| 摘要 | 第11-16页 |
| ABSTRACT | 第16-21页 |
| 缩略词表(ABBREVIATION) | 第22-24页 |
| 第一章 文献综述 | 第24-48页 |
| 1.1 聚羟基脂肪酸酯(PHA)的简介 | 第24-29页 |
| 1.1.1 PHA的种类与单体组成 | 第25-26页 |
| 1.1.2 PHA的性质 | 第26-28页 |
| 1.1.3 PHA的用途与应用前景 | 第28-29页 |
| 1.2 PHA的生物合成概述 | 第29-36页 |
| 1.2.1 PHA的生产菌 | 第29-30页 |
| 1.2.2 PHA的生物合成途径 | 第30-36页 |
| 1.2.2.1 利用脂肪酸β-氧化途径合成PHA | 第30页 |
| 1.2.2.2 不同类型PHA的生物合成 | 第30-36页 |
| 1.3 PHA生物合成途径中的关键酶 | 第36-40页 |
| 1.3.1 β-酮硫解酶(PhaA,BktB) | 第36-37页 |
| 1.3.2 乙酰乙酰-CoA还原酶/(R)-3-羟基丁酰-CoA脱氢酶(PhaB) | 第37页 |
| 1.3.3 (R)-特异性的烯酯酰-CoA水合酶(PhaJ) | 第37-38页 |
| 1.3.4 3-羟基癸酰-ACP：CoA转酰基酶(PhaG) | 第38-39页 |
| 1.3.5 PHA合成酶(PhaC) | 第39-40页 |
| 1.4 PHA的鉴定 | 第40-42页 |
| 1.4.1 PHA的定性鉴定方法 | 第40-41页 |
| 1.4.2 PHA的定量鉴定方法 | 第41-42页 |
| 1.5 利用传统方法提高PHA生产质量和数量的策略 | 第42-43页 |
| 1.6 合成生物学策略 | 第43-45页 |
| 1.6.1 合成生物学的定义 | 第43-44页 |
| 1.6.2 合成生物学的应用 | 第44页 |
| 1.6.3 利用合成生物学的方法生产PHA | 第44-45页 |
| 1.7 利用逆向脂肪酸β-氧化途径合成醇类和羧酸 | 第45-48页 |
| 第二章 重组大肠杆菌利用逆向脂肪酸β-氧化途径合成mcl-PHA | 第48-95页 |
| 2.1 引言 | 第48-49页 |
| 2.2 实验材料 | 第49-59页 |
| 2.2.1 实验所用菌株和质粒 | 第49-50页 |
| 2.2.1.1 实验所用菌株 | 第49-50页 |
| 2.2.1.2 实验所用质粒 | 第50页 |
| 2.2.2 实验所用引物 | 第50-52页 |
| 2.2.3 实验所用培养基 | 第52-53页 |
| 2.2.4 实验所需配制的溶液 | 第53-55页 |
| 2.2.5 实验所用抗生素 | 第55页 |
| 2.2.6 实验所用的工具酶 | 第55-56页 |
| 2.2.7 实验所用的试剂 | 第56-57页 |
| 2.2.8 实验所用的试剂盒 | 第57页 |
| 2.2.9 DNA分子量标记 | 第57页 |
| 2.2.10 实验所用仪器设备 | 第57-59页 |
| 2.3 实验方法 | 第59-75页 |
| 2.3.1 菌种保藏的常用方法 | 第59页 |
| 2.3.2 质粒、目的基因片段等的保藏 | 第59页 |
| 2.3.3 分子生物学的常用技术 | 第59-70页 |
| 2.3.3.1 基因的克隆 | 第60-64页 |
| 2.3.3.2 用于基因过表达的质粒载体构建 | 第64-65页 |
| 2.3.3.3 大肠杆菌化学感受态细胞的制备 | 第65页 |
| 2.3.3.4 大肠杆菌转化法 | 第65-66页 |
| 2.3.3.5 重组子验证方法 | 第66-68页 |
| 2.3.3.6 DNA测序和序列分析 | 第68页 |
| 2.3.3.7 基因敲除的方法 | 第68-70页 |
| 2.3.4 发酵方法 | 第70-71页 |
| 2.3.4.1 种子培养 | 第70页 |
| 2.3.4.2 摇瓶发酵 | 第70-71页 |
| 2.3.5 检测方法 | 第71-75页 |
| 2.3.5.1 细胞生长情况测定 | 第71页 |
| 2.3.5.2 细胞干重测定 | 第71页 |
| 2.3.5.3 PHB的检测 | 第71-72页 |
| 2.3.5.4 中链聚羟基脂肪酸酯(mcl-PHA)或短-中链聚合的聚羟基脂肪酸酯(scl-mcl PHA)的检测 | 第72-73页 |
| 2.3.5.5 葡萄糖及乙酸含量的测定 | 第73页 |
| 2.3.5.6 胞外游离脂肪酸的测定 | 第73-75页 |
| 2.4 实验结果 | 第75-93页 |
| 2.4.1 构建一个直接利用葡萄糖生产mcl-PHA的代谢途径 | 第75-82页 |
| 2.4.2 通过优化代谢途径来改善mcl-PHA的生物合成 | 第82-85页 |
| 2.4.3 硫酯酶敲除对mcl-PHA生物合成的影响 | 第85-89页 |
| 2.4.4 不同途径对mcl-PHA生物合成的影响 | 第89-91页 |
| 2.4.5 以木糖为碳源利用逆向脂肪酸β-氧化途径合成PHA | 第91-92页 |
| 2.4.6 同时利用葡萄糖和木糖为碳源合成mcl-PHA | 第92-93页 |
| 2.5 本章小结 | 第93-95页 |
| 第三章 重组大肠杆菌利用逆向脂肪酸β-氧化途径合成scl-mcl PHA | 第95-106页 |
| 3.1 引言 | 第95页 |
| 3.2 实验材料 | 第95-97页 |
| 3.2.1 实验所用菌株和质粒 | 第95-96页 |
| 3.2.1.1 实验所用菌株 | 第95-96页 |
| 3.2.1.2 实验所用质粒 | 第96页 |
| 3.2.2 实验所用引物 | 第96-97页 |
| 3.2.3 实验所用培养基 | 第97页 |
| 3.2.4 实验所用试剂和溶液 | 第97页 |
| 3.3 实验方法 | 第97页 |
| 3.4 实验结果 | 第97-102页 |
| 3.4.1 构建生产scl-mcl PHA的质粒 | 第97-100页 |
| 3.4.1.1 生产scl-mcl PHA所需聚合酶基因的克隆 | 第97-99页 |
| 3.4.1.2 重组大肠杆菌摇瓶发酵生产scl-mcl PHA | 第99-100页 |
| 3.4.2 提高3HB单体供应途径的构建 | 第100页 |
| 3.4.3 3HB生物合成途径对scl-mcl PHA产量的影响 | 第100-102页 |
| 3.5 讨论 | 第102-105页 |
| 3.6 本章小结 | 第105-106页 |
| 第四章 利用重组大肠杆菌合成含有偶数和奇数碳链单体的聚羟基脂肪酸酯 | 第106-124页 |
| 4.1 引言 | 第106-107页 |
| 4.2 实验材料 | 第107-108页 |
| 4.2.1 实验所用质粒 | 第107页 |
| 4.2.2 实验所用菌株 | 第107-108页 |
| 4.3 实验方法 | 第108页 |
| 4.4 实验结果及讨论 | 第108-123页 |
| 4.4.1 构建合成奇数链单体的底物供应途径 | 第108-112页 |
| 4.4.2 基因prpP,acs,prpE和pct对奇数链单体的组成含量的影响 | 第112-115页 |
| 4.4.3 同时过表达奇数链生产途径中的两个基因来提高奇数链单体的含量 | 第115-118页 |
| 4.4.4 丙酸添加量对奇数链单体含量的影响 | 第118-120页 |
| 4.4.5 通过增加乙酰-CoA的供应来提高mcl-PHA的产量 | 第120-123页 |
| 4.5 本章小结 | 第123-124页 |
| 全文总结 | 第124-127页 |
| 参考文献 | 第127-144页 |
| 致谢 | 第144-145页 |
| 攻读学位期间获得的奖励和荣誉 | 第145-146页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第146-147页 |
| 外文写作 | 第147-148页 |
| 英文译文 | 第148-157页 |
| 附件 | 第157页 |
