| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-31页 |
| 1.1 前言 | 第14-15页 |
| 1.2 植物MADS类转录因子 | 第15-27页 |
| 1.2.1 MADS类转录因子的进化与分类 | 第15-19页 |
| 1.2.2 TypeⅠMADS类转录因子的生物学功能 | 第19-20页 |
| 1.2.3 TypeⅡMADS类转录因子的生物学功能 | 第20-22页 |
| 1.2.4 TypeⅡMADS类转录因子与其DNA结合靶标 | 第22-23页 |
| 1.2.5 TypeⅡMADS类转录因子的保守结构域 | 第23-24页 |
| 1.2.6 单子叶植物中的MADS-box转录因子 | 第24-27页 |
| 1.3 碱性亮氨酸拉链结构(bZIP)转录因子 | 第27-30页 |
| 1.4 立题依据与研究意义 | 第30-31页 |
| 第二章 材料与方法 | 第31-42页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.1 植物材料的来源与种植 | 第31页 |
| 2.1.2 植物材料的收取 | 第31页 |
| 2.1.3 菌株与质粒 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-42页 |
| 2.2.1 酵母的ONPG酶活检测应用于转录激活测试 | 第32-33页 |
| 2.2.2 GST Pull-down实验 | 第33-34页 |
| 2.2.2.1 Pull-down实验 | 第33页 |
| 2.2.2.2 免疫印迹分析(Western Blot) | 第33-34页 |
| 2.2.3 凝胶过滤色谱法分离蛋白复合物 | 第34-35页 |
| 2.2.3.1 米籽粒总蛋白抽提 | 第34页 |
| 2.2.3.2 凝胶过滤色谱法 | 第34-35页 |
| 2.2.4 农杆菌介导的转基因RNAi株系构建 | 第35-36页 |
| 2.2.5 转录组测序数据分析 | 第36-37页 |
| 2.2.6 籽粒蛋白成分分析方法 | 第37-38页 |
| 2.2.7 超薄切片及透射电镜观察籽粒胚乳细胞 | 第38-40页 |
| 2.2.7.1 超薄切片制作以及透射电镜的观察 | 第38-39页 |
| 2.2.7.2 蛋白体大小以及数量的统计分析 | 第39-40页 |
| 2.2.8 凝胶阻滞实验 | 第40页 |
| 2.2.9 基因枪瞬时转化洋葱表皮细胞应用于亚细胞定位以及转录激活能力测试 | 第40-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-71页 |
| 3.1 前期工作总结 | 第42-44页 |
| 3.2 ZmMADS47与O2蛋白互作验证 | 第44-47页 |
| 3.2.1 O2与ZmMADS47蛋白互作的GST Pull-down实验验证 | 第44-45页 |
| 3.2.2 免疫共沉淀实验验证ZmMADS47与O2蛋白互作 | 第45-46页 |
| 3.2.3 凝胶过滤色谱分离O2复合物 | 第46-47页 |
| 3.3 MADS-box protein的生物信息学分析 | 第47-49页 |
| 3.4 ZmMADS47与O2的表达谱分析 | 第49-51页 |
| 3.5 ZmMADS47的亚细胞定位 | 第51-52页 |
| 3.6 ZmMADS47转录激活能力的检测 | 第52-54页 |
| 3.7 ZmMADS47的RNAi转基因株系构建 | 第54页 |
| 3.8 RNAi株系中ZmMADS47基因抑制水平检测 | 第54-56页 |
| 3.9 ZmMADS47 RNAi株系的转录组表达谱分析 | 第56-57页 |
| 3.10 ZmMADS47 RNAi籽粒的表型观察 | 第57-60页 |
| 3.11 ZmMADS47 RNAi未成熟籽粒的透射电镜观察 | 第60-61页 |
| 3.12 ZmMADS47对醇溶蛋白启动子结合能力的检测 | 第61-66页 |
| 3.12.1 ZmMADS47对z1A的结合能力测试 | 第61-62页 |
| 3.12.2 ZmMADS47结合结构域的精确定位 | 第62-63页 |
| 3.12.3 ZmMADS47对z1A Z2结构域的冷探针竞争与突变扫描 | 第63-64页 |
| 3.12.4 ZmMADS47与O2对醇溶蛋白启动子的结合能力测试 | 第64-66页 |
| 3.13 ZmMADS47与O2互作的生物学意义探究 | 第66-71页 |
| 3.13.1 O2/ZmMADS47复合物与醇溶蛋白启动子的酶活测试 | 第66-67页 |
| 3.13.2 O2突变与ZmMADS47调控醇溶蛋白的酶活测试 | 第67-69页 |
| 3.13.3 O2与ZmMADS47调控50-kDγ-zein醇溶蛋白启动子的酶活测试 | 第69-70页 |
| 3.13.4 O2与ZmMADS47突变调控醇溶蛋白的酶活测试 | 第70-71页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第71-76页 |
| 4.1 ZmMADS47是一个α-zein和50-kD γ-zein的转录因子 | 第71-72页 |
| 4.2 ZmMADS47在进化过程中被得以招募来调控醇溶蛋白的表达 | 第72-73页 |
| 4.3 ZmMADS47通过构象的变化来发挥其功能 | 第73-76页 |
| 附件 | 第76-80页 |
| 1. 本实验中所使用的引物与探针 | 第76-77页 |
| 2. 本实验中所使用的引物序列 | 第77-78页 |
| 3. ZmMADS47基因全长cDNA序列 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-92页 |
| 作者在攻读博士学位期间公开发表的论文 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
