| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 中英文缩略词表 | 第9-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 第一章 文献研究 | 第11-26页 |
| 1 三萜和岗梅三萜 | 第11-13页 |
| 1.1 三萜及三萜皂苷简介 | 第11页 |
| 1.2 岗梅三萜皂苷 | 第11-13页 |
| 2 三萜皂苷生物合成相关关键酶细胞色素P450的研究进展 | 第13-22页 |
| 2.1 三萜皂苷的生物合成途径 | 第13-16页 |
| 2.2 参与三萜皂苷生物合成后修饰的CYPs | 第16-22页 |
| 3 转录组学在CYP基因发掘方面的应用 | 第22-24页 |
| 4 岗梅皂苷生物合成途径研究进展 | 第24-25页 |
| 5 本文的研究思路 | 第25-26页 |
| 第二章 材料和方法 | 第26-43页 |
| 1 材料 | 第26-30页 |
| 1.1 植物材料 | 第26页 |
| 1.2 菌株 | 第26页 |
| 1.3 载体 | 第26页 |
| 1.4 主要试剂与工具酶 | 第26-27页 |
| 1.5 主要溶液及配置 | 第27-29页 |
| 1.6 主要仪器设备 | 第29页 |
| 1.7 分子生物学软件 | 第29-30页 |
| 2 方法 | 第30-43页 |
| 2.1 CYPs基因的筛选 | 第30页 |
| 2.2 基因克隆 | 第30-39页 |
| 2.3 蛋白表达及功能分析 | 第39-43页 |
| 第三章 结果和分析 | 第43-65页 |
| 1 CYPs基因的筛选 | 第43-48页 |
| 1.1 本地BLAST筛选CYP基因 | 第43-44页 |
| 1.2 系统发生分析筛选CYP基因 | 第44-46页 |
| 1.3 小结 | 第46-48页 |
| 2 CYP基因的克隆 | 第48-50页 |
| 2.1 RNA提取及反转录 | 第48-49页 |
| 2.2 CL410-1基因的TA克隆 | 第49-50页 |
| 3 CL410-1基因重组表达质粒的构建 | 第50-56页 |
| 3.1 pEXP410酵母表达质粒的构建 | 第50-53页 |
| 3.2 pESC-TRP-410表达质粒的构建 | 第53-55页 |
| 3.3 小结 | 第55-56页 |
| 4 CL3010-1基因重组表达质粒的构建 | 第56-59页 |
| 4.1 线性化pESC-TRP酵母表达载体 | 第56-57页 |
| 4.2 In-Fusion引物设计和PCR产物的制备 | 第57页 |
| 4.3 建立In-Fusion克隆反应体系并转化鉴定 | 第57-58页 |
| 4.4 小结 | 第58-59页 |
| 5 CL410-1蛋白表达及功能验证 | 第59-65页 |
| 5.1 表达质粒的转染 | 第59-60页 |
| 5.2 Western Blot分析CL410-1的表达 | 第60-62页 |
| 5.3 MS分析 | 第62-64页 |
| 5.4 小结 | 第64-65页 |
| 第四章 总结和讨论 | 第65-71页 |
| 1 总结 | 第65页 |
| 2 讨论 | 第65-69页 |
| 3 展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 附录 | 第75-83页 |
| 附录Ⅰ CL410-1氨基酸序列比对 | 第75-76页 |
| 附录Ⅱ CL3010氨基酸序列比对 | 第76-77页 |
| 附录Ⅲ 本研究工作中涉及的质粒 | 第77-78页 |
| 附录Ⅳ 本研究工作中涉及的菌株 | 第78-79页 |
| 附录Ⅴ 质谱图 | 第79-83页 |
| 在校期间发表论文情况 | 第83-84页 |
| 项目资助 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 附件 | 第86页 |
