan3B基因的表达模式 | 第74-75页 |
| 2.5 龙眼果肉发育过程中DlRan3A和DlRan3B基因的表达谱 | 第75-76页 |
| 2.6 龙眼胚性愈伤组织中DlRan3A和DlRan3B基因的激素应答 | 第76-77页 |
| 2.7 龙眼胚性愈伤组织中DlRan3A和DlRan3B基因的非生物胁迫响应 | 第77-78页 |
| 3 讨论 | 第78-82页 |
| 3.1 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因参与龙眼早期胚胎和果肉发育 | 第78-79页 |
| 3.2 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因参与生长素、赤霉素和脱落酸激素应答 | 第79-80页 |
| 3.3 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因参与非生物胁迫响应 | 第80-82页 |
| 第五章 35S或特异启动子驱动下异位表达龙眼DlRan3A和DlRan3B基因的功能分析 | 第82-109页 |
| 1 材料与方法 | 第82-89页 |
| 1.1 材料 | 第82页 |
| 1.2 菌种和载体 | 第82-83页 |
| 1.3 主要试剂 | 第83页 |
| 1.4 方法 | 第83-89页 |
| 1.4.1 本氏烟转化表达载体构建 | 第83-85页 |
| 1.4.2 亚细胞定位 | 第85-86页 |
| 1.4.3 农杆菌介导的本氏烟遗传转化 | 第86-87页 |
| 1.4.4 转基因T0代本氏烟的阳性检测 | 第87-88页 |
| 1.4.5 T1代本氏烟目的基因的表达量检测 | 第88-89页 |
| 1.4.6 转基因植株的功能分析 | 第89页 |
| 2 结果与分析 | 第89-106页 |
| 2.1 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因植物表达载体构建 | 第89-91页 |
| 2.2 D1Ran3A和D1Ran3B的亚细胞定位 | 第91-92页 |
| 2.3 过表达植株T0至T2代的获得及分子检测 | 第92-95页 |
| 2.4 过表达植株的表型观察 | 第95-103页 |
| 2.4.1 整体表型 | 第95-98页 |
| 2.4.2 根系和叶背表皮毛表型 | 第98-101页 |
| 2.4.3 花、果实和种子表型 | 第101-102页 |
| 2.4.4 龙眼特异启动子驱动GUS表达植株的GUS组织化学染色 | 第102-103页 |
| 2.5 ran3a干扰植株表型分析 | 第103页 |
| 2.6 过表达植株的抗性分析 | 第103-106页 |
| 3 讨论 | 第106-109页 |
| 3.1 龙眼D1Ran3A和D1Ran3B主要定位于细胞核 | 第106页 |
| 3.2 龙眼Ran基因参与调节植物生长周期和生殖生长 | 第106-107页 |
| 3.3 特异启动子驱动DlRan3A基因过表达影响烟草根毛发育 | 第107页 |
| 3.4 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因参与抗逆调节 | 第107-109页 |
| 第六章 35S或特异启动子驱动下异位表达龙眼DlRan3A和DlRan3B基因的转录组学分析 | 第109-149页 |
| 1 材料与方法 | 第110-113页 |
| 1.1 材料 | 第110页 |
| 1.2 转录组文库的构建和测序 | 第110-111页 |
| 1.3 参考序列比对和基因表达水平分析 | 第111页 |
| 1.4 差异基因筛选 | 第111页 |
| 1.5 差异表达聚类分析 | 第111页 |
| 1.6 差异基因GO和KEGG富集分析 | 第111-112页 |
| 1.7 转录因子分析 | 第112页 |
| 1.8 转录组数据的qPCR验证 | 第112-113页 |
| 2 结果与分析 | 第113-140页 |
| 2.1 mapping结果比对分析 | 第113页 |
| 2.2 差异表达基因分析 | 第113-126页 |
| 2.2.1 差异表达基因数目分析 | 第113-114页 |
| 2.2.2 转基因株系间共有的差异表达基因分析 | 第114-121页 |
| 2.2.3 转基因株系间特异的差异表达基因分析 | 第121-126页 |
| 2.3 差异表达基因的GO分类 | 第126-136页 |
| 2.3.1 差异表达基因的GO功能分类 | 第126-132页 |
| 2.3.2 差异表达基因的GO显著富集通路分析 | 第132-136页 |
| 2.4 差异表达基因的生物学代谢途径分析 | 第136-137页 |
| 2.5 转基因本氏烟转录组数据的qPCR验证 | 第137-140页 |
| 3 讨论 | 第140-149页 |
| 3.1 转录组测序手段研究Ran上下游作用因子的可行性 | 第140-141页 |
| 3.2 龙眼Ran参与生长素、细胞分裂素、脱落酸和油菜素内酯激素信号转导 | 第141-143页 |
| 3.3 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因参与调控生长发育过程 | 第143-146页 |
| 3.4 龙眼Ran参与调控植物抗逆反应 | 第146-147页 |
| 3.5 龙眼DlRan3A和DlRan3B基因的其他潜在功能 | 第147-149页 |
| 第七章 DlRan3A和DlRan3B基因的龙眼原位转化研究 | 第149-156页 |
| 1 材料与方法 | 第149-151页 |
| 1.1 材料 | 第149页 |
| 1.2 菌种、载体和主要试剂 | 第149页 |
| 1.3 方法 | 第149-151页 |
| 1.3.1 龙眼遗传转化表达载体构建 | 第149-150页 |
| 1.3.2 农杆菌介导的龙眼遗传转化 | 第150页 |
| 1.3.3 抗性芽中目的基因的表达量检测 | 第150-151页 |
| 2 结果与分析 | 第151-154页 |
| 2.1 抗性芽的分子检测 | 第151-152页 |
| 2.2 原位转化龙眼植株内源Ran基因表达量分析 | 第152-153页 |
| 2.3 原位转化龙眼植株内源抗性相关基因表达量分析 | 第153-154页 |
| 3 讨论 | 第154-156页 |
| 第八章 结论与展望 | 第156-161页 |
| 参考文献 | 第161-174页 |
| 附录 DlRan3A和DlRan3B基因启动子序列信息 | 第174-176页 |
| 发表的论文与参加的学术会议 | 第176-177页 |
| 致谢 | 第177页 |
