| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-23页 |
| 1.1 抗体库技术概况 | 第9-16页 |
| 1.1.1 抗体库的构建 | 第9-10页 |
| 1.1.2 展示平台 | 第10-15页 |
| 1.1.3 筛选方法 | 第15-16页 |
| 1.1.4 问题与展望 | 第16页 |
| 1.2 VHH纳米抗体及其应用现状 | 第16-20页 |
| 1.2.1 纳米抗体的结构及特性 | 第16-17页 |
| 1.2.2 纳米抗体的应用现状 | 第17-20页 |
| 1.3 低氧诱导因子-1α | 第20-21页 |
| 1.3.1 HIF-1α 概述 | 第20-21页 |
| 1.3.2 HIF-1α 与肿瘤抑制 | 第21页 |
| 1.4 本课题的研究内容 | 第21-23页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第21-22页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 核糖体展示纳米抗体文库的构建以及鉴定 | 第23-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 实验动物，菌种及与载体 | 第23页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第23-25页 |
| 2.1.3 实验器材 | 第25-26页 |
| 2.1.4 培养基、溶液的配制及其灭菌方法 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-37页 |
| 2.2.1 淋巴细胞的分离 | 第27-28页 |
| 2.2.2 淋巴细胞总RNA的提取及RT-PCR | 第28-32页 |
| 2.2.3 geneШ 基因片段的扩增 | 第32-34页 |
| 2.2.4 重叠延伸PCR构建纳米抗体文库 | 第34页 |
| 2.2.5 纳米抗体文库的鉴定 | 第34-37页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第37-44页 |
| 2.3.1 淋巴细胞的分离 | 第37页 |
| 2.3.2 淋巴细胞总RNA的提取及RT-PCR | 第37-39页 |
| 2.3.3 geneШ 基因片段的扩增 | 第39-40页 |
| 2.3.4 重叠延伸PCR构建纳米抗体文库及库容量的估测 | 第40-41页 |
| 2.3.5 纳米抗体文库的鉴定 | 第41-44页 |
| 2.4 本章小结 | 第44-45页 |
| 第三章 HIF-1α-PAS-B抗原的制备 | 第45-53页 |
| 3.1 实验材料 | 第45-47页 |
| 3.1.1 载体与菌株 | 第45-46页 |
| 3.1.2 主要实验试剂 | 第46页 |
| 3.1.3 实验器材 | 第46页 |
| 3.1.4 培养基、溶液的配制及其灭菌方法 | 第46-47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-49页 |
| 3.2.1 HIF-1α-PAS-B蛋白的诱导表达及纯化 | 第47-48页 |
| 3.2.2 GST-HIF-1α-PAS-B蛋白的酶切及纯化 | 第48-49页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第49-52页 |
| 3.3.1 GST-HIF-1α-PAS-B蛋白纯化 | 第49-50页 |
| 3.3.2 HIF-1α-PAS-B蛋白的获得 | 第50-52页 |
| 3.4 本章小结 | 第52-53页 |
| 第四章 HIF-1α-PAS-B特异性纳米抗体的筛选 | 第53-61页 |
| 4.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 4.1.1 主要实验试剂 | 第53页 |
| 4.1.2 实验器材 | 第53-54页 |
| 4.1.3 培养基、溶液的配制及其灭菌方法 | 第54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-58页 |
| 4.2.1 纳米抗体文库的体外转录和翻译 | 第54-55页 |
| 4.2.2 体外筛选和RT-PCR过程 | 第55-56页 |
| 4.2.3 筛选后的鉴定 | 第56-58页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第58-60页 |
| 4.3.1 核糖体展示产物的富集筛选 | 第58页 |
| 4.3.2 阳性重组克隆的鉴定 | 第58-59页 |
| 4.3.3 Phage Elisa鉴定 | 第59-60页 |
| 4.4 本章小结 | 第60-61页 |
| 第五章 结论与展望 | 第61-63页 |
| 5.1 结论 | 第61页 |
| 5.2 展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
