| 缩写词 | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-15页 |
| ABSTRACT | 第15-19页 |
| 第一章 引言 | 第20-33页 |
| 1 植物miRNA的研究现状 | 第20-31页 |
| 1.1 植物miRNA的生物合成 | 第21-22页 |
| 1.2 植物miRNA的作用机制 | 第22-23页 |
| 1.3 miRNA功能研究 | 第23-26页 |
| 1.3.1 miRNA对植物生长发育的调控作用 | 第23-24页 |
| 1.3.2 miRNA参与植物激素信号传递 | 第24页 |
| 1.3.3 miRNA在植物抗胁迫应答中的调控作用 | 第24-25页 |
| 1.3.4 miRNA参与调控植物次生代谢物的合成 | 第25-26页 |
| 1.4 miRNA分离和鉴定的方法 | 第26页 |
| 1.5 茶树儿茶素研究进展 | 第26-30页 |
| 1.6 茶树miRNA研究进展 | 第30-31页 |
| 2 本项目的研究意义及研究内容 | 第31-33页 |
| 2.1 研究意义 | 第31页 |
| 2.2 研究内容 | 第31-33页 |
| 第二章 生物信息学法鉴定茶树miRNA | 第33-46页 |
| 1 材料与方法 | 第33-37页 |
| 1.1 试验材料 | 第33页 |
| 1.2 miRNAs和核苷酸序列 | 第33-34页 |
| 1.3 候选miRNAs的鉴定 | 第34-35页 |
| 1.4 miRNA定量表达分析 | 第35-37页 |
| 1.4.1 茶树总miRNA提取及定量cDNA逆转录 | 第35页 |
| 1.4.2 miRNA的qPCR表达分析 | 第35-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-45页 |
| 2.1 茶树中miRNAs的预测和生物信息学预测miRNA前体序列分析 | 第37-43页 |
| 2.2 生物信息学预测miRNA的qPCR分析 | 第43页 |
| 2.3 miRNA靶基因预测 | 第43-45页 |
| 3 讨论 | 第45-46页 |
| 第三章 利用高通量测序鉴定茶树miRNA | 第46-59页 |
| 1 材料与方法 | 第46-49页 |
| 1.1 材料 | 第46页 |
| 1.2 方法 | 第46-49页 |
| 1.2.1 miRNA高通量测序文库构建及测序 | 第46-47页 |
| 1.2.2 高通量测序数据分析 | 第47-48页 |
| 1.2.3 miRNA的qPCR分析 | 第48-49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-57页 |
| 2.1 茶树小RNA的测序分析 | 第49-50页 |
| 2.2 茶树73条已知miRNA的获得 | 第50-53页 |
| 2.3 获得42条茶树新miRNA | 第53-55页 |
| 2.4 靶基因预测和功能分析 | 第55-56页 |
| 2.5 23条miRNA在茶树'1005'叶片中的差异表达分析 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 利用降解组测序分析茶树miRNA靶基因 | 第59-72页 |
| 1 材料与方法 | 第59-61页 |
| 1.1 材料 | 第59页 |
| 1.2 方法 | 第59-61页 |
| 1.2.1 测序试验流程 | 第59-60页 |
| 1.2.2 测序数据分析 | 第60-61页 |
| 2 结果与分析 | 第61-70页 |
| 2.1 茶树'1005'降解组测序基本数据分析 | 第61-62页 |
| 2.2 利用降解组测序获得茶树miRNA的靶基因 | 第62-70页 |
| 3 讨论 | 第70-72页 |
| 第五章 茶树儿茶素合成相关基因miRNA的预测及鉴定 | 第72-81页 |
| 1 材料与方法 | 第72-75页 |
| 1.1 试验材料 | 第72页 |
| 1.2 试验方法 | 第72-75页 |
| 1.2.1 儿茶素合成途径相关基因的miRNA在线预测 | 第72-73页 |
| 1.2.2 总RNA提取 | 第73页 |
| 1.2.3 利用改良RLM-RACE验证儿茶素合成相关基因mRNA的裂解位点 | 第73-75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-79页 |
| 2.1 利用RLM-RACE验证降解组测序获得的miRNA靶基因裂解位点 | 第75页 |
| 2.2 miRNA与儿茶素合成途径相关基因调控模式的预测 | 第75-77页 |
| 2.3 利用RLM-RACE鉴定miRNA对茶树儿茶素生物合成相关基因的裂解 | 第77-79页 |
| 3 讨论 | 第79-81页 |
| 3.1 miRNA在儿茶素的生物合成途径中具有重要的调控作用 | 第79-80页 |
| 3.2 miRNA对儿茶素合成作用模式较复杂 | 第80-81页 |
| 第六章 茶树叶片儿茶素含量变化与儿茶素相关基因和miRNA表达模式研究 | 第81-109页 |
| 1 材料与方法 | 第81-84页 |
| 1.1 材料 | 第81-82页 |
| 1.2 方法 | 第82-84页 |
| 1.2.1 激素处理 | 第82页 |
| 1.2.2 利用高效液相色谱法检测儿茶素含量 | 第82页 |
| 1.2.3 儿茶素生物合成途径相关基因的引物设计及荧光定量 | 第82-84页 |
| 1.2.4 茶树miRNA荧光定量及引物设计 | 第84页 |
| 2 结果与分析 | 第84-106页 |
| 2.1 茶树'1005'不同叶片中儿茶素含量变化分析 | 第84-86页 |
| 2.2 不同激素处理对'1005'儿茶素含量变化趋势分析 | 第86-89页 |
| 2.3 激素处理下儿茶素合成相关基因表达模式分析 | 第89-97页 |
| 2.3.1 儿茶素合成相关基因在外源生长素处理下的表达模式 | 第89-91页 |
| 2.3.2 儿茶素合成相关基因在外源脱落酸的表达模式 | 第91-93页 |
| 2.3.3 儿茶素合成相关基因在外源细胞分裂素处理下的表达模式 | 第93-95页 |
| 2.3.4 儿茶素合成相关基因在外源乙烯处理下的表达模式 | 第95-97页 |
| 2.4 儿茶素合成相关基因与miRNA表达模式分析 | 第97-106页 |
| 2.4.1 C4H与miRNA的表达模式分析 | 第97-98页 |
| 2.4.2 CHS与miRNA的表达模式分析 | 第98-99页 |
| 2.4.3 CHI与miRNA的表达模式分析 | 第99-100页 |
| 2.4.4 F3H与miRNA的表达模式分析 | 第100-101页 |
| 2.4.5 DFR与miRNA的表达模式分析 | 第101-102页 |
| 2.4.6 LAR与miRNA的表达模式分析 | 第102-103页 |
| 2.4.7 ANR与miRNA的表达模式分析 | 第103-106页 |
| 3 讨论 | 第106-109页 |
| 3.1 ETH、ABA和6BA可能通过促进其他类黄酮物质的合成减少儿茶素的积累 | 第106-107页 |
| 3.2 miRNA参与调控儿茶素的生物合成 | 第107-109页 |
| 第七章 莽草酸途径3-脱氢奎尼酸脱水酶/莽草酸脱氢酶表达调控及功能研究 | 第109-125页 |
| 1 材料与方法 | 第109-116页 |
| 1.1 材料 | 第109-110页 |
| 1.2 方法 | 第110-116页 |
| 1.2.1 调控DHD/SDH基因的miRNA预测与鉴定 | 第110页 |
| 1.2.2 DHD/SDH基因与miRNA的定量表达分析 | 第110页 |
| 1.2.3 茶树反义表达载体的构建 | 第110-113页 |
| 1.2.4 重组质粒转化农杆菌 | 第113-114页 |
| 1.2.5 本氏烟草无菌苗的培养及遗传转化 | 第114-115页 |
| 1.2.6 转基因烟草T1代中DHD/SDH的qPCR检测 | 第115页 |
| 1.2.7 转基因烟草T1代中类黄酮含量的检测 | 第115-116页 |
| 2 结果与分析 | 第116-123页 |
| 2.1 调控茶树DHD/SDH基因的miRNA验证及表达模式分析 | 第116-120页 |
| 2.1.1 茶树CsDHD/SDH2与miRNA预测和验证 | 第116-117页 |
| 2.1.2 DHD/SDH2与miRNA不同激素处理下的表达模式分析 | 第117-118页 |
| 2.1.3 DHD/SDH3与miRNA不同激素处理下的表达模式分析 | 第118-119页 |
| 2.1.4 茶树中三条DHD/SDH基因表达模式分析 | 第119-120页 |
| 2.2 转基因烟草T1代植株的获得 | 第120页 |
| 2.3 转基因烟草T1代植株的分子检测 | 第120-121页 |
| 2.4 转基因烟草T1代植株DHD/SDH基因的表达 | 第121-122页 |
| 2.5 转基因烟草T1代植株表型和类黄酮含量检测 | 第122-123页 |
| 3 讨论 | 第123-125页 |
| 第八章 总结 | 第125-130页 |
| 1 生物信息学法鉴定了茶树中92条保守miRNA | 第125页 |
| 2 小RNA测序得到了茶树73条保守miRNA和42条新miRNA | 第125-126页 |
| 3 解组测序验证19条miRNA对23条靶基因的裂解 | 第126页 |
| 4 利用RLM-RACE鉴定了14条miRNA对9条儿茶素合成相关基因的裂解 | 第126页 |
| 5 外源激素IAA、2,4-D、ABA、6BA和ETH降低儿茶素的积累 | 第126-127页 |
| 6 儿茶素含量变化与相关基因表达模式差异较大 | 第127页 |
| 7 9条miRNA与儿茶素合成相关基因表达模式 | 第127-128页 |
| 8 茶树CsDHD/SDH1干扰表达导致烟草自身NtDHD/SDH1表达下调 | 第128-130页 |
| 本研究的创新点 | 第130页 |
| 展望 | 第130-131页 |
| 参考文献 | 第131-146页 |
| 附录A: 生物信息学鉴定的miRNA靶基因的预测 | 第146-150页 |
| 附录B: 生物信息学鉴定的miRNA前体二级结构图 | 第150-162页 |
| 附录C: 茶树CsDHD/SDH1及烟草NtDHD/SDH1保守结构预测结果 | 第162-163页 |
| 附录D: 茶树叶片保守microRNA序列信息 | 第163-167页 |
| 攻读博士期间发表论文 | 第167-168页 |
| 致谢 | 第168页 |
