| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 主要符号对照表 | 第8-9页 |
| 第1章 引言 | 第9-29页 |
| 1.1 肿瘤前转移概述 | 第9-18页 |
| 1.1.1 肿瘤转移概述 | 第9-10页 |
| 1.1.2 肿瘤前转移微环境的概念 | 第10-11页 |
| 1.1.3 肿瘤前转移微环境形成的分子机制 | 第11-14页 |
| 1.1.4 肿瘤前转移微环境中的骨髓来源细胞 | 第14-15页 |
| 1.1.5 肿瘤前转移微环境的血管通透性 | 第15-16页 |
| 1.1.6 靶向肿瘤前转移微环境的治疗和展望 | 第16-18页 |
| 1.2 microRNA在肿瘤发生、发展过程中的异常调控和功能 | 第18-26页 |
| 1.2.1 microRNA的合成和作用机理 | 第18-20页 |
| 1.2.2 microRNA研究的新发现 | 第20-22页 |
| 1.2.3 microRNA在肿瘤微环境中的作用 | 第22-26页 |
| 1.2.4 靶向microRNA的抗肿瘤治疗 | 第26页 |
| 1.3 论文研究目的、内容和意义 | 第26-29页 |
| 1.3.1 论文研究目的 | 第26-27页 |
| 1.3.2 论文研究内容和意义 | 第27-29页 |
| 第2章 肿瘤前转移微环境中差异miRNAs的鉴定 | 第29-43页 |
| 2.1 本章引言 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-33页 |
| 2.2.1 细胞系和条件培养基的制备 | 第30页 |
| 2.2.2 肿瘤前转移模型的建立 | 第30页 |
| 2.2.3 总RNA提取和miRNAs芯片 | 第30-31页 |
| 2.2.4 cDNA逆转录和实时定量PCR | 第31-32页 |
| 2.2.5 分离肺成纤维细胞 | 第32页 |
| 2.2.6 miRNA探针原位杂交 | 第32-33页 |
| 2.3 实验结果 | 第33-40页 |
| 2.3.1 肿瘤前转移微环境miRNAs表达谱分析和差异mi RNAs鉴定 | 第33-37页 |
| 2.3.2 体内实验验证前转移微环境的差异miRNAs | 第37-39页 |
| 2.3.3 体外实验验证前转移微环境的差异miRNAs | 第39页 |
| 2.3.4 肿瘤前转移微环境中差异miRNAs的定位 | 第39-40页 |
| 2.4 本章小结与讨论 | 第40-43页 |
| 第3章 miR-30s参与肿瘤前转移微环境形成的分子机理 | 第43-63页 |
| 3.1 本章引言 | 第43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-48页 |
| 3.2.1 骨髓移植 | 第43-44页 |
| 3.2.2 免疫荧光 | 第44页 |
| 3.2.3 miRNAs转染肺成纤维细胞 | 第44页 |
| 3.2.4 BMDCs的分离、培养及体外BMDCs招募实验 | 第44-45页 |
| 3.2.5 明胶酶谱实验 | 第45页 |
| 3.2.6 体外血管通透性实验 | 第45-46页 |
| 3.2.7 载体构建和慢病毒包装 | 第46页 |
| 3.2.8 体内Evans蓝血管通透性实验 | 第46-47页 |
| 3.2.9 cDNA逆转录和qRT-PCR | 第47-48页 |
| 3.3 实验结果 | 第48-61页 |
| 3.3.1 miR-30s抑制前转移肺微环境招募VEGFR1+ BMDCs | 第48-54页 |
| 3.3.2 miR-30s招募BMDCs的分子机理 | 第54-57页 |
| 3.3.3 miR-30s降低前转移肺组织的血管通透性 | 第57-59页 |
| 3.3.4 miR-30s调控血管通透性的分子机理 | 第59-61页 |
| 3.4 本章小结与讨论 | 第61-63页 |
| 第4章 miR-30s对肿瘤转移的影响 | 第63-71页 |
| 4.1 本章引言 | 第63页 |
| 4.2 实验方法 | 第63-64页 |
| 4.2.1 肿瘤细胞滞留实验 | 第63-64页 |
| 4.2.2 肿瘤转移和荷瘤鼠生存期 | 第64页 |
| 4.2.3 总RNA提取、c DNA逆转录和qRT-PCR | 第64页 |
| 4.3 实验结果 | 第64-69页 |
| 4.3.1 miR-30s抑制肿瘤细胞在前转移肺中的滞留 | 第64-65页 |
| 4.3.2 miR-30s抑制黑色素瘤肺转移并延长荷瘤鼠的生存期 | 第65-69页 |
| 4.4 本章小结与讨论 | 第69-71页 |
| 第5章 鉴定参与肿瘤前转移微环境形成的miR-30s靶基因 | 第71-89页 |
| 5.1 本章引言 | 第71页 |
| 5.2 实验方法 | 第71-74页 |
| 5.2.1 miR-30s靶基因预测 | 第71页 |
| 5.2.2 总RNA提取、c DNA逆转录和qRT-PCR | 第71-72页 |
| 5.2.3 报告基因载体构建和荧光素酶报告基因实验 | 第72-73页 |
| 5.2.4 SDS-PAGE和免疫印迹 | 第73页 |
| 5.2.5 肿瘤转移和荷瘤鼠生存期 | 第73-74页 |
| 5.3 实验结果 | 第74-87页 |
| 5.3.1 筛选参与前转移微环境形成的miR-30s靶基因 | 第74-77页 |
| 5.3.2 验证miR-30s的靶基因 | 第77-81页 |
| 5.3.3 筛选参与前转移微环境形成的已报道的miR-30s靶基因 | 第81-84页 |
| 5.3.4 miR-30s的靶基因对肿瘤转移的影响 | 第84-87页 |
| 5.4 本章小结与讨论 | 第87-89页 |
| 第6章 miR-30s靶基因参与前转移微环境形成的分子机理 | 第89-107页 |
| 6.1 本章引言 | 第89页 |
| 6.2 实验方法 | 第89-91页 |
| 6.2.1 载体构建 | 第89-90页 |
| 6.2.2 酶联免疫吸附测定 | 第90-91页 |
| 6.2.3 体内凝集素-葡萄聚糖血管渗透实验 | 第91页 |
| 6.3 实验结果 | 第91-105页 |
| 6.3.1 miR-30s靶基因对BMDCs招募的影响 | 第91-94页 |
| 6.3.2 Rab38促进前转移微环境招募BMDCs | 第94-98页 |
| 6.3.3 miR-30s靶基因对前转移肺组织血管通透性的影响 | 第98-100页 |
| 6.3.4 Skp2提高前转移微环境的血管通透性 | 第100-105页 |
| 6.4 本章小结与讨论 | 第105-107页 |
| 第7章 讨论与展望 | 第107-113页 |
| 7.1 研究总结 | 第107-111页 |
| 7.2 需进一步开展的工作 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-125页 |
| 致谢 | 第125-127页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第127-128页 |
