牛支原体流行病学调查及灭活疫苗研制
| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第14-17页 |
| 1.1 支原体特性 | 第14页 |
| 1.2 牛支原体 | 第14-15页 |
| 1.2.1 病原学诊断 | 第14-15页 |
| 1.2.2 血清学诊断 | 第15页 |
| 1.2.3 聚合酶链式反应(PCR) | 第15页 |
| 1.2.4 环介导等温扩增技术(LAMP) | 第15页 |
| 1.2.5 双向电泳技术 | 第15页 |
| 1.3 本研究目的及意义 | 第15-17页 |
| 2 中国牛支原体流行情况的调查 | 第17-23页 |
| 2.1 材料与方法 | 第17-18页 |
| 2.1.1 病料来源 | 第17页 |
| 2.1.2 试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 间接ELISA检测 | 第17页 |
| 2.1.4 PCR检测 | 第17-18页 |
| 2.1.5 培养基的制备 | 第18页 |
| 2.2 结果 | 第18-21页 |
| 2.2.1 各地区牛支原体血清学检测结果 | 第20页 |
| 2.2.2 牛病料及奶样PCR检测结果 | 第20-21页 |
| 2.3 讨论 | 第21-23页 |
| 3 牛支原体分离培养及其特性研究 | 第23-29页 |
| 3.1 材料 | 第23页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第23页 |
| 3.1.2 主要设备、器材 | 第23页 |
| 3.1.3 主要试剂、培养基 | 第23页 |
| 3.2 方法 | 第23-25页 |
| 3.2.1 牛支原体纯化 | 第23-24页 |
| 3.2.2 菌落的形态鉴定及染色 | 第24页 |
| 3.2.3 牛支原体生化指标测定 | 第24页 |
| 3.2.4 生长抑制试验 | 第24页 |
| 3.2.5 耐药性分析 | 第24页 |
| 3.2.6 进化分析 | 第24-25页 |
| 3.2.7 浓度测定及生长曲线的绘制 | 第25页 |
| 3.3 结果 | 第25-28页 |
| 3.3.1 牛支原体分离纯化 | 第25页 |
| 3.3.2 生化鉴定结果 | 第25-26页 |
| 3.3.3 血清生长抑制实验结果 | 第26页 |
| 3.3.4 耐药性分析 | 第26-27页 |
| 3.3.5 进化树 | 第27页 |
| 3.3.6 生长曲线及PH变化 | 第27-28页 |
| 3.4 讨论 | 第28-29页 |
| 4 牛支原体间接ELISA检测方法的建立 | 第29-35页 |
| 4.1 实验材料 | 第29页 |
| 4.2 方法 | 第29-31页 |
| 4.2.1 本试验中ELISA的基本方法 | 第29-30页 |
| 4.2.2 牛支原体间接ELISA包被抗原的制备 | 第30页 |
| 4.2.3 间接ELISA方法的建立 | 第30-31页 |
| 4.3 结果 | 第31-34页 |
| 4.3.1 BCA蛋白定量法 | 第31-32页 |
| 4.3.2 ELISA工作条件的确定 | 第32页 |
| 4.3.3 临界值的确定 | 第32页 |
| 4.3.4 特异性实验结果 | 第32-33页 |
| 4.3.5 敏感性实验结果 | 第33页 |
| 4.3.6 重复性实验 | 第33页 |
| 4.3.7 临床样品的检测结果 | 第33-34页 |
| 4.4 讨论 | 第34-35页 |
| 5 牛支原体动物模型的建立 | 第35-45页 |
| 5.1 材料与方法 | 第35-37页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第35页 |
| 5.1.2 实验方法 | 第35-37页 |
| 5.2 结果 | 第37-44页 |
| 5.2.1 临床症状 | 第37-39页 |
| 5.2.2 牛支原体分离培养结果 | 第39-40页 |
| 5.2.3 PCR检测结果 | 第40-41页 |
| 5.2.4 病理组织学观察 | 第41-42页 |
| 5.2.5 间接免疫荧光结果 | 第42-43页 |
| 5.2.6 血清学检测结果及抗体滴度的测定 | 第43-44页 |
| 5.3 讨论 | 第44-45页 |
| 6 牛支原体灭活疫苗的初步试验 | 第45-51页 |
| 6.1 材料和方法 | 第45-48页 |
| 6.1.1 菌株 | 第45页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第45页 |
| 6.1.3 疫苗的制备 | 第45页 |
| 6.1.4 试验动物 | 第45-46页 |
| 6.1.5 免疫计量及免疫程序 | 第46页 |
| 6.1.6 免疫指标评价及抗体消涨规律 | 第46-48页 |
| 6.2 结果 | 第48-49页 |
| 6.2.1 临床指标的监测 | 第48页 |
| 6.2.2 分菌及PCR检测结果 | 第48-49页 |
| 6.2.3 抗体水平检测结果 | 第49页 |
| 6.3 讨论 | 第49-51页 |
| 7 全文总结 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
