| 摘要 | 第10-11页 |
| ABSREACT | 第11页 |
| 缩略符号说明 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-28页 |
| 1.1 引言 | 第13页 |
| 1.2 结核分枝杆菌的生物学特性 | 第13-14页 |
| 1.2.1 结核分枝杆菌的形态与染色 | 第13-14页 |
| 1.2.2 结核分枝杆菌的生化反应 | 第14页 |
| 1.3 结核分枝杆菌进化、复合群分类以及分类依据 | 第14-15页 |
| 1.3.1 结核分枝杆菌进化 | 第14页 |
| 1.3.2 复合群分类以及分类依据 | 第14-15页 |
| 1.4 结核分枝杆菌基因组介绍(对结核分枝杆菌中的国际标准菌株H37Rv的介绍) | 第15页 |
| 1.5 结核分枝杆菌致病性 | 第15-16页 |
| 1.6 结核病的现状 | 第16页 |
| 1.7 结核病特点 | 第16-17页 |
| 1.8 结合现状研究结核分枝杆菌的意义 | 第17页 |
| 1.9 新型药物的发现 | 第17-18页 |
| 1.10 结核分枝杆菌中的硝基还原酶 | 第18页 |
| 1.11 硝基还原酶 | 第18-23页 |
| 1.11.1 硝基还原酶的分类以及催化机制 | 第18-19页 |
| 1.11.2 硝基还原酶的生理功能 | 第19-20页 |
| 1.11.3 硝基还原酶在环境污染和人体健康方面的作用 | 第20-22页 |
| 1.11.3.1 硝基还原酶在生物方面的应用技术 | 第20-21页 |
| 1.11.3.2 硝基还原酶在癌症治疗方面的应用 | 第21-22页 |
| 1.11.4 硝基还原酶在抗药性中的作用 | 第22-23页 |
| 1.12 结核分枝杆菌中的硝基还原酶Rv3368c | 第23-25页 |
| 1.13 晶体的生长原理 | 第25-26页 |
| 1.14 本文研究的内容与意义 | 第26-28页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第28-43页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.2.1 实验载体质粒 | 第28-29页 |
| 2.2.2 实验菌株 | 第29页 |
| 2.3 实验仪器和耗材 | 第29-32页 |
| 2.3.1 实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.3.2 实验试剂 | 第30-31页 |
| 2.3.3 培养基和缓冲液 | 第31-32页 |
| 2.4 实验方法 | 第32-43页 |
| 2.4.1 原核表达载体的体外构建 | 第32-34页 |
| 2.4.2 重组质粒的转化 | 第34-36页 |
| 2.4.2.1 感受态细胞的制备与转化 | 第34-35页 |
| 2.4.2.2 重组质粒提取与鉴定 | 第35-36页 |
| 2.4.3 目的蛋白的表达纯化 | 第36-38页 |
| 2.4.3.1 目的蛋白的原核表达 | 第36页 |
| 2.4.3.2 硒代蛋白表达(代谢途径抑制) | 第36-37页 |
| 2.4.3.3 目的蛋白常用的纯化方法 | 第37-38页 |
| 2.4.4 重组蛋白的限制性酶切 | 第38页 |
| 2.4.5 晶体生长及结构解析 | 第38-40页 |
| 2.4.6 晶体衍射数据的收集与处理 | 第40-41页 |
| 2.4.7 等温量热滴定实验(Isothermal titration Calorimetry, ITC) | 第41-42页 |
| 2.4.8 荧光热稳定性实验(Thermal Shift Assay,TSA) | 第42页 |
| 2.4.9 分析超速离心 | 第42-43页 |
| 第三章 依赖FMN的硝基还原酶Rv3368c的蛋白纯化、结晶和结构解析 | 第43-54页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 Rv3368c蛋白的表达纯化 | 第43-48页 |
| 3.2.1 Rv3368c蛋白的表达纯化 | 第43-45页 |
| 3.2.2 Rv3368c蛋白的结晶 | 第45-48页 |
| 3.3 硒代蛋白Rv3368c的表达纯化和结晶 | 第48-51页 |
| 3.3.1 硒代蛋白Rv3368c的表达纯化 | 第48-49页 |
| 3.3.2 硒代蛋白Rv3368c的结晶 | 第49-51页 |
| 3.3.3 硒代蛋白Rv3368c的数据收集与处理 | 第51页 |
| 3.4 Rv3368c蛋白结构 | 第51-53页 |
| 3.5 本章小结和讨论 | 第53-54页 |
| 第四章 Rv3368c-FMN二元复合物结构解析、Rv3368c突变体和FMN结合验证、Rv3368c底物识别 | 第54-65页 |
| 4.1 引言 | 第54页 |
| 4.2 Rv3368c与大肠杆菌中的硝基还原酶(NTR)结构比较 | 第54-55页 |
| 4.3 Rv3368c蛋白与小分子FMN的结合实验 | 第55-56页 |
| 4.4 Rv3368c蛋白和小分子FMN生长 | 第56-61页 |
| 4.4.1 Rv3368c蛋白和小分子FMN共结晶 | 第56-57页 |
| 4.4.2 Rv3368c蛋白和小分子FMN共孵育的数据收集和处理 | 第57-61页 |
| 4.5 Rv3368c底物识别 | 第61-63页 |
| 4.6 Rv3368c、FMN、NADPH三复合物共晶生长和Rv3368c、FMN、NADPH、BT2043四复合物共晶生长 | 第63页 |
| 4.7 本章小结与讨论 | 第63-65页 |
| 第五章 工作总结与展望 | 第65-67页 |
| 5.1 工作总结 | 第65-66页 |
| 5.2 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第73页 |
