| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 1 引言 | 第21-44页 |
| 1.1 奶牛乳腺的氧化应激 | 第22-25页 |
| 1.1.1 乳腺氧化应激的产生 | 第22-24页 |
| 1.1.2 氧化应激对奶牛乳腺免疫功能和乳腺健康的影响 | 第24-25页 |
| 1.2 硒的代谢吸收与添加量 | 第25-27页 |
| 1.2.1 硒的营养重要性及其毒性作用 | 第25-26页 |
| 1.2.2 动物对硒的摄取及硒的添加形式与剂量 | 第26页 |
| 1.2.3 硒的代谢和消化吸收 | 第26-27页 |
| 1.2.3.1 无机硒源在瘤胃中的代谢及小肠中的吸收 | 第26-27页 |
| 1.2.3.2 有机硒源在瘤胃中的代谢及小肠中的吸收 | 第27页 |
| 1.3 硒蛋白的合成及其生物学功能 | 第27-31页 |
| 1.3.1 日粮硒在生物体内的代谢途径 | 第27-28页 |
| 1.3.2 硒蛋白的生物学合成 | 第28-29页 |
| 1.3.3 硒蛋白的生物学功能 | 第29-31页 |
| 1.3.3.1 GPX家族及其生物学功能 | 第29-30页 |
| 1.3.3.2 TrxR家族及其生物学功能 | 第30-31页 |
| 1.3.3.3 ID家族及其生物学功能 | 第31页 |
| 1.3.3.4 SelP的生物学功能 | 第31页 |
| 1.4 硒对奶牛乳腺抗氧化功能的调节作用及其机理 | 第31-39页 |
| 1.4.1 硒对乳腺抗氧化功能的影响 | 第31-33页 |
| 1.4.2 硒对乳腺抗氧化功能的调节机理 | 第33-39页 |
| 1.4.2.1 对硒蛋白酶活性的调节 | 第33页 |
| 1.4.2.2 对硒蛋白合成及其基因表达的调控 | 第33-35页 |
| 1.4.2.3 在蛋白翻译水平对硒蛋白合成的调节 | 第35页 |
| 1.4.2.4 对MAPK信号通路的调控以及对花生四烯酸释放和代谢的影响 | 第35-39页 |
| 1.4.2.4.1 花生四烯酸的释放和代谢及其与氧化应激的关系 | 第35-37页 |
| 1.4.2.4.2 丝裂原活化蛋白激酶信号通路与花生四烯酸释放和代谢的关系 | 第37-38页 |
| 1.4.2.4.3 硒对MAPK信号通路的调控 | 第38-39页 |
| 1.5 硒对奶牛乳腺免疫功能的调节作用及其机理 | 第39-41页 |
| 1.5.1 对先天免疫功能的影响 | 第39-40页 |
| 1.5.2 对适应性免疫功能的影响 | 第40页 |
| 1.5.3 对内皮细胞功能的影响 | 第40-41页 |
| 1.5.4 对奶牛乳腺免疫功能的调节机理 | 第41页 |
| 1.6 论文研究的总体思路 | 第41-44页 |
| 1.6.1 研究目的和意义 | 第41-42页 |
| 1.6.2 论文整体研究的技术路线 | 第42-43页 |
| 1.6.3 论文主要研究内容 | 第43-44页 |
| 2 试验研究 | 第44-128页 |
| 2.1 日粮硒添加水平对奶牛产奶性能、抗氧化功能与免疫功能的影响 | 第44-57页 |
| 2.1.1 引言 | 第44页 |
| 2.1.2 试验材料与方法 | 第44-48页 |
| 2.1.2.1 试验材料 | 第44-45页 |
| 2.1.2.2 试验动物及饲养管理 | 第45页 |
| 2.1.2.3 基础日粮 | 第45页 |
| 2.1.2.4 试验设计 | 第45-46页 |
| 2.1.2.5 样品采集与保存 | 第46页 |
| 2.1.2.6 测定指标及方法 | 第46-47页 |
| 2.1.2.6.1 产奶量及干物质采食量 | 第46页 |
| 2.1.2.6.2 乳成分 | 第46页 |
| 2.1.2.6.3 血清抗氧化指标 | 第46-47页 |
| 2.1.2.6.4 全血硒和乳硒含量 | 第47页 |
| 2.1.2.6.5 血清免疫指标 | 第47页 |
| 2.1.2.6.6 血清ARA浓度及其代谢相关指标 | 第47页 |
| 2.1.2.7 试验数据统计分析 | 第47-48页 |
| 2.1.3 结果 | 第48-52页 |
| 2.1.3.1 日粮硒水平对奶牛DMI和产奶性能的影响 | 第48-49页 |
| 2.1.3.2 日粮硒水平对奶牛血清抗氧化指标的影响 | 第49-50页 |
| 2.1.3.3 日粮硒水平对奶牛血清免疫指标的影响 | 第50-51页 |
| 2.1.3.4 日粮硒水平对奶牛血清ARA浓度及相关代谢指标的影响 | 第51-52页 |
| 2.1.3.5 日粮硒水平对奶牛全血和乳硒含量的影响 | 第52页 |
| 2.1.4 讨论 | 第52-56页 |
| 2.1.4.1 日粮硒添加水平对奶牛产奶性能的影响 | 第52-53页 |
| 2.1.4.2 日粮硒添加水平对奶牛抗氧化功能的影响 | 第53-54页 |
| 2.1.4.3 日粮硒添加水平对奶牛ARA浓度及代谢相关指标的影响 | 第54-55页 |
| 2.1.4.4 日粮硒添加水平对奶牛免疫功能的影响 | 第55-56页 |
| 2.1.4.5 日粮硒添加水平对奶牛全血硒和乳硒水平的影响 | 第56页 |
| 2.1.5 小结 | 第56-57页 |
| 2.2 硒对奶牛乳腺硒蛋白合成及抗氧化功能的影响 | 第57-83页 |
| 2.2.1 引言 | 第57页 |
| 2.2.2 试验材料与方法 | 第57-64页 |
| 2.2.2.1 试验材料 | 第57页 |
| 2.2.2.2 试剂配制 | 第57-58页 |
| 2.2.2.2.1 培养基的配制 | 第57-58页 |
| 2.2.2.2.2 硒代蛋氨酸溶液的配制 | 第58页 |
| 2.2.2.3 奶牛乳腺上皮细胞的分离培养 | 第58-59页 |
| 2.2.2.4 奶牛乳腺上皮细胞的接种与饥饿培养 | 第59页 |
| 2.2.2.5 试验设计 | 第59页 |
| 2.2.2.6 样品采集与处理 | 第59-60页 |
| 2.2.2.7 测定指标及方法 | 第60-64页 |
| 2.2.2.7.1 细胞活力 | 第60页 |
| 2.2.2.7.2 抗氧化指标 | 第60-61页 |
| 2.2.2.7.3 细胞内硒蛋白mRNA的相对表达量 | 第61-63页 |
| 2.2.2.7.3.1 细胞总RNA提取 | 第61页 |
| 2.2.2.7.3.2 反转录合成cDNA | 第61页 |
| 2.2.2.7.3.3 mRNA表达分析 | 第61-63页 |
| 2.2.2.7.4 细胞内GPX1和TrxR1的蛋白表达水平 | 第63-64页 |
| 2.2.2.7.5 cPLA2活性与mRNA表达及ARA含量 | 第64页 |
| 2.2.2.8 试验数据统计分析 | 第64页 |
| 2.2.3 结果 | 第64-77页 |
| 2.2.3.1 细胞总RNA检测 | 第64-65页 |
| 2.2.3.2 PCR扩增曲线、标准曲线及熔解曲线 | 第65-70页 |
| 2.2.3.2.1 PCR扩增效率曲线及标准曲线 | 第65-68页 |
| 2.2.3.2.2 PCR熔解曲线 | 第68-70页 |
| 2.2.3.3 PCR产物电泳检测及基因测序结果 | 第70页 |
| 2.2.3.4 硒对乳腺上皮细胞活力的影响 | 第70-71页 |
| 2.2.3.5 硒对细胞抗氧化指标的影响 | 第71-74页 |
| 2.2.3.6 硒对细胞硒蛋白mRNA表达的影响 | 第74-76页 |
| 2.2.3.7 硒对细胞硒蛋白蛋白表达的影响 | 第76-77页 |
| 2.2.3.8 硒对细胞cPLA2活性与mRNA表达及ARA含量的影响 | 第77页 |
| 2.2.4 讨论 | 第77-82页 |
| 2.2.4.1 硒对BMEC增殖的影响 | 第77-78页 |
| 2.2.4.2 硒对奶牛乳腺抗氧化功能的影响 | 第78-81页 |
| 2.2.4.3 硒对细胞cPLA2活性与mRNA表达及ARA浓度的影响 | 第81-82页 |
| 2.2.5 小结 | 第82-83页 |
| 2.3 硒对奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用 | 第83-104页 |
| 2.3.1 引言 | 第83-84页 |
| 2.3.2 试验材料与方法 | 第84-87页 |
| 2.3.2.1 试验材料 | 第84页 |
| 2.3.2.2 试剂配制 | 第84页 |
| 2.3.2.3 奶牛乳腺上皮细胞的培养 | 第84页 |
| 2.3.2.4 试验设计 | 第84-85页 |
| 2.3.2.5 样品采集与处理 | 第85页 |
| 2.3.2.6 测定项目及方法 | 第85-87页 |
| 2.3.2.6.1 细胞活力 | 第85页 |
| 2.3.2.6.2 抗氧化指标 | 第85页 |
| 2.3.2.6.3 硒蛋白的mRNA相对表达量 | 第85页 |
| 2.3.2.6.4 硒蛋白的蛋白表达水平 | 第85页 |
| 2.3.2.6.5 ARA代谢相关指标及其基因表达量 | 第85-87页 |
| 2.3.2.6.6 ERK1/2、JNK和p38MAPK的磷酸化水平 | 第87页 |
| 2.3.2.7 试验数据统计分析 | 第87页 |
| 2.3.3 结果 | 第87-99页 |
| 2.3.3.1 PCR扩增曲线、标准曲线及熔解曲线 | 第87-89页 |
| 2.3.3.1.1 PCR扩增曲线及标准曲线 | 第87-88页 |
| 2.3.3.1.2 PCR熔解曲线 | 第88-89页 |
| 2.3.3.2 PCR产物电泳检测及基因测序结果 | 第89-90页 |
| 2.3.3.3 硒对H_2O_2诱导损伤的细胞增殖的影响 | 第90页 |
| 2.3.3.4 硒对H_2O_2诱导损伤的细胞抗氧化指标的影响 | 第90-93页 |
| 2.3.3.5 硒对H_2O_2诱导损伤的细胞硒蛋白mRNA表达的影响 | 第93-94页 |
| 2.3.3.6 硒对H_2O_2诱导损伤的细胞硒蛋白表达水平的影响 | 第94-95页 |
| 2.3.3.7 硒对H_2O_2诱导损伤的细胞ARA浓度及代谢相关指标的影响 | 第95-97页 |
| 2.3.3.8 硒对H_2O_2诱导损伤的细胞ARA代谢相关指标mRNA表达的影响 | 第97-98页 |
| 2.3.3.9 硒对H_2O_2诱导损伤的细胞MAPK相关蛋白磷酸化水平的影响 | 第98-99页 |
| 2.3.4 讨论 | 第99-102页 |
| 2.3.4.1 H_2O_2诱导的氧化损伤对BMEC抗氧化功能的影响 | 第99-100页 |
| 2.3.4.2 硒对BMEC氧化损伤的保护作用 | 第100-101页 |
| 2.3.4.3 硒预防和保护细胞免受氧化损伤的机理 | 第101-102页 |
| 2.3.5 小结 | 第102-104页 |
| 2.4 二硝基氯苯抑制硫氧还蛋白还原酶活性诱导的细胞氧化损伤模型的建立 | 第104-114页 |
| 2.4.1 引言 | 第104页 |
| 2.4.2 材料与方法 | 第104-106页 |
| 2.4.2.1 试验材料 | 第104页 |
| 2.4.2.2 试剂配制 | 第104-105页 |
| 2.4.2.3 奶牛乳腺上皮细胞的培养 | 第105页 |
| 2.4.2.4 试验设计 | 第105页 |
| 2.4.2.5 样品采集与处理 | 第105-106页 |
| 2.4.2.6 测定项目及方法 | 第106页 |
| 2.4.2.6.1 细胞增殖率 | 第106页 |
| 2.4.2.6.2 抗氧化指标 | 第106页 |
| 2.4.2.7 试验数据统计分析 | 第106页 |
| 2.4.3 结果 | 第106-110页 |
| 2.4.3.1 DNCB浓度与作用时间对细胞增殖率的影响 | 第106-108页 |
| 2.4.3.2 DNCB 浓度对抗氧化指标的影响 | 第108-110页 |
| 2.4.4 讨论 | 第110-113页 |
| 2.4.4.1 DNCB浓度和作用时间对细胞增殖的影响 | 第110页 |
| 2.4.4.2 DNCB作用浓度对细胞TrxR活性的抑制作用 | 第110-111页 |
| 2.4.4.3 DNCB作用浓度对细胞抗氧化指标的影响 | 第111-112页 |
| 2.4.4.4 DNCB通过抑制TrxR活性诱导的细胞氧化损伤的评价指标 | 第112-113页 |
| 2.4.5 小结 | 第113-114页 |
| 2.5 硒对硫氧还蛋白还原酶活性抑制引起的细胞氧化损伤的保护作用 | 第114-128页 |
| 2.5.1 引言 | 第114页 |
| 2.5.2 试验材料与方法 | 第114-116页 |
| 2.5.2.1 试验材料 | 第114-115页 |
| 2.5.2.2 试剂配制 | 第115页 |
| 2.5.2.3 奶牛乳腺上皮细胞的培养 | 第115页 |
| 2.5.2.4 试验设计 | 第115页 |
| 2.5.2.5 样品采集与处理 | 第115页 |
| 2.5.2.6 测定项目及方法 | 第115-116页 |
| 2.5.2.6.1 细胞活力 | 第115页 |
| 2.5.2.6.2 抗氧化指标 | 第115-116页 |
| 2.5.2.6.3 硒蛋白的mRNA相对表达量 | 第116页 |
| 2.5.2.6.4 硒蛋白的蛋白表达水平 | 第116页 |
| 2.5.2.6.5 ARA代谢相关指标及基因表达量 | 第116页 |
| 2.5.2.6.6 ASK1活性及ERK1/2、JNK和p38MAPK的磷酸化水平 | 第116页 |
| 2.5.2.7 试验数据统计分析 | 第116页 |
| 2.5.3 结果 | 第116-125页 |
| 2.5.3.1 硒对DNCB诱导损伤的细胞增殖率的影响 | 第116-117页 |
| 2.5.3.2 硒对DNCB诱导损伤的细胞抗氧化相关指标的影响 | 第117-118页 |
| 2.5.3.3 硒对DNCB诱导损伤的细胞硒蛋白mRNA表达的影响 | 第118-120页 |
| 2.5.3.4 硒对DNCB诱导损伤的细胞硒蛋白蛋白表达的影响 | 第120页 |
| 2.5.3.5 硒对DNCB诱导损伤的细胞ARA释放及代谢相关指标的影响 | 第120-123页 |
| 2.5.3.6 硒对DNCB诱导损伤的细胞ARA代谢相关指标mRNA表达的影响 | 第123-124页 |
| 2.5.3.7 硒对DNCB诱导损伤的细胞MAPK信号通路相关蛋白酶活性的影响 | 第124-125页 |
| 2.5.4 讨论 | 第125-127页 |
| 2.5.4.1 DNCB对细胞TrxR活性的抑制效果及其对抗氧化功能的影响 | 第125页 |
| 2.5.4.2 Trx R活性降低对MAPK信号通路及ARA代谢的影响 | 第125-126页 |
| 2.5.4.3 硒通过TrxR-MAPK-ARA途径保护细胞免受氧化损伤的机理 | 第126-127页 |
| 2.5.5 小结 | 第127-128页 |
| 3 论文总体讨论与结论 | 第128-135页 |
| 3.1 总体讨论 | 第128-132页 |
| 3.1.1 硒对奶牛抗氧化功能的促进效果 | 第128-129页 |
| 3.1.2 硒对乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用 | 第129-130页 |
| 3.1.3 硒对奶牛乳腺抗氧化功能的影响机制 | 第130-132页 |
| 3.2 总体结论 | 第132-133页 |
| 3.3 存在的问题及进一步研究的领域 | 第133页 |
| 3.4 本研究的创新之处 | 第133-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
| 参考文献 | 第136-157页 |
| 作者简介 | 第157-158页 |
