| 英文缩略词 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 家禽卵巢卵泡发育 | 第11-16页 |
| 1.1.1 鸡卵泡发育特征及过程 | 第11-12页 |
| 1.1.2 卵泡膜细胞和颗粒细胞 | 第12-13页 |
| 1.1.3 卵泡血管化及神经支配 | 第13-14页 |
| 1.1.4 鸡卵泡发育过程中的影响因素 | 第14-16页 |
| 1.1.4.1 影响卵泡发育的激素 | 第14-15页 |
| 1.1.4.2 影响卵泡发育的生长因子 | 第15-16页 |
| 1.2 MMP-13基因的生物学特征及在卵巢发育中的功能 | 第16-20页 |
| 1.2.1 MMP-13基因的生物学特征 | 第16-18页 |
| 1.2.1.1 MMPs家族的结构特点 | 第17-18页 |
| 1.2.1.2 MMPs基因的表达调节 | 第18页 |
| 1.2.2 MMP-13在卵巢发育中的功能 | 第18-20页 |
| 1.2.2.1 MMPs在卵泡发育周期中的作用 | 第19页 |
| 1.2.2.2 MMPs家族与卵泡发育中的血管发生 | 第19-20页 |
| 1.3 本研究的目的意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-42页 |
| 2.1 试验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验动物及样本采集 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器及厂商 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要试剂及来源 | 第22页 |
| 2.1.4 所用试剂的配制 | 第22-23页 |
| 2.1.5 主要分子生物学数据库及软件 | 第23页 |
| 2.2 方法 | 第23-41页 |
| 2.2.1 核酸的提取、回收及检测 | 第23-27页 |
| 2.2.1.1 鸡血液基因组提取 | 第23-24页 |
| 2.2.1.2 DNA产物回收 | 第24-25页 |
| 2.2.1.3 鸡卵巢RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.1.4 膜细胞和颗粒细胞RNA提取 | 第26页 |
| 2.2.1.5 RNA浓度和质量检测 | 第26-27页 |
| 2.2.2 实时荧光定量PCR检测 | 第27-29页 |
| 2.2.2.1 反转录获得cDNA | 第27页 |
| 2.2.2.2 实时荧光定量PCR | 第27-29页 |
| 2.2.3 Western Blotting检测 | 第29-32页 |
| 2.2.3.1 组织蛋白质提取 | 第29页 |
| 2.2.3.2 蛋白质浓度检测 | 第29-30页 |
| 2.2.3.3 蛋白质变性 | 第30页 |
| 2.2.3.4 蛋白电泳步骤 | 第30-32页 |
| 2.2.4 免疫组织化学方法检测 | 第32-34页 |
| 2.2.4.1 制作石蜡切片 | 第32页 |
| 2.2.4.2 免疫组化实验 | 第32-34页 |
| 2.2.5 删除载体的构建 | 第34-39页 |
| 2.2.5.1 删除载体的克隆转化及测序 | 第34-36页 |
| 2.2.5.1.1 基因启动子区的PCR扩增和回收 | 第34页 |
| 2.2.5.1.2 MMP-13基因启动子片段与pGL3-Basic Vector的连接 | 第34-35页 |
| 2.2.5.1.3 将连接产物转化感受态细胞 | 第35页 |
| 2.2.5.1.4 质粒DNA的制备与提取 | 第35-36页 |
| 2.2.5.2 不同删除片段的荧光素酶载体的构建 | 第36-38页 |
| 2.2.5.3 不同缺失片段去内毒素处理 | 第38-39页 |
| 2.2.5.3.1 去内毒素质粒的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.5.3.2 提取质粒浓度及质量检测 | 第39页 |
| 2.2.6 鸡卵泡颗粒细胞和膜细胞的分离培养 | 第39-40页 |
| 2.2.7 瞬时转染及双荧光素酶活性检测 | 第40-41页 |
| 2.2.7.1 Nanofection瞬时转染操作 | 第40页 |
| 2.2.7.2 双荧光素酶活性检测 | 第40-41页 |
| 2.3 统计与分析 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-55页 |
| 3.1 MMP-13基因mRNA和蛋白在鸡卵巢和卵泡发育过程中的表达 | 第42-46页 |
| 3.1.1 总RNA的提取 | 第42页 |
| 3.1.2 MMP-13 mRNA和蛋白在鸡卵巢开产前后的表达变化 | 第42-44页 |
| 3.1.3 MMP-13 mRNA和蛋白在鸡开产后不同卵泡中的表达变化 | 第44页 |
| 3.1.4 MMP-13蛋白在卵巢和卵泡中的免疫定位 | 第44-46页 |
| 3.2 MMP-13基因启动子区分析 | 第46-48页 |
| 3.2.1 鸡卵巢组织DNA提取 | 第46页 |
| 3.2.2 MMP-13基因 5′调控区片段扩增 | 第46-47页 |
| 3.2.3 pGL-MMP133340载体序列比对 | 第47页 |
| 3.2.4 MMP-13启动子区删除载体的构建 | 第47-48页 |
| 3.2.5 双荧光素酶分析MMP-13基因启动子区不同片段活性 | 第48页 |
| 3.3 MMP-13关键启动子区SNPs的鉴定及群体多态性检测 | 第48-52页 |
| 3.3.1 测序检测到MMP-13关键启动子区存在6个SNPs | 第48-50页 |
| 3.3.2 MMP-13基因启动子区在不同鸡种中的等位基因和基因型频率 | 第50-51页 |
| 3.3.3 MMP-13启动子区突变位点的单倍型频率分析 | 第51-52页 |
| 3.4 隐性白洛克群体中MMP-13启动子区SNPs位点与产蛋性能的关联分析 | 第52-55页 |
| 3.4.1 隐性白洛克群体中MMP-13启动子区SNPs位点连锁不平衡分析 | 第52页 |
| 3.4.2 隐性白洛克群体中MMP-13启动子区SNPs位点与产蛋性状关联分析 | 第52-53页 |
| 3.4.3 MMP-13启动子区多态位点对基因表达的影响 | 第53-54页 |
| 3.4.4 相关转录因子结合位点预测 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 4.1 MMP-13基因在鸡卵巢卵泡中的表达特征 | 第55-56页 |
| 4.2 MMP-13基因启动子区SNPs与产蛋性能的遗传学效应 | 第56-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 硕士期间发表的论文及专利申请情况 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
