| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-42页 |
| 1.1 铜绿假单胞菌概述 | 第12页 |
| 1.2 P.aeruginosa病理学特征 | 第12-14页 |
| 1.3 P.aeruginosa T3SS毒力分泌系统研究进展 | 第14-17页 |
| 1.3.1 ExoT | 第14-15页 |
| 1.3.2 ExoS | 第15页 |
| 1.3.3 ExoY | 第15-16页 |
| 1.3.4 ExoU | 第16页 |
| 1.3.5 P.aeruginosa T3SS编码基因及其SNP | 第16-17页 |
| 1.4 P.aeruginosa检测方法进展 | 第17-26页 |
| 1.4.1 传统的细菌培养法 | 第17-18页 |
| 1.4.2 免疫学检测方法 | 第18-20页 |
| 1.4.3 分子生物学检测方法 | 第20-25页 |
| 1.4.4 电化学分析方法 | 第25-26页 |
| 1.5 本研究的意义和内容 | 第26-28页 |
| 1.5.1 研究意义 | 第26-27页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第27-28页 |
| 参考文献 | 第28-42页 |
| 第二章 PEG介导的高分散性MNPs制备及功能化研究 | 第42-57页 |
| 2.1 引言 | 第42-43页 |
| 2.2 材料与方法 | 第43-45页 |
| 2.2.1 实验试剂与仪器 | 第43-44页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第44-45页 |
| 2.3 结果与分析 | 第45-53页 |
| 2.3.1 不同分子量PEG及铁离子浓度对合成的影响 | 第45-47页 |
| 2.3.2 不同环境温度对制备MNPs形貌影响及分散性分析 | 第47-48页 |
| 2.3.3 MNPs表面硅烷化 | 第48-49页 |
| 2.3.4 MNPs@SiO_2的表面功能化修饰及偶联探针的应用 | 第49-51页 |
| 2.3.5 Zeta电位及粒径分析 | 第51-52页 |
| 2.3.6 MNPs的磁滞回归曲线 | 第52-53页 |
| 2.4 结论 | 第53-54页 |
| 2.4.1 基于PEG-4000的MNPs合成 | 第53页 |
| 2.4.2 MNPs硅烷化修饰 | 第53页 |
| 2.4.3 MNPs的功能化修饰 | 第53页 |
| 2.4.4 MNPs性质分析 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 第三章 磁富集PCR技术建立及其在P.aeruginosa检测中的应用 | 第57-74页 |
| 3.1 引言 | 第57-58页 |
| 3.2 材料与方法 | 第58-62页 |
| 3.2.1 菌种 | 第58页 |
| 3.2.2 实验试剂与仪器 | 第58-59页 |
| 3.2.3 实验方法 | 第59-62页 |
| 3.3 结果与分析 | 第62-70页 |
| 3.3.1 MNPs富集基因组DNA的条件优化 | 第62-63页 |
| 3.3.2 P.aeruginosa特异性基因选择 | 第63-64页 |
| 3.3.3 磁富集PCR前期验证性研究 | 第64-65页 |
| 3.3.4 磁富集PCR条件优化研究 | 第65-67页 |
| 3.3.5 磁富集PCR检测P.aeruginosa gyrB基因灵敏度测试 | 第67页 |
| 3.3.6 磁富集巢式PCR检测P.aeruginosa ecfX基因的原理 | 第67-68页 |
| 3.3.7 磁富集巢式PCR条件探索及验证 | 第68-69页 |
| 3.3.8 磁富集巢式PCR方法的特异性测试 | 第69-70页 |
| 3.3.9 磁富集巢式PCR方法的灵敏度测试 | 第70页 |
| 3.4 结论 | 第70-71页 |
| 3.4.1 优化了MNPs富集基因组的条件 | 第70页 |
| 3.4.2 建立了利用磁富集PCR检测P.aeruginosa的方法 | 第70-71页 |
| 3.4.3 建立了利用磁富集巢式PCR检测P.aeruginosa的方法 | 第71页 |
| 参考文献 | 第71-74页 |
| 第四章 利用磁富集、磁分离及化学发光技术的P.aeruginosa高灵敏快速检测 | 第74-88页 |
| 4.1 引言 | 第74-75页 |
| 4.2 材料与方法 | 第75-78页 |
| 4.2.1 菌种 | 第75页 |
| 4.2.2 实验试剂与仪器 | 第75-77页 |
| 4.2.3 实验方法 | 第77-78页 |
| 4.3 结果与分析 | 第78-85页 |
| 4.3.1 磁富集PCR验证 | 第78-79页 |
| 4.3.2 清洗对化学发光背景值的影响 | 第79-80页 |
| 4.3.3 不同MNPs@Probe对化学发光强度的影响 | 第80页 |
| 4.3.4 不同探针位点对化学发光强度的影响 | 第80-81页 |
| 4.3.5 PCR及杂交条件对化学发光强度的影响 | 第81-83页 |
| 4.3.6 不同PCR循环数对化学发光值的影响 | 第83页 |
| 4.3.7 利用磁富集PCR及化学发光技术检测P.aeruginosa标准菌株 | 第83-84页 |
| 4.3.8 灵敏度测试 | 第84-85页 |
| 4.3.9 特异性检测 | 第85页 |
| 4.4 结论 | 第85-86页 |
| 4.4.1 结合磁富集PCR及化学发光检测P.aeruginosa的条件优化 | 第85-86页 |
| 4.4.2 初步建立了基于低循环数下磁富集PCR的定量检测方法 | 第86页 |
| 4.4.3 验证了该方法的特异性和灵敏度 | 第86页 |
| 参考文献 | 第86-88页 |
| 第五章 基于磁富集多重PCR和化学发光的P.aeruginosa T3SS高灵敏快速分型研究 | 第88-100页 |
| 5.1 引言 | 第88页 |
| 5.2 材料与方法 | 第88-91页 |
| 5.2.1 菌株 | 第88页 |
| 5.2.2 实验试剂与仪器 | 第88-90页 |
| 5.2.3 实验方法 | 第90-91页 |
| 5.3 结果及分析 | 第91-97页 |
| 5.3.1 T3SS基因分型单重PCR退火温度优化 | 第91-92页 |
| 5.3.2 T3SS基因分型的多重PCR | 第92-94页 |
| 5.3.3 T3SS基因分型的磁富集多重PCR | 第94页 |
| 5.3.4 利用化学发光和磁分离构建T3SS基因分型技术 | 第94-96页 |
| 5.3.5 P.aeruginosa标准菌株的T3SS分型 | 第96页 |
| 5.3.6 临床样本T3SS分型 | 第96-97页 |
| 5.4 结论 | 第97-98页 |
| 5.4.1 通过优化建立了T3SS磁富集多重PCR | 第97-98页 |
| 5.4.2 通过优化建立了T3SS基因分型方法 | 第98页 |
| 5.4.3 P.aeruginosa临床样本T3SS分型 | 第98页 |
| 参考文献 | 第98-100页 |
| 第六章 基于磁富集及磁分离双色荧光微阵列技术的exoS基因SNP分型方法研究 | 第100-115页 |
| 6.1 引言 | 第100-101页 |
| 6.2 材料与方法 | 第101-104页 |
| 6.2.1 菌株 | 第101页 |
| 6.2.2 实验试剂与仪器 | 第101-103页 |
| 6.2.3 实验方法 | 第103-104页 |
| 6.3 结果与分析 | 第104-112页 |
| 6.3.1 羧基化MNPs表面修饰SA | 第104-105页 |
| 6.3.2 检测过程中清洗对非特异性吸附的影响 | 第105-106页 |
| 6.3.3 exoS基因SNP位点选择 | 第106-107页 |
| 6.3.4 exoS G162A SNP位点分型 | 第107-109页 |
| 6.3.5 G434C位点SNP分型 | 第109-110页 |
| 6.3.6 P.aeruginosa标准菌株分型 | 第110-111页 |
| 6.3.7 P.aeruginosa临床样本分型 | 第111-112页 |
| 6.4 结论 | 第112-113页 |
| 6.4.1 MNPs表面修饰及吸附荧光实验 | 第112页 |
| 6.4.2 建立了G162A及G434C位点SNP分型方法 | 第112-113页 |
| 6.4.3 临床样本分型 | 第113页 |
| 参考文献 | 第113-115页 |
| 第七章 总结与展望 | 第115-117页 |
| 7.1 本论文工作总结 | 第115-116页 |
| 7.2 下一步工作展望 | 第116-117页 |
| 附录 | 第117-119页 |
| 致谢 | 第119页 |
