| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第10-20页 |
| 1.1 SMV的简介 | 第10-11页 |
| 1.2 NBS-LRR蛋白的结构及其在植物抗病免疫反应中的作用 | 第11-13页 |
| 1.3 植物一些NBS-LRR蛋白编码基因受miRNA的调控 | 第13-15页 |
| 1.4 利用超敏反应表型筛选抗病基因 | 第15页 |
| 1.5 非依赖连接克隆(LIC克隆) | 第15-16页 |
| 1.6 RLM-RACE简介 | 第16-18页 |
| 1.7 Dual-luciferase assay简介 | 第18-20页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第20-39页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第20-24页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.1.2 各种实验试剂配方 | 第20-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-39页 |
| 2.2.1 大豆SMV的侵染实验 | 第24-25页 |
| 2.2.2 总RNA及小RNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.3 利用qPCR实验检测miRNA | 第25-26页 |
| 2.2.4 Northern blot杂交法检测miRNA | 第26-28页 |
| 2.2.5 大豆cDNA的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.6 GmNH基因过表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.7 LIC克隆方法 | 第30-31页 |
| 2.2.8 农杆菌转化及侵染 | 第31-32页 |
| 2.2.9 DAB染色 | 第32页 |
| 2.2.10 蛋白质定量实验 | 第32页 |
| 2.2.11 考马斯亮蓝染色实验 | 第32-33页 |
| 2.2.12 Western Blot实验 | 第33-34页 |
| 2.2.13 RLM-RACE实验 | 第34页 |
| 2.2.14 大豆基因组DNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.15 构建miRNA过表达载体 | 第35页 |
| 2.2.16 构建靶标重组载体 | 第35-36页 |
| 2.2.17 构建STTM miRNA干扰载体 | 第36-37页 |
| 2.2.18 双荧光素酶检测分析实验(Dual-luciferase assay) | 第37-38页 |
| 2.2.19 Time course实验 | 第38-39页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第39-56页 |
| 3.1 SMV能够侵染大豆并具有致病表型 | 第39-40页 |
| 3.2 SMV侵染后大豆成熟miR2/9水平的变化 | 第40-41页 |
| 3.3 miR2/9预测的靶基因为大豆GmNH基因 | 第41页 |
| 3.4 GmNH基因的克隆和功能验证实验的设计 | 第41-43页 |
| 3.5 GmNH23为抗SMV基因 | 第43-48页 |
| 3.6 GmNH23对TMV具有抗性 | 第48-51页 |
| 3.7 Western Blot验证GmNH23的表达 | 第51-52页 |
| 3.8 GmNH23为miR2/9的靶标基因 | 第52-54页 |
| 3.9 SMV侵染后miR2/9和GmNH23表现出了拮抗表达模式 | 第54-56页 |
| 第四章 讨论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
| 附表 | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
