| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 缩略用语 | 第9-11页 |
| 抗生素缩写 | 第11-19页 |
| 第一章 前言 | 第19-31页 |
| 1. 铜绿假单胞菌中的12个RND外排泵系统 | 第20-23页 |
| 2. RND外排泵的结构特点 | 第23-26页 |
| 3. RND外排泵的表达调控 | 第26-28页 |
| 4. 铜绿假单胞菌RND外排泵对致病性的影响 | 第28-29页 |
| 5. 外排泵抑制剂的筛选和进展 | 第29-30页 |
| 6. 研究思路和技术路线 | 第30-31页 |
| 第二章 材料和方法 | 第31-52页 |
| 1. 实验材料 | 第31-35页 |
| ·细菌及其生长 | 第31-34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·仪器 | 第34-35页 |
| 2. 实验方法 | 第35-52页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·铜绿假单胞菌感受态细胞的快速制备 | 第35-36页 |
| ·电转化 | 第36页 |
| ·报道子构建 | 第36-39页 |
| ·RND外排泵报道子的构建 | 第37-38页 |
| ·金属离子外排泵报道子的构建 | 第38-39页 |
| ·突变体的构建 | 第39-43页 |
| ·RND外排泵单突变的构建 | 第39-41页 |
| ·金属离子外排泵单突变重组质粒的构建 | 第41-43页 |
| ·RND外排泵表达水平的测定 | 第43-44页 |
| ·MICs(最小抑制浓度)的测定 | 第44页 |
| ·抑菌圈实验 | 第44-45页 |
| ·互补菌株C2528的构建 | 第45页 |
| ·β-半乳糖苷酶实验 | 第45-46页 |
| ·pLY表达系统的构建 | 第46-47页 |
| ·pLY-Not-luxCDABE重组质粒的构建 | 第47页 |
| ·pLYB-luxABCDE重组质粒的构建 | 第47页 |
| ·pLYC-sacB重组质粒的构建 | 第47页 |
| ·致病力实验 | 第47-48页 |
| ·白菜模型测试菌体致病力实验 | 第47-48页 |
| ·果蝇模型测试菌体致病力实验 | 第48页 |
| ·绿脓菌素的测定 | 第48页 |
| ·胞外蛋白酶测定 | 第48-49页 |
| ·生长的测定 | 第49页 |
| ·细菌泳动,丛动性实验 | 第49-50页 |
| ·细菌蹭行运动实验 | 第50页 |
| ·PQS的提取 | 第50页 |
| ·TLC实验 | 第50-51页 |
| ·溶血素活性测定 | 第51页 |
| ·β-内酰胺酶活性测定 | 第51-52页 |
| 第三章 结果 | 第52-79页 |
| 1. RND外排泵表达和功能 | 第52-61页 |
| ·RND外排泵基因表达水平的比较 | 第52-54页 |
| ·硫酸锌对RND外排泵表达的诱导 | 第54-56页 |
| ·RND外排泵基因敲除结果 | 第56-57页 |
| ·RND外排泵突变体的抗生素敏感性实验 | 第57-59页 |
| ·PAO(ΔczcC)在硫酸锌存在条件下对抗生素的敏感变化 | 第59-60页 |
| ·PAO(ΔczcS)对金属离子的抗性变化 | 第60-61页 |
| 2. MuxABC-OpmB的功能研究 | 第61-66页 |
| ·PAO(ΔmuxA)的耐药性特点 | 第61-62页 |
| ·青霉素耐药性升高原因初探 | 第62页 |
| ·PAO(ΔmuxA)突变体β-内酰胺酶活性 | 第62-63页 |
| ·PAO(ΔmuxA)突变体降低了铜绿假单胞菌的致病力 | 第63-65页 |
| ·PAO(ΔmuxA)丧失了蹭行运动的能力 | 第65页 |
| ·PAO(ΔmuxA)致病力的下降部分是由蹭行运动的能力丧失造成的 | 第65-66页 |
| 3. 铜绿假单胞菌中新型可控表达系统的构建及验证 | 第66-74页 |
| ·构建载体的测序 | 第66-70页 |
| ·锌离子用量的确定 | 第70页 |
| ·pLY表达系统中启动子转录活性的验证 | 第70-71页 |
| ·用固体平板检验所构建表达体系表达目的蛋白的有效性 | 第71-74页 |
| ·用不含RBS的luxABCDE验证pLY-B表达载体的功能 | 第71-73页 |
| ·用含有RBS位点sacB验证pLY表达载体是否能正常工作 | 第73-74页 |
| ·表达系统在大肠杆菌中的作用 | 第74页 |
| 4. 金属外排泵的表达和功能 | 第74-79页 |
| ·金属离子外排泵的确定 | 第75页 |
| ·金属离子外排泵的表达和调节 | 第75-77页 |
| ·重金属的调节 | 第75-76页 |
| ·抗生素的调节及和金属离子的协同作用 | 第76-77页 |
| ·金属离子外排泵单突变的构建 | 第77页 |
| ·MICs的测定 | 第77-79页 |
| 第四章 讨论 | 第79-84页 |
| 参考文献 | 第84-96页 |
| 科研成果 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
