| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-27页 |
| 1.1 昆虫病原真菌的研究概况 | 第15页 |
| 1.2 球孢白僵菌简介 | 第15-17页 |
| 1.2.1 分类现状 | 第15-16页 |
| 1.2.2 生物学特征 | 第16页 |
| 1.2.3 应用现状 | 第16-17页 |
| 1.3 球孢白僵菌致病机理 | 第17-23页 |
| 1.3.1 致病过程 | 第17-18页 |
| 1.3.2 侵染机制 | 第18-19页 |
| 1.3.3 侵染宿主过程主要降解酶 | 第19-22页 |
| 1.3.4 致病相关基因的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.4 球孢白僵菌基因功能研究方法 | 第23-27页 |
| 第二章 引言 | 第27-31页 |
| 2.1 研究背景和意义 | 第27-28页 |
| 2.2 研究内容 | 第28-29页 |
| 2.3 技术路线 | 第29-31页 |
| 第三章 BbpepA00319基因的克隆及生物信息学分析 | 第31-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第31页 |
| 3.1.2 主要试剂及配方 | 第31页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第31-32页 |
| 3.1.4 实验相关软件及网址 | 第32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-33页 |
| 3.2.1 球孢白僵菌基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| 3.2.2 肽酶基因BbpepA00319的生物信息学分析 | 第33页 |
| 3.3 结果与分析 | 第33-38页 |
| 3.3.1 BbpepA00319基因序列及氨基酸序列分析 | 第33-35页 |
| 3.3.2 BbpepA00319蛋白信号肽预测 | 第35-36页 |
| 3.3.3 BbpepA00319蛋白跨膜区域预测 | 第36-37页 |
| 3.3.4 BbpepA00319蛋白结构域预测 | 第37-38页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 肽酶基因BbpepA00319敲除载体的构建及转化球孢白僵菌 | 第39-57页 |
| 4.1 实验材料 | 第39-41页 |
| 4.1.1 载体及菌株 | 第39页 |
| 4.1.2 实验试剂及配方 | 第39-40页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第40-41页 |
| 4.2 试验方法 | 第41-49页 |
| 4.2.1 目的基因两端侧翼序列pepA00319L和pepA00319R的克隆 | 第41-44页 |
| 4.2.2 右同源臂与敲除骨架载体pK2-bar的连接 | 第44-46页 |
| 4.2.3 目的基因敲除载体pepA00319L-pK2-pepA00319R的构建 | 第46-48页 |
| 4.2.4 农杆菌介导的球孢白僵菌遗传转化 | 第48-49页 |
| 4.3 结果与分析 | 第49-55页 |
| 4.3.1 肽酶基因BbpepA00319的L臂和R臂的PCR扩增 | 第49-50页 |
| 4.3.2 阳性克隆的初步筛选 | 第50页 |
| 4.3.3 阳性克隆质粒的验证 | 第50页 |
| 4.3.4 目的DNA片段与载体的酶切和回收 | 第50-52页 |
| 4.3.5 pepA00319L-pK2-pepA00319R敲除载体的构建 | 第52-53页 |
| 4.3.6 敲除转化子的筛选 | 第53-55页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第55-57页 |
| 第五章 肽酶基因BbpepA00319功能初步分析 | 第57-67页 |
| 5.1 实验材料 | 第57-58页 |
| 5.1.1 菌株及蚕种 | 第57页 |
| 5.1.2 主要试剂及配方 | 第57页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第57-58页 |
| 5.2 实验方法 | 第58-60页 |
| 5.2.1 球孢白僵菌的培养 | 第58页 |
| 5.2.2 敲除突变株的表型测定 | 第58-59页 |
| 5.2.3 突变株的化学物质敏感性测定 | 第59页 |
| 5.2.4 突变株的毒力测定 | 第59-60页 |
| 5.3 结果与分析 | 第60-65页 |
| 5.3.1 突变株表型测定结果 | 第60-61页 |
| 5.3.2 突变株和野生型菌株对化学物质敏感性的比较 | 第61-62页 |
| 5.3.3 突变株和野生型菌株毒力比较 | 第62-65页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第65-67页 |
| 第六章 总结 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 硕士期间发表的文章及参研课题 | 第81页 |
